作者：杨学飞; 刘亚娟; 高原; 孙贝贝; 马利纳; ...基因编辑本氏烟草gfp
摘要：CRISPR（clustered regulatory interspersed short palindromic repeat）/Cas9（CRISPR associated proteins）是源于原核生物的一种获得性免疫系统,广泛应用于细菌、真菌、动物和植物的基因编辑研究中。本研究是以转基因本氏烟草16C（16C transgenic Nicotiana benthamiana,16C-NB）为材料,利用CRISPR/Cas9技术实现对其GFP（green fluorescent protein）基因的编辑工作,使用PCR-RE（polymerase chain reaction-restriction enzyme）的方法检测了突变体,建立了本氏烟草CRISPR/Cas9基因敲除瞬时表达系统,进而探讨了CRISPR/Cas9系统在植物基因敲除中的应用。在本研究中,采用In-Fusion克隆技术获得了操作性强的中间载体,针对靶基因GFP设计特定靶位点并进行了基因突变实验,为将来开展其它植物内源基因的生物学功能研究提供了参考。
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