作者：靳晓丽 田新会 杜文华鹰嘴豆issr反应体系正交设计优化
摘要：鹰嘴豆（Cicer arietinum）ISSR反应体系的建立可以为鹰嘴豆种质资源遗传多样性分析、遗传图谱构建和基因定位提供理论依据和技术参考。本研究以CTAB法提取的鹰嘴豆DNA为模板,采用L16（4~5）正交设计直观分析法,对鹰嘴豆ISSR-PCR反应中的4个主要因素（Mg~（2＋）浓度,引物浓度,TaqDNA聚合酶浓度,dNTPs浓度）在4个水平上进行优化,并在最优ISSR-PCR反应体系的基础上对引物UBC826的最适退火温度进行筛选。结果表明：Mg2＋和引物浓度对PCR扩增结果有显著影响,dNTPs和Taq酶的浓度变化对PCR扩增结果无显著影响。鹰嘴豆ISSR-PCR优化反应体系（25μL）为：3mmol·L~（-1） Mg~（2＋）,0.2mmol·L~（-1） dNTP,0.24μmol·L~（-1）引物,2U Taq DNA聚合酶。UBC826最适退火温度为56℃。
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