家蚕核型多角体病毒orf61基因缺失对病毒复制和各时期基因转录的影响

作者：薛圣杰; 李俊; 余海鹏; 张媛媛; 胡冬冰; ...家蚕核型多角体病毒orf61基因病毒复制基因转录调控多角体蛋白基因启动子

摘要：orf61是杆状病毒晚期表达的核心基因之一。为了研究家蚕核型多角体病毒（Bm NPV）orf61基因的功能,利用Red重组技术与Bac-to-Bac系统分别敲除和异位补回orf61基因,构建了orf61缺失型病毒orf61-ko-Bacmid以及补回型病毒orf61-reBacmid,然后分别转染家蚕培养细胞Bm N,调查orf61基因缺失对Bm NPV复制和不同时期基因转录的影响。检测orf61基因缺失型病毒转染Bm N细胞液上清中的病毒滴度为0,说明orf61基因缺失导致病毒不能形成有感染活性的芽生型病毒粒子（BV）;荧光定量PCR分析orf61基因缺失会显著地降低病毒基因组的复制水平,进而导致病毒各个时期基因转录水平极显著下降（P〈0.01）。此外,通过体外EMSA试验和构建双荧光素酶报告基因系统,检测ORF61蛋白对多角体蛋白基因polh启动子的调控作用,结果显示该蛋白质是polh基因转录的负调节因子。研究结果有助于深入阐释Bm NPV orf61基因在病毒基因组复制中的作用以及对极晚期表达的多角体蛋白基因polh的转录调控作用。

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