作者：曾蓓蕾 杨得娟 罗鑫荣 任国胜 程巧染色质聚集ku70dna损伤
摘要：目的探讨DNA损伤结合蛋白DDB1/2复合物在Ku70缺失的条件下与双链断裂DNA（double-strand breaks,DSB）亲和力的变化及下调DDB1对DSB修复的影响。方法针对人类Ku70构建编码shRNA序列的重组腺病毒并感染细胞,建立Ku70蛋白表达沉默的细胞株,以博来霉素（bleomycin,Bleo）或新制癌菌素（neocarzinostatin,Ncs）诱导DNA双链断裂,利用DNA损伤修复蛋白与损伤染色质的高亲和力,分段提取细胞蛋白组分,Western blot检测DDB1/2在各组分的分布变化。免疫荧光检测诱导DNA双链断裂前后DDB1与损伤染色质亲和力的变化。沉默DDB1,Western blot检测在不同条件下γ-H2AX的去磷酸化效率。结果人乳腺癌MDA-MB-231细胞Ku70蛋白水平在Ku70shRNA重组腺病毒感染后4d显著下调,6d达到最低。与Ku70正常细胞相比,在Ku70沉默后诱导DSB,Western blot检测结果显示DDB1/2主要分布在与染色质紧密结合的组分,免疫荧光同样表现出其与染色质亲和力增高。并且在Ku缺失的条件下,Western blot显示下调DDB1能显著降低γ-H2AX去磷酸化效率（P〈0.01）。结论下调Ku70可促进DDB1/2在双链断裂DNA聚集,且下调DDB1影响DSB修复,说明DDB1/2可能参与了不依赖于Ku的双链断裂的修复途径。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
