口服幽门螺杆菌多价表位疫苗的构建及其免疫效果研究

作者：柯鸿; 牛晓娟; 潘龙瑞; 潘兴幽门螺杆菌多价表位疫苗尿素酶细胞毒素相关蛋白a

摘要：目的构建口服幽门螺杆菌多价表位疫苗CTB-HapA-UreA-UreB-CagA(CTB-HUUC),并初步研究其在BABL/c小鼠体内的免疫治疗效果。方法 文献查找幽门螺杆菌相关抗原的显性表位序列HpaA88-100、HpaA132-141、UreA27-53、UreA183-203、UreB229-251、UreB317-329、UreB321-339、UreB373-385、UreB438-452、UreB546-561、CagA149-164、CagA196-217,通过Linker将其串联,并在N端引入分子内佐剂CTB序列,构建重组质粒pET28a(+)/ctB-hpaA-ureA-ureB-cagA〔pET28a(+)/ctB-HUUC〕。再将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG进行诱导表达、层析纯化,获得高纯度的CTB-HUUC重组蛋白,并采用Western Blot对其进行鉴定。GM1-ELISA检测重组蛋白CTB-HUUC体外结合GM1的能力。6周龄BABL/c小鼠,感染幽门螺杆菌1次/d,连续感染4次;末次感染后4周,灌胃CTB-HUUC重组蛋白200μg/次,1次/周,连续免疫4次。末次免疫后2周,处死小鼠,取小鼠胃组织进行幽门螺杆菌培养计数。结果 成功获得高纯度的CTB-HUUC重组蛋白,Western blot检测CTB-HUUC可与抗幽门螺杆菌悉尼株(SS1株)小鼠血清及鼠抗CTB单抗产生特异性反应。GM1-ELISA检测重组蛋白CTB-HUUC体外可结合GM1,具有良好的佐剂活性。CTB-HUUC组小鼠胃组织进行幽门螺杆菌培养计数结果为6.14×10 3 CFU/g、CTB组为5.72×10 6 CFU/g、PBS组为6.70×10 6 CFU/g。结论 口服幽门螺杆菌多价表位疫苗CTB-HUUC对感染幽门螺杆菌的BABL/c小鼠具有显著的治疗效果。

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