时间：2023-05-29 18:04:02
开篇：写作不仅是一种记录，更是一种创造，它让我们能够捕捉那些稍纵即逝的灵感，将它们永久地定格在纸上。下面是小编精心整理的12篇质量标准，希望这些内容能成为您创作过程中的良师益友，陪伴您不断探索和进步。
【关键词】红芪胶囊；红景天苷；高效液相色谱法
红芪胶囊是由红景天、黄芪、红参、山药等中药的提取物加工制成的胶囊。近年国内外研究表明高山红景天具有滋补强壮、抗缺氧、抗疲劳、抗衰老及增强脑力、体力机能等方面的特殊功效［1,2］。红景天中红景天苷为其主要活性成分之一［3,4］，红景天苷的化学结构［5］和药理作用［6］较为明确。本实验参照文献［7,8］采用HPLC法对红芪胶囊的主要活性成分红景天苷的检测方法进行了研究。本方法结果准确，灵敏度高，可作为红芪胶囊的质量控制。
1仪器与试药
日本岛津LC210Atvp高效液相色谱；SPD210A紫外-可见检测器；N-2000色谱工作站；分析天平；甲醇（色谱纯）；水（重蒸馏水）；红景天苷对照品（中国药品生物制品检定所）；红芪胶囊（自制）。
2方法与结果
2．1色谱条件流动相：甲醇-水（15：85）；检测波长：223nm；流速：1ml/min；进样量：5μl；柱温：45℃。
2．2对照品溶液的制备精密称取红景天苷对照品适量，加甲醇制成1ml含0.108mg的红景天苷溶液。
2．3供试品溶液的制备取本品适量，研细，精密称取0.35g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，放置，取上清液经微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液作供试品溶液。
2．4阴性对照液的制备按处方比例称取红景天外其他组分，按供试品溶液制备方法制备即得。
2．5阴性液干扰试验精密吸取供试品液、阴性对照液和对照品液各5μl注入液相色谱仪中，由色谱图可知，在与对照品色谱保留时间相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的包谱峰出现；而阴性液在此峰位无吸收，对本品中红景天苷的测定无干扰。色谱图见图1。
图1色谱图2．6标准曲线的绘制精密吸取红景天苷对照品溶液（0.108mg/ml）1、2、3、4、5、6、7ml各置于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，各取5μl注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定色谱峰面积。以色谱峰面积（A）对进样量（μg）进行线性回归，其回归方程为A=743222X+414.06，r=0.9997。结果表明，在此色谱条件下，红景天苷在进样量为0.054～0.378μg范围内，其重量与峰面积呈良好的线性关系。
2．7精密度试验精密吸取2.3项下配制供试品溶液5μl，连续进样6次，测得红景天苷色谱峰面积，计算相对偏差RSD为1.65%。
2．8重现性试验精密称取样品6份,按2.3项下配制供试品溶液，分别进样5μl，测得红景天苷色谱峰面积，计算相对偏差RSD为1.22%。
2．9回收率试验精密称取同一批已知红景天苷含量的样品6份，精密加入红景天苷对照品，按2.3项下配制供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定，结果见表1。表1回收率试验（略）
2．10样品含量测定取样品3批，按2.3项下方法配制供试品,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入高效液相色谱仪，按2.1项下色谱条件测定，以外标法计算每粒胶囊中红景天苷的含量，结果见表2。表2样品中红景天苷含量测定（略）
3讨论
红景天苷甲醇液经波长扫描，在223nm处有最大吸收，故以223nm作为测定波长。本试验选用高效液相色谱条件，分离效果好，阴性无干扰，精密度方法、稳定性均符合要求，回收率高。
【参考文献】
1丁树利，朱兆仪.滋补壮阳中草药红景天属植物研究进展.国外医学·植物药分册，1992，7（5）:198.
2张无敌，刘世清.藏药红景天的开发利用.中国民族民间医药杂志，1995，12：7-8.
3徐宝军，郑毅男，李向高，等.红景天属植物研究新进展.中药材，2000，23（9）：580-584.
4王曙，王峰鹏.红景天属植物化学成分研究概述.天然产物研究与开发，1991，3（4）：58-65.
5吴维春.长白山珍贵药用植物高山红景天.长春：吉林科技出版社，1987，86.
6徐宝军.红景天属植物研究新进展.中药材，2000，23（9）：580-582.
关键词：审计人 审计质量标准 内部审计
审计环境、审计机构、审计人员、审计程序、审计标准、审计手段等都对内部审计质量有直接或间接联系。而作为其中最活跃的审计人，以及作为审计人员行为指南的审计质量标准，我们认为对内部审计质量起着举足轻重的作用，因为所有审计行为都是通过审计人员起作用，而所有审计人员行为的依据便是审计质量标准。
一、影响内部审计质量的因素――审计人
（一）内部审计人员的现状
1、内部审计机构人员构成相对单一
以电力企业内部审计机构为例，人员构成基本上是财务、工程、营销三个专业，且内审人员往往是一专而不多能；懂财务审计知识的多，掌握现代管理知识、科技知识，具备综合分析能力的复合型人才少，整体上应对复杂审计工作局面的能力比较弱；综合分析能力不足。
2、专业技能欠缺，造成审计结论不精准
表现在一些审计人员局限于账面审计而忽略账外内容，不能将企业经营特点、存在的问题进行深度披露与揭示；一些审计人员未对企业内控制度深入审查和测试，而在审计结论上直接采用被审单位所提供资料，从而造成了很大的审计风险。
3、审计风险意识淡薄
在审计领域持续拓展的大环境下，审计任务压力增加，人员缺乏、任务繁重的矛盾造成审计人员疲于应付，无暇兼顾到审计质量，致使出现实施的审计项目不少，而审计精品不多，审计成果质量不高，审计未能审深审透的现象存在，埋下风险隐患。
4、审计理论钻研气氛不浓，未形成常态的学习机制
知识更新速度不及业务增长速度，对国内外内审发展状况、经验技术等知识了解甚少，甚至对日常工作常用法律、法规不熟悉不精通，审计发现和分析风险问题的能力较弱， 审计结论的依据模糊不清。
5、审计职业道德需要提升
受来自各方面的因素影响，审计人员在审计过程中，对审计结果不能做到以客观的态度进行评价，针对审计发现的问题，缺乏揭示和披露的勇气，往往大事化小、小事化了，随意性较大，无法向高层管理层提供真实的信息渠道，影响管理者的决策。
（二）内审人员应具备和期望达到的能力
对于内审人员存在的种种局限，有些是体制问题造成，在短期内可能无法改变，但对于作为具有主观能动性的审计人员来说，却能通过自身的努力和学习获得以下能力，最大限度地保证审计质量：
1、专业胜任能力
业务能力。高素质的审计人员，首先要精通工作中常用到的专业知识，会计和审计理论及实务构成审计人员知识结构的主体。以计算机为代表的信息技术的飞速发展和广泛运用给人们的传统生活方式和工作方式带来了猛烈的冲击和震撼，企业资源计划（ERP）、电子商务的推广和运用，使企业内部控制发生了改变，审计人员必须面对并适应变化，不断调整自己的知识结构；与此同时，主审除具备专业经验和全面的业务能力外，还应作好团结、协调工作，形成审计组的合力。
沟通或者说处理人际关系的能力。良好而有效的沟通应注意以下两点：注意沟通立场，多站在被审单位立场考虑问题，多想想“假如我是被审单位经营者，我会怎么办”，换位思考更能有助于审计人员拓宽思路，考量审计建议的可行性；参与式审计。要与被审计者建立一种更加协调的工作关系，培养一种温馨和情感上的关系，甚至参与审计建议的实施，给被审计人提供发表自己意见的机会，审计报告中重点放在问题产生原因和可能造成的影响，多采用建设性措辞。
2、审计的悟性
对同一个审计事项，有的人能一眼看穿本质，而有的人却浮在事项的表面不能参透，这也许存在专业技能差别，但我们认为更可能是悟性使然。何谓悟性？悟性即是一个人通过对事物的观察分析而发现其本质的能力，悟性高的人通常都是将自己的体会和感受融合其中，获得属于自己的东西。工作中的悟性并非可遇不可求，而是可以在工作实践中收获的。
3、工作兴趣和主观能动性
在审计实践中，有许多的内审人员都感觉到内审工作容易与他人产生矛盾，开展困难，对审计工作缺乏行动力，缺少做好内审工作的意愿。那是因为他们误解了内审的职能，没有感受到工作的乐趣，审计的魅力，所以不能发挥主观能动性。而从一个微小的审计项目来看，当你的工作得到管理层的认可，建议得到采纳，企业的某一项管理因你而有所改善，某一项风险因你而避免，这样的成就感是其他工作所体会不到的。
4、团队协作精神
审计是一项尤其需要团队合作的工作，审计质量的高低，不能代表其中个人的审计能力，而代表着审计组集体的智慧，是审计组的整体素质与能力的表现。要把不同水平的审计人员科学、合理的组织起来，使其成为一个有机的整体，作用于审计过程，以获得最佳的综合效果，从而保证审计质量。
二、影响内部审计质量的因素――审计质量标准
（一）内部审计质量标准的现状
我国虽然制定了统一的内部审计基本准则以及一些具体准则和实务指南，某些行业和企业也针对部分审计业务制定了实务操作指南和审计办法，但内部审计的范围之广，内容之丰富，审计对象之多样性，使内部审计难以有统一而具体的质量标准，因此在实际执行审计项目时，较多地靠审计人员的主观判断，致使内部审计工作有较大的弹性，不同审计人员对同一审计事项审计的深度有所差异，造成审计结果有所不同，致使内部审计工作质量难以保证。
对审计质量标准执行较弱，主要表现在：有的“重审计实施、轻审计准备”，套用通用的审计方案，与企业现实不符，可操作性不强，造成审计重点不突出，审计人员进入状态慢，影响审计质量。
部分审计人员在实施现场审计时，未按照内部审计准则、企业内部规章制度及审计方案的要求，实施必要的审计程序，从而导致个别项目出现重大“漏审”现象。
有的“重审计问题、轻审计规范”，对审计结论的客观性和真实性留下了风险隐患；有的“重审计报告、轻成果落实”，造成审计流于形式。
内部审计质量控制的广度和深度不够，出现内部审计的无风险状态，对内部审计的检查处于真空地带，客观上也导致内审质量不高。
针对内部审计而言，虽已颁布了《内部审计具体准则―内部审计质量控制》，且某些行业和企业也制定了相应的审计质量管理办法，但在实践过程中，多数企业做得不到位。在实务中，内部审计自身督导和质量管理尚且欠缺，更遑论外部评价，审计责任追究更是流于形式。
（二）对于审计质量标准的思考
从社会审计的标准化审计程序中得到启发，内部审计是否也应该思考：面对水平不一的审计人员，制定怎样的审计质量标准，才能最大限度地消除审计人员水平的差异？诚然，内部审计的审计范围广，审计对象和审计内容具有多样性，但内部审计可以寻求项目质量和审计效率的最佳结合点 。良好的控制制度可以在一定程度上预防和弥补现场审计人员素质与经验的不足，减少现场审计人员工作的随意性，可以及时发现与弥补现场审计人员的错误与疏漏，保证审计工作的质量。
例如：某公司内部审计部门在制定审计底稿质量标准时，尝试编制标准化审计工作底稿模板，模板的编制注重可操作性，其应用要求审计人员采用标准的作业流程，使无经验的审计人员也能理解工作意图、掌握正确方法，以减少个体理解与判断差异的影响，模板的编制根据被审单位行业特点，参考任期经济责任审计指南及历次审计底稿，对其他应收款审计内容、重点和方法在底稿中进行体现，不仅强化了过程控制，有助于提高审计质量，而且省却了底稿中大量表格的编制和重复性语言的叙述，提高了审计效率。这种对制定审计作业质量标准的尝试对其他企业或可有所参考。
三、结束语
内部审计如舟，质量是舵，审计人员是舵手。在当前内部审计转型时期，要加强审计质量管理，促进企业的发展和自身的成长，突出人才培养和审计标准化建设是必由之路，也是每一个审计人应思考的永恒主题。
参考文献：
[1]张庆龙.对我国当前内部审计几个问题的思考[J].中国内部审计，2011
【摘要】 目的 对糯米藤根药材质量标准进行初步研究。方法 研究糯米藤根药材粉末显微特征，并以标准药材为对照，研究建立糯米藤根药材的薄层鉴别方法。采用药典方法检测药材中水分、灰分等含量，测定糯米藤根药材水溶性及醇溶性浸出物含量。结果 建立了糯米藤根药材粉末的显微鉴别以及药材的薄层鉴别方法，并确定了糯米藤根药材浸出物含量。结论 研究结果为完善糯米藤根药材质量控制方法，建立该药材国家标准奠定了实验基础。
【关键词】 糯米藤根;质量标准;显微鉴别;薄层鉴别
【Abstract】 Objective To study of the quality standards of Memorialis hirta(Bl.)Wedd.Methods The powder microstructure of Memorialis hirta(Bl.)Wedd was researched，and thin layer chromatography(TLC)was established taking standard medicines as control.The content of moisture and ash residue was measured by the related method in pharmacopoeia，and the content of watersoluble extractive and 50% ethanolsoluble extractive from Memorialis hirta(Bl.)Wedd was also detected.Results Microidentification method of the drug powder and TLC identification method of the crude drug were established，and the content of both extracts from Memorialis hirta(Bl.)Wedd was determined.Conclusion This research lays the experimental basis for improving quality control methods of Memorialis hirta(Bl.)Wedd and establishing the national standards.
【Key words】 Memorialis hirta(Bl.)Wedd;quality standard;microscopic identification;thinlayer chromatography
糯米藤根为荨麻科蔓苧麻属植物糯米团Memorialis hirta(Bl.)Wedd.的干燥根[13]，具有健脾消食，清热利湿之功效，临床用于消化不良，食积胃痛，脾虚带下等症，外用可治疮疖、创伤等[1，4]。糯米藤根分布于陕西、福建、江西、广西、四川、贵州及云南等省区，主产雅安、宜宾、重庆等地[2，5]。对糯米藤根药材的质量控制仅《四川省中药材标准》1987年版有简单的外观性状描述[2]，2005年版中国药典尚未收载。本课题组对糯米藤根药材质量标准进行了初步研究，建立了糯米藤根药材粉末的显微鉴别方法;以糯米藤根标准药材为对照，确定了糯米藤根药材的薄层鉴别方法;测定了糯米藤根药材水溶性及醇溶性浸出物含量。研究结果为完善糯米藤根药材质量控制方法，建立该药材国家标准奠定了实验基础。
1 仪器与试药
1.1 仪器
奥林巴斯CH20显微镜(日本);硅胶G薄层预制板(中国青岛)。
1.2 材料与试药
糯米藤根药材采集或购于四川各地，产地见表2.由成都中医药大学裴瑾教授鉴定为荨麻科蔓苧麻属植物糯米团Memorialis hirta(Bl.)Wedd.的干燥根。其余所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 粉末特征
照《中国药典》2005版一部显微鉴别法(附录Ⅱ C)[6]，观察糯米藤根药材粉末特征。鉴定结果与文献[4，78]报道一致。
本品粉末为黄白色。导管多为网纹导管和具缘纹孔导管，直径20～51 μm.淀粉粒多为单粒，类球形、长圆形、卵圆形或不规则形，直径10～40 μm，脐点裂缝状或点状，层纹不明显，复粒少，多为2 分粒组成。纤维长棱形，多不完整，淡黄色，直径约35 μm，壁厚约13 μm，胞腔狭窄。不规则团块状物棕黄色或红棕色，大小不一(图1)。
2.2 薄层鉴别
取糯米藤根粉末3 g，加乙醇100 ml，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 ml使之溶解，用乙酸乙酯提取3次(20 ml、15 ml、10 ml)，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使之溶解，作为供试品溶液。另取糯米藤根对照药材3 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各2～4 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯乙酸乙酯甲酸(7︰2︰1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%硫酸乙醇溶液，105 ℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(图2)。另以三氯甲烷甲醇甲酸(24︰3︰4)为展开剂进行验证，展开，取出，晾干，喷以5%硫酸乙醇溶液，置105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(图3)。
2.3 检查
2.3.1 水分 照《中国药典》2005年版一部水分测定法(附录Ⅸ H 第一法)测定，结果见表1.10批糯米藤根药材中水分平均含量为15.15%.
2.3.2 总灰分 照《中国药典》2005版一部灰分测定法(附录Ⅸ K)测定，结果见表1.10批糯米藤根药材总灰分平均含量为9.69%.
2.3.3 酸不溶性灰分 取糯米藤根药材样品，按中国药典2005年版一部酸不溶性灰分测定法(附录Ⅸ K)测定，结果见表1.10批糯米藤根药材酸不溶性灰分平均含量为2.88%.
2.4 浸出物测定
2.4.1 水溶性浸出物测定 照《中国药典》2005版一部浸出物测定法(附录ⅩA)热浸法测定，结果见表1.10批糯米藤根药材水溶性浸出物平均含量为27.86%.
2.4.2 醇溶性浸出物测定 以产地为重庆的药材进行研究，确定最佳溶剂。分别以水、30%、50%﹑70%、95%乙醇为溶剂，按中国药典2005年版一部浸出物项下热浸法测定，见表2.结果表明，以50%乙醇为溶剂测得的浸出物含量相对较高，且操作简便，数据重复性较好，因此我们选择50%乙醇为溶剂测定醇溶性浸出物。以50%乙醇为溶剂，照《中国药典》2005版一部浸出物测定法(附录Ⅹ A)热浸法测定，结果见表1.10批糯米藤根药材醇溶性浸出物平均含量为14.13%.表2 水及不同浓度乙醇浸出物含量(n=3)表1 水分、灰分、浸出物测定结果(n=3)
3 讨论
糯米藤根中含有大量淀粉类成分，当以水或含水量高的乙醇作溶剂测定其浸出物含量时，溶液因粘稠难于过滤，造成操作困难，数据重复性差;因此，我们兼顾浸出物含量和操作简便等因素，选择50%乙醇作溶剂。
进行糯米藤根薄层鉴别时，选用了三氯甲烷甲醇体系和甲苯乙酸乙酯体系，调节比例后，三氯甲烷甲醇体系可见明显的6个点，甲苯乙酸乙酯体系可见明显的9个点。但两个体系中的点都有一定的拖尾现象，为达到良好的呈点性，我们在体系中又加入甲酸，所得的分离效果理想。综合考虑我们最后选择甲苯乙酸乙酯甲酸(7︰2︰1)为糯米藤根的薄层鉴别条件。
糯米藤根生于湿润、肥沃和阳光充足的土坎、矮草丛中或石缝中，分布于陕西、福建、江西、广西、四川、贵州及云南等省区，主产雅安、宜宾、重庆等地[2，5]。但该药材尚未收载入药典标准，在其栽培、加工及销售过程中缺乏适当的质量控制方法，制约了其发展。本课题研究结果为制订切实可行的糯米藤根药材质量标准，促进其深层次开发利用提供了一定的科学依据。
参考文献
[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志:23卷二分册[M].北京:科学出版社，1995:267.
[2] 四川省卫生厅.四川省中药材标准[M].成都:四川人民出版社，1987:277278.
[3] 江苏新医学院.中药大辞典:下册[M].上海:上海人民出版社，1977:2733.
[4] 全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编:上册[M].北京:人民卫生出版社，1976:941.
[5] 全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编:上册[M].2版.北京:人民卫生出版社，1996:969.
[6] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2005年版一部[M].北京:化学工业出版社，2005:附录18.
方法：采用HPLC法对制剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re进行含量测定。
结果：人参皂苷Rg1和人参皂苷Re在规定进样量范围内，线性关系良好、稳定性良好，回收率合格。
结论：该方法准确，可靠，可行性及重复性良好，可作为控制补中益气颗粒质量的办法。
关键词：补中益气 颗粒 质量标准 HPLC
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.11.538
【中图分类号】R2 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2014）11-0318-01
补中益气配方颗粒由黄芪、白术、陈皮、升麻、柴胡、人参、炙甘草、当归组成。具有补中益气、升阳举陷之功。主治脾胃气虚，四肢倦怠，气虚下陷，脱肛久痢等症 [1]。
为控制该制剂的内在质量，确保临床用药安全有效，本文应用高效液相色谱法对人参中主要有效成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Re进行了含量测定 [2，3]。
1 实验材料与试剂
1.1 色谱条件。色谱柱：Lichrospher-C18（江苏汉邦科技有限公司，200×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（1∶4）；检测波长：203nm；柱温：35℃；流速：1.0ml/min [4]。
1.2 对照品溶液的制备。取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品适量，加甲醇制成每1ml各含0.2mg的溶液，即得。
1.3 供试品溶液的制备。取本品约3g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，超声处理30分钟，放冷，摇匀，滤过，残渣加水10ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取4次，每次10ml，合并正丁醇液，用氨试液洗脱2次，每次20ml，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇稀释至10ml量瓶中定量，摇匀，滤过，即得。
1.4 阴性对照溶液的制备。取缺人参的阴性对照样品约3g，精密称定，按供试品溶液制备方法，同法制成阴性对照溶液。分别精密吸取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10ul，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定。
2 方法学验证
供试品溶液色谱峰中，在与人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品相应的保留时间有吸收峰，而阴性对照溶液则在相应的保留时间无吸收峰出现，说明阴性对照无干扰。
2.1 线性关系考察。
2.1.1 人参皂苷Rg1。分别精密吸取人参皂苷Rg1对照品溶液（0.2130mg/ml）2、4、6、8ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配成不同浓度的系列对照品溶液，分别精密吸取溶液各10μl，注入液相色谱仪，得回归方程为：Y=358.26X-4.62，r=0.9994，结果表明：人参皂苷Rg1对照品进样量的范围内，良好的线性关系。
2.1.2 人参皂苷Re。分别精密吸取人参皂苷Re对照品溶液（0.1726mg/ml）2、4、6、8ml置10ml量瓶中，参照2.1.1法色谱条件测定，得回归方程为：Y=294.90X+2.40，r=0.9996，结果表明：人参皂苷Re对照品进样量在0.3452―1.7260μg范围内，呈良好的线性关系。
2.2 精密度试验。分别精密吸取人参皂苷Rg1对照品溶液（0.2130mg/ml）、人参皂苷Re对照品溶液（0.1726mg/ml）各5ul，按上述色谱条件重复进样5次，分别测定人参皂苷Rg1、人参皂苷Re峰面积积分值，计算其RSD分别为0.33%、0.36%。结果表明：精密度良好。
2.3 重复性试验。取补中益气颗粒（批号200911）约3g，精密称定，平行6份，按供试品溶液的制备方法制成供试液，分别进样10μl，分别测得人参皂苷Rg1、人参皂苷Re峰面积积分值并计算其总量，结果表明补中益气颗粒中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re总量的平均含量为0.0442%，RSD为1.45%。
2.4 稳定性试验。取补中益气颗粒（批号为200911）的供试品溶液，分别于0、1、2、4、8h，分别进样10ul，测定人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的峰面积，计算其RSD分别为0.68%、0.78%。结果表明：样品溶液在8小时内稳定。
2.5 回收率试验。取已知含量的样品（批号200911）1.50g，精密称定，分别加入人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品适量，按供试品溶液的制备方法制备加样回收供试品溶液，分别进样10μl，测定，以下列公式计算回收率，结果见表1，2。
表1 人参皂苷Rg1回收率试验
表2 人参皂苷Re回收率试验
试验结果表明：回收率在96%-100%之间，加样回收率良好。
3 实验结果
样品测定：取样品约3g，精密称定，按质量标准正文[含量测定]项下操作，结果见表3。
表3 样品的含量测定结果
上述结果，补中益气颗粒中人参皂苷Rg1与人参皂苷Re总量为0.409-0.441mg/g，暂定本品每1g含人参以人参皂苷Rg1（C42H72O14）人参皂苷Re（C48H82O18）计，不得少于0.30mg。
4 结论与讨论
本文曾采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器对方中黄芪进行含量测定，结果黄芪甲苷与相邻的色谱峰没有完全分离，有重叠现象，故暂不对黄芪中黄芪甲苷进行含量测定 [5，6]。
由于黄芪中黄芪甲苷的含量测定有干扰，后参考相关文献，采用乙腈-水（1∶4）为流动相；检测波长：203nm；对方中人参皂苷Rg1与人参皂苷Re的总量进行了测定，结果该法方法简便、专属性强及重现性好，结果准确可靠，可用于该制剂的质量控制和分析。
参考文献
[1] 湖南省中医药研究所编.《脾胃论》注释[M].北京：人民卫生出版社，1976
[2] 江阴天江药业科研部，等.中药配方颗粒质量标准（鉴定方法）.2007
[3] 江阴天江药业科研部，等.中药配方颗粒质量标准（含量测定方法）.2007
[4] 王幕邹.常用中草药高效液相色谱分析[M].北京：科学出版社.1998.171
目的测定健脑补肾胶囊中桂皮醛的含量，制定健脑补肾胶囊的质量标准。方法采用高效液相色谱（HPLC）法测定健脑补肾胶囊中桂皮醛的含量。结果桂皮醛在7.70～38.5 μg/ml浓度范围内线性关系良好、精密度高、稳定性好、重复性符合要求，经加样回收率实验，桂皮醛平均回收率为99.00%，RSD为1.56%，表明该方法的准确度高。结论所研究的方法能较好地测出健脑补肾胶囊中桂皮醛的含量，并可用以有效控制健脑补肾胶囊的质量。
【关键词】 健脑补肾胶囊； 桂皮醛； 高效液相色谱法
本品来源于健脑补肾丸［1］，健脑补肾丸为中药保护品种，为更好地促进吸收，笔者研制了健脑补肾胶囊，并在制定其质量标准时增加了含量测定项。采用高效液相色谱法，对方中主要成分肉桂、桂枝进行含量控制。参照《中国药典》［2］2005年版Ⅰ部肉桂药材含量测定方法，建立高效液相色谱法测定本品中桂皮醛含量的方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器AG-135型电子分析天平（梅特勒），高效液相色谱仪（LC-10AT），SPD-10Avp检测器，Maxsil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；乙腈-水（35∶75）为流动相；检测波长为290 nm；流速1.0ml/min；柱温25℃。
1.2 对照品桂皮醛（中国药品生物制品检定所，约2 ml， 710-9005）。归一化法测定，以5倍量标准浓度进样，本品纯度为99.23%。
1.3 试剂乙腈为色谱纯，水为自制重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
1.4 样品由本实验室制备。
2 方法与结果
2.1 色谱条件选择
2.1.1 检测波长选择精密称取桂皮醛对照品适量，加甲醇制成每毫升含15 μg的溶液，照分光光度法（《中国药典》2005年版Ⅱ部附录Ⅳ A），在波长200～400 nm的范围内扫描，结果波长为290 nm时桂皮醛有最大吸收。参照《中国药典》2005年版Ⅰ部肉桂含量测定项下色谱条件，因此选择290 nm作为桂皮醛的紫外检测波长。
2.1.2 流动相选择参照有关参考文献，初步选定乙腈-水作为桂皮醛含量测定流动相系统，经梯度洗脱遴选，最终确定乙腈-水（35∶75）为流动相。
2.2 样品处理条件的选择
2.2.1 提取溶剂选择取本品内容物约0.6 g，共3份，精密称定，置锥形瓶中，分别精密加入甲醇、乙醇、氯仿25 ml；称定重量，超声处理（120 W，40 kHz）30 min，取出，放冷，再称定重量，以同种溶剂补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。各吸取20 μl注入液相色谱仪，测定。结果以甲醇、乙醇处理样品时，桂皮醛含量无明显差异，但乙醇处理样品，提取物质较多，桂皮醛峰处有干扰，以氯仿处理样品，提取不完全，以甲醇处理样品，桂皮醛获得良好分离，故选择以甲醇作为提取溶剂。
2.2.2 提取时间选择取本品内容物约0.6 g，精密称定，共3份，各置锥形瓶中，精密加甲醇25 ml，称定重量，分别超声处理20，30，40 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量。摇匀，滤过，取续滤液，即得。各吸取20 μl注入液相色谱仪，测定。结果表明，超声处理30，40 min桂皮醛含量无明显差异，桂皮醛基本提取完全，因此确定该样品超声时间为30 min。
2.2.3 供试品溶液制备取装量差异项下本品内容物约0.6 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，称定重量，超声处理30 min，取出，放冷，再称定重量，以甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3 线性关系的考察精密称取桂皮醛对照品20 mg（19.25 mg），置50 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密吸取5 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，再分别精密量取 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml各置10 ml量瓶中，以甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液，分别吸取上述对照品溶液，进样(20 μl定量环)，测定峰面积，记录色谱图在7.70～38.5 μg/ml浓度范围内，以色谱峰面积对样品进样浓度作曲线(见图1)。得回归方程为：Y=159 919x-14 402，r=0.999 9。
以上结果表明，在7.70～38.5μg/ml范围内，桂皮醛峰面积值与进样浓度有良好的线性关系。
2.4 阴性对照实验取不含肉桂和桂枝的阴性试制样品0.6 g，精密称定，同“供试品溶液制备”项下，同法处理后，制得阴性对照液，分别取阴性对照液、供试品溶液、对照品溶液各进样20 μl，记录色谱图。
结果表明，在阴性对照图谱中，桂皮醛峰处无干扰。
2.5 精密度实验取桂皮醛对照品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，连续进样6次，峰面积积分值的RSD为0.81%，表明仪器的精密度良好。
2.6 稳定性实验取同一份供试品溶液分别于0，2，4，6，8，12 h进样，结果表明供试品溶液在12 h内峰面积RSD为0.48%，稳定性良好。
2.7 重复性实验取同一批号的样品6份，分别按供试品制备项下方法制备，用不同仪器测定。结果表明，平均含量为0.98 mg/g，RSD为1.17%。实验方法的重复性良好。
2.8 回收率实验取已知含量的健脑补肾胶囊内容物6份，每份约0.3 g，精密称定，置于25ml量瓶中，分别精密加入桂皮醛对照品溶液（0.32 mg/ml） 1.0 ml，再精密加入甲醇24 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失得重量，摇匀，滤过，注入液相色谱仪，测定，平均回收率为99.00%，RSD为1.56%，加样回收率良好。回收率（%）＝(实测值－样品含量)/对照品加入量×100%
2.9 3批样品测定取3批样品，按质量标准草案拟订方法测定，桂皮醛含量结果见表1。表1 健脑补肾胶囊样品中桂皮醛含量测定结果（略）
3 讨论
样品中桂皮醛在7.70～38.5 μg/ml浓度范围内线性关系良好、精密度高、稳定性好、重复性符合要求。经加样回收率实验，桂皮醛平均回收率为99.00%，RSD为1.56%。本实验方法具分离效果好，灵敏、快速、准确的优点，能较好地测出健脑补肾胶囊中桂皮醛的含量，可有效控制健脑补肾胶囊的质量。
【参考文献】
［1］《中华人民共和国卫生部 药品标准》中药成方制剂第16册·健脑补肾丸质量标准［S］.［标准号：WS3-B-3088-98］：131.
关键词：复方垂盆草胶囊；岩白菜素；TLC；HPLC；质量标准
中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1673-2197(2008)08-000-00
垂盆草胶囊是《中国卫生部药品标准》中药成方制剂第七册品种“复方垂盆草冲剂”(WS3-B-1391-93)基础上新研制的中药制剂，由垂盆草清膏，矮地茶清膏组成。它能够清热解毒，活血利湿，降低谷丙转氨酶，可用于急性肝炎及迁延性肝炎、慢性肝炎的活动期[1]。为了有效控制本品质量，在复方垂盆草冲剂原标准的基础上，用TLC鉴定矮地茶、HPLC法测定岩白菜素的含量，建立起复方垂盆草胶囊的质量标准。
1 仪器及试药
1.1 仪器
日本岛津LC-2010高效液相色谱仪，Lcsolution工作站，日本AND GR-202电子分析天平，超声波清洗器(CQX25-06，50HZ，上海必能信超声有限公司)
1.2 试药
复方垂盆草胶囊为广西强寿药业公司提供，阴性对照品为自制；岩白菜素对照品(批号：1532-200202，供含量测定用)；均由中国药品生物制品检定所提供；硅胶G(青岛海洋化工厂)；甲醇为色谱纯，其他实试剂为AR级；水为重蒸馏水。
2 方法与结果
取本品内容物1g，加甲醇20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1mL，作为供试品溶液；取岩白菜素对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。按同法制备得的缺矮地茶阴性对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(5∶4∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁-2%铁氰化钾(1∶1)的混合溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；缺矮地茶阴性对照品溶液，在与对照品色谱相应的位置上无相同颜色的斑点(见图1)。
1 2 3 4 5
图1 复方垂盆草胶囊薄层色谱1~3.样品(sample)(批号：070605)，4.岩白菜素(Bergenin)，5.阴性样品(negative sample)
3 结果
3.1 色谱条件
色谱柱：岛津VP-ODS C18柱(4.6μm×250nm，5μm)；甲醇-水(20：80)为流动相；检测波长为275nm。理论板数按岩白菜素峰计算应不低于4000。
3.2 对照品溶液的制备
精密称取岩白菜素对照品适量，加甲醇制成每1mL含50μg的溶液，即得。
3.3 供试品溶液的制备
取本品内容物0.5g，精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇45mL，超声处理30min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。
3.4 线性关系考察
精密称取岩白菜素对照品10.40mg，置100mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释到刻度，摇匀，作为对照品溶液(104μg/mL)。精密量取1.25、2.5、5、8mL，分别置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别作为对照品溶液(浓度分别为：83.2μg/mL、52μg/mL、26μg/mL、13μg/mL)。按3.1的色谱条件分别进样10μL测定。以芍药苷对照品进样量(μg)为横坐标(X)、峰面积积分值为纵坐标(Y)绘制标准曲线，结果提示：进样量在0.13μg～1.04μg范围内，岩白菜素的浓度与峰面积呈良好的线性关系。回归方程为：Y=2841.5X361854(r=0.9995)。
3.5 精密度试验
取对照品溶液(52μg/mL)，按上述色谱条件，连续进样5次，测定峰面积积分值，结果RSD为0.5%(n=5)。试验结果表明，本法精密度较好。
3.6 稳定性试验
取同一供试品(批号070605)溶液按上述方法，每隔3h进样一次，共5次，测定峰面积积分值，结果RSD为0.8%(n=5)。试验结果表明，在15h内待测物稳定。
3.7 重复性试验
取同一供试品(批号070605)按上述方法测定6份，结果6份岩白菜素的平均含量为6.31mg/g，RSD=1.0%。试验结果表明，本法重复性较好。
3.8 加样回收试验
精密称取“重复性试验”项下的复方垂盆草胶囊(批号070605)内容物约0.25g(岩白菜素含量为6.31mg/g)，平行取样6份，分别精密加入浓度为1.51mg/mL岩白菜素对照品溶液(精密称定岩白菜素15.10mg置10mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。)1.0mL，按正文拟订的方法制备供试品溶液、测定，计算回收率，结果平均回收率为98.47%，RSD=1.2%(n=6)，符合定量分析的要求。结果见表1。
3.9 阴性干扰试验
取缺矮地茶的阴性样品0.5g，精密称定，按3.3供试品制备的方法制备并按3.1色谱条件测定，结果阴性对照样品在岩白菜素峰位置无吸收峰，表明处方中的其他成分对本品含量测定无阴性干扰(见图2)。
图2 A岩白菜素对照品 B样品
C阴性样品 1 岩白菜素
3.10 样品测定
取不同批号的样品3批，按3.1、3.2、3.3项色谱条件及对照品和供试品溶液的制备方法检测，并计算岩白菜素的含量，结果见表2。
4 讨论
测定波长及流动相的选择参考《中国药典》2005年版一部“矮地茶”项下的含量测定[2]部分，所测定的成分为岩白菜素，其检测波长为275nm，流动相为甲醇-水(20∶80)，经试验，结果岩白菜素与其相邻峰的分离效果良好，故选定275nm作为检测波长，甲醇-水(20∶80)作为流动相。
该质量控制方法简便可靠、精密度高、分离效果好，可用于垂盆草胶囊质量控制。
参考文献：
[关键词] 活络健骨胶囊；白芍；青风藤；芍药苷；薄层色谱法；高效液相色谱法
[中图分类号]R286 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）06（a）-038-02
Study on quality standards for Huoluojiangu Capsules
LEI Li-ming1，WANG Xian-jiao2，ZHOU Jia-mao1,GUO Ai-xiu1,JIANG Yun-kai1，HU Zhi-xiang1,CHEN Hai-yang1
(1.Department of Pharmacy, Hunan Environment-Biological Polytechnic，Hengyang 421005, China;2.Hengyang Institute for Drug Control,Hengyang 421001, China)
[Abstract] Objective: To establish quality standards for Huoluojiangu Capsules. Methods: Radix Paeoniae Alba and Caulis Sinomenii in Huoluojiangu Capsules were identified by TLC. The content of paeoniflorin in preperation was determined by HPLC.Results: The spots on TLC plates were clear without interference in the blank reference. The methodological study showed that a good linear correlation existed in the rang of 0.16~0.95 μg of paeoniflorin(r=0.999 7).The average recovery of paeoniflorin was98.9%(n=5) with RSD of 0.96%. Conclusion:The methods are sensitive, simple, accurate and can be used for quality control of Huoluojiangu Capsules.
[Key words] Huoluojiangu Capsules；Radix Paeoniae Alba；Caulis Sinomenii；Paeoniflorin; TLC; HPLC
活络健骨胶囊由青风藤、海风藤、白芍、骨碎补、乳香、没药、全蝎、蜈蚣、土鳖等18味中药组成。处方系治疗风湿关节病的师传经验秘方，经30多年临床实践，吸收现代医学新成果，不断总结与改进，形成被临床许多病例验证取得满意疗效的复方制剂。不仅对风湿性关节炎疗效较佳，对腰腿痛、坐骨神经痛、肌肉病变、骨质增生、股骨头坏死及骨外伤均有较好疗效[1]。药理实验证实具有良好的抗炎消肿[2]和镇痛作用[3]，对大鼠佐剂性关节炎中白细胞介素6及前列腺E2的生成有显著抑制作用[4]。为了控制产品质量，通过实验研究，我们建立了青风藤、白芍的薄层色谱鉴别方法和芍药苷的HPLC含量测定方法[5]。
1 仪器与试药
1.1仪器
高效液相色谱仪：Waters 717高效液相色谱仪；检测器：Waters 2487双波长紫外检测器；Agilent SB-C18柱；HS2000色谱数据工作站（杭州英谱科技开发有限公司）。台湾艾柯纯水机。Mettler AG135电子分析天平。939薄层制板器（重庆南岸贝尔德仪器技术厂）。
1.2试药
芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110736-200525）；活络健骨胶囊（自制）；各味药材购自衡阳市老百姓大药房，均经衡阳市药检所王先教副主任药师鉴定。乙腈（色谱纯）、磷酸（分析纯）、水为超纯水，其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 薄层鉴别
2.1.1 白芍取胶囊内容物2 g，加甲醇10 ml，回流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取白芍药材1 g，加甲醇5 ml，回流提取30 min，提取液滤过作为对照药材溶液。再取不含白芍的处方样品照供试品溶液的制备方法，制备空白样品溶液。按照《中国药典》附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（20∶5∶10∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，随即观察，在供试品色谱中，与白芍对照药材色谱相应的位置上，分别显相同的蓝紫色斑点，空白样品无干扰。
2.1.2 青风藤取胶囊内容物2 g，加乙醇10 ml，回流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取青风藤药材2 g，加乙醇10 ml，回流提取30 min，提取液滤过作为对照药材溶液。再取不含青风藤的处方样品照供试品溶液的制备方法，制备空白样品溶液。按照《中国药典》附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以浓氨水饱和20 min，再以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-氨水（2∶4∶2∶0.5）为展开剂，展开，展距10 cm，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾溶液，在供试品色谱中，与青风藤对照药材色谱相应的位置上，分别显相同的橙红色斑点，空白样品无干扰。
2.2 含量测定
2.2.1色谱条件Agilent SB C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm)。柱温：30℃。流速1.4 ml/min。流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（13∶87）。检测波长：230 nm。进样量：10 μl，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2 000。
2.2.2 对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成67.6 μg/ml的溶液，即得。
2.2.3 供试溶液的制备取本品10粒（约5 g），研细，置100 ml量瓶中，加甲醇适量，回流30 min，滤过至100 ml量瓶中，加甲醇至刻度，再精密量取2.0 ml至100 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。
2.2.4 阴性对照试验取不含白芍的处方，按制备工艺制成缺白芍的阴性对照品，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。精密吸取10 μl注入液相色谱仪，按上述方法测定，结果表明阴性对照品的色谱图在芍药苷相应的保留时间无干扰峰（见图1）。
（A：芍药苷对照品;B:活络健骨胶囊供试品;C:缺白芍的阴性供试品）
2.2.5 线性关系考察精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成浓度分别为15.86，31.72，47.58，63.44，79.30，95.16 μg/ml的溶液，分别精密吸取上述各对照品溶液10 μl，注入液相色谱仪，测定。以对照品溶液进样量（μg）为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程Y＝1.97×106X＋2.92×105，r＝0.999 7。表明芍药苷进样量在0.16~0.95 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.2.6 精密度试验精密吸取同一对照品溶液10 μl，重复进样6次，测定峰面积，结果RSD为1.19%。
2.2.7 稳定性试验分别取同一放置0，4，8，12，24 h的供试品溶液和对照品溶液进样测定，对照品峰面积的RSD为0.89%，供试品的芍药苷峰面积RSD为2.13%，说明芍药苷在24 h内稳定。
2.2.8 重复性试验对同一批样品按上述的含量测定方法进行6次平行提取测定，计算含量，结果表明，供试品的芍药苷峰面积RSD为1.33%。说明方法重复性良好。
2.2.9 回收率试验精密量取芍药苷对照品溶液适量，加入到已知芍药苷含量的的复方活络健骨胶囊中，按供试品含量测定项下方法操作，制备供试品溶液，测定芍药苷的含量，计算回收率。芍药苷平均回收率为98.9%(n=5)，RSD为0.96%（表1）。
2.2.10样品测定结果按上述方法测定样品3批，样品含量见表2，含量均在1.550 mg/粒以上。
3讨论
活络健骨胶囊处方中的药味较多，给其中药味的薄层鉴别带来较大的困难，通过大量的薄层条件和样品的前处理方法的摸索试验，得出了薄层效果较好、重复性好的青风藤、白芍的薄层条件，并对几批样品进行了鉴别。结果表明，这两味药材的薄层色谱鉴别方法良好，可作为活络健骨胶囊质量控制的方法之一。
活络健骨胶囊中青风藤和白芍的用药量最大，本研究选择芍药苷作为含量测定的指标。在供试品的制备过程中，采用了比较成熟的回流提取方式，操作简便。经方法学研究验证，采用高效液相色谱法对处方中的芍药苷进行含量测定，操作简便、结果准确、重现性好，具有专属性，能够有效地控制产品质量，可作为活络健骨胶囊质量标准中含量测定的方法。
[参考文献]
[1]周家茂，吴石头.复方活络健骨胶囊治疗坐骨神经痛58例临床研究[J].中华实用医药杂志，2005，5(11):1077.
[2]周家茂，严奉祥，全建设，等.活络健骨胶囊抗炎效应的实验研究[J].中国医师杂志，2006，8(5):631.
[3]周家茂，严奉祥，全建设，等.活络健骨胶囊镇痛试验的药效学研究[J].中国中医药信息杂志，2006，13(4):25.
[4]周家茂，严奉祥，雷黎明，等.活络健骨胶囊对大鼠佐剂性关节炎的抗炎免疫效应[J].中国临床康复，2006，10(27):48.
[5]阎向东，裴林，李延昌.健骨蠲痛胶囊质量标准的研究[J].中国实验方剂学杂志，2007，13(2):4.
【关键词】 肝泰片 质量标准 没食子酸 高效液相色谱
肝泰片是由珠子草、黄芪、甘草等几味中药组成的复方制剂，具有舒肝利胆，清热解毒，扶正祛邪之功效，临床上用于乙型和丙型肝炎的治疗，取得了较好的疗效。为了增强对其质量的可控性，我们制订了对方中珠子草、甘草薄层鉴别方法，并采用HPLC法对珠子草所含没食子酸进行了含量测定。实验结果表明，本方法简便，专属性强，重复性好，可有效控制该制剂的质量。
1 仪器与试药
岛津LC-10AVP高效液相色谱仪（包括SPD-10AVP二极管阵列检测器，LC-10AT二元泵）；FA2004N电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；珠子草、甘草对照药材（中国药品生物制品检定所）；没食子酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0831-9501）；肝泰片（我院自制制剂，批号20050201，20050412，20050608）；硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂)；CQX25-12超声波清洗器（上海必能信超声有限公司）；甲醇（色谱纯），重蒸水，其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 珠子草的薄层鉴别取本品内容物约1 g，加甲醇10 ml，超声处理10 min，过滤，滤液作为供试品溶液。另取珠子草对照药材0.5 g，加甲醇10 ml，如上法操作，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版Ⅰ部附录ⅥB）试验，吸取上述溶液各5 μl，分别点于硅胶G薄层板上，以环已烷－氯仿－醋酸乙酯(20∶5∶5)上行展开、取出、挥干溶剂，喷10％硫酸乙醇溶液，105℃烘5 min，日光下检视，样品供试液色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上有相同颜色的斑点，见图1。阴性对照液无干扰。
2.2 甘草的薄层鉴别取本品内容物约1 g，加稀乙醇10 ml，超声提取15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材0.2 g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法（《中国药典》2005年版Ⅰ部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸（12∶4∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图2。阴性对照液无干扰。
2.3 珠子草中没食子酸的含量测定
2.3.1 色谱条件 ODS C18分析柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）； 检测波长:270 nm；流动相:A 甲醇，B 0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱条件：0～15 min，A-B（10:90），15～17 min，A-B（90:10），17～35 min，A-B（10:90）；流速1.0 ml·min-1； 柱温室温；进样量20μl。理论塔板数按没食子酸对照品计算大于5 000。
2.3.2 供试品溶液的制备 取本品30片，除去包衣，研细，精密称定，求得平均装量后，混匀，精密称取内容物适量（约500 mg），置25 ml容量瓶中，加入30%甲醇溶液约25 ml，称定重量，加热回流2 h，放冷，用30%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液再经0.45 μm微孔滤膜过滤后，即得。
2.3.3 对照品溶液的制备 精密称取减压干燥至恒重的没食子酸对照品，加30%甲醇制成41.6 μg·ml-1的对照品溶液。
2.3.4 阴性对照溶液的制备 取不含珠子草的阴性样品，按供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照液各20 μl，分别注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，结果阴性对对照在没食子酸相应的保留时间处无干扰，色谱图见图3。
1.没食子酸对照品 2.阴性对照品 3.肝泰片样品
图3 高效液相色谱图
2.3.5 线性关系的考察 分别精密吸取上述没食子酸对照品溶液0.1， 0.2， 0.25，0.5，0.75，1.0 ml ，分别置25 ml容量瓶中，用30%甲醇稀释至刻度，摇匀，各进样20 μl，依次注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积积分值，以峰面积积分值为纵坐标，对照品进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=62 059.84X-35 650.77，r=0.999 9(n=6），结果表明没食子酸在4.16～41.6 μg浓度范围内与峰面积呈良好线性关系。
2.3.6 稳定性实验 取供试品溶液，分别于配制后0，2，4，8，12 h，依样品测定法测定，结果其峰面积积分值的RSD=0.90%，可见供试品溶液在12 h内基本稳定。
2.3.7 精密度实验 精密吸取“2.3”项下对照品溶液20 μl，重复进样5次，测定其峰面积的RSD=0.60%。
2.3.8 重复性实验 取同一批号肝泰片，平行制备5份样品，按样品测定法测定，结果每片含没食子酸平均值为3.812 4 mg(RSD=0.65%，n=5)。
2.3.9 加样回收率实验 精密称取已知含量的同一批样品0.1 g，精确加入没食子酸对照品溶液适量(2.33 μg·ml-1)，按样品溶液的制备方法操作，测定其含量，并计算平均回收率为100.31%，RSD=0.69%(n=5)。
2.3.10 样品测定 按样品测定方法测定3批样品，测定结果见表1。表1 样品含量测定结果
3 讨论
【关键词】 三参胶囊；，，质量标准；，，薄层色谱；，，高效液相色谱
摘要：目的建立三参胶囊的质量标准。方法采用薄层色谱法对丹参、人参、制首乌进行了定性鉴别，采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定了胶囊中丹参素钠的含量，采用Shimpack VP－ODS C18柱（5 μm，150 mm×4.6 mm）；检测波长280 nm；流动相：0.5%冰醋酸-甲醇（94∶6）；流速：1.0 ml・min-1；柱温：30℃。结果此法线性范围0.110 9～1.663 5μg，r=0.999 9；丹参素钠的平均回收率为98.82%（RSD=1.45%，n=5）。结论该方法稳定、可靠，可作为该制剂的质量控制方法。
关键词：三参胶囊； 质量标准； 薄层色谱； 高效液相色谱
Abstract：Objective To develop a quality standard for Sanshen capsule. MethodsTLC was used to identify the ingredients such as Danshen Root Ginseng Root and Tuber Fleeceflower Root respectively . Meanwhile， the content of Danshensu in Sanshen capsule was determined by RPHPLC with Shim-pack VP－ODS C18（5 μm，150 mm×4.6mm） .The detection wavelength was 280 nm；0.5%Acetic acid-Methanol（94∶6）was used as mobile phase， the rate of 1.0 ml・min-1and the column temperature was at 30℃.ResultsThe method was linear within the range of 0.110 9～1.663 5 μg，（r=0.999 9）. The average recovery of Danshensu was 98.82%，（RSD＝1.45%，n=5）.ConclusionThe method is accurate，reliable，and can be used for quality control of the production.
Key words：Sanshen capsule; Quality standard; TLC； HPLC
三参胶囊由丹参、三七、人参、制首乌等8味药组成，此方属于医院临床经验方，为更好发挥本方疗效，满足临床不断扩大的需求，现按中药新药6类注册要求研制开发，制成胶囊剂。本方功能主治为破瘀消，扶正祛邪。临床用于治疗气滞血瘀型及气虚血瘀型肺癌为主的恶性肿瘤。本文对方中丹参、制首乌、人参、三七进行了薄层色谱鉴别研究；采用RPHPLC法测定方中主药丹参中丹参素钠的含量，研究的方法简便、快速、重复性好，可作为本品质量控制方法。现报道如下：
1 仪器与试药
岛津LC10ATvp液相色谱仪，SPDM10Avp检测器，浙江大学2010色谱工作站；sartoriusBP211D电子天平（感量0.1 mg；0.01 mg，载量210 g；80 g）；autoscienceAS5150A超声波清洗器；TGL-16G高速离心机；939全自动薄层制板器，ZF90型暗箱紫外透射仪（上海顾村电光仪器厂）。丹参素钠（110855200304，供含量测定用），中国药品生物制品检定所提供。丹参酮ⅡA（0766200213），中国药品生物制品检定所提供。人参二醇（0701200109，供鉴别用），中国药品生物制品检定所提供。人参三醇（0702200009，供鉴别用），中国药品生物制品检定所提供。何首乌对照药材（09349704），中国药品生物制品检定所提供。三参胶囊，批号20030401，20030402，20030403；硅胶G由青岛海洋化工厂生产，水为重蒸馏水；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。所有药材均购于市场，经检验均符合《中国药典》2000年版Ⅰ部各药材项下的规定。
2 方法与结果
2.1 定性鉴别
2.1.1 丹参的薄层色谱鉴别［11］取本品2.5 g，加乙醚10 ml，超声处理10 min，滤过，残留物备用，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯适量使溶解，作为供试品溶液。另取丹参酮ⅡA对照品，加醋酸乙酯制成每毫升含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2000版Ⅰ部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯（19∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图1a。
2.1.2 制首乌的薄层色谱鉴别［2~3］
取本品2.5 g，加甲醇50 ml，超声处理15 min，滤过，滤液水浴挥干，残渣加水10 ml使溶解，再加盐酸2 ml，置水浴上加热回流30 min，立即冷却，用乙醚提取两次，20 ml/次，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取何首乌对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2000版Ⅰ部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（15∶2∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，见图1b。再置氨蒸气中熏数分钟后，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图1c。
2.1.3 人参、三七的薄层色谱鉴别 取本品5 g，加7％硫酸溶液100 ml，置水浴上加热回流1 h，放冷，用石油醚（30～60℃）振摇提取3次，50 ml/次，合并石油醚液，挥干，残渣加0.5 ml无水乙醇使溶解，作为供试品溶液。另取人参二醇、人参三醇对照品，加无水乙醇制成每毫升各含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2000版Ⅰ部附录VIB）试验，吸取上述供试品溶液10 μl，对照品溶液5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿乙醚（1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图1d。
图1 丹参、制首乌、人参、三七的薄层色谱鉴别（略）
2.2 含量测定［4］
2.2.1 色谱条件 Shimpack VPODS C18柱（5 μm，150 mm×4.6 mm）；流动相：0.5％冰醋酸甲醇（94∶6）；流速：1.0 ml・min-1；检测波长280 nm；柱温：30℃；进样量：10 μl。
2.2.2 对照品溶液的制备精密称取丹参素钠对照品适量，加水制成每毫升含0.1 mg的溶液，即得。
2.2.3 样品溶液制备 取本品内容物，研细，取0.5 g，精密称定，置25 ml量瓶中，加水约20 ml，超声处理（功率150 W，频率50KHz）30 min，取出，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液离心，即得。
2.2.4 系统适应性实验
取样品溶液10 μl，注入高效液相色谱仪测试，丹参素钠的保留时间为10 min左右，理论板数以丹参素钠峰计大于3 000，丹参素钠峰与相邻峰分离度大于1.5。见图2b。
2.2.5 线性关系考察
精密称取丹参素钠对照品适量，加水制成每毫升含丹参素钠0.110 9 mg 的溶液，摇匀，作为对照品溶液，分别精密吸取对照品溶液1，2，4，8，15 μl，进样测定。分别以进样量（μg）为横坐标（X），峰面积（A）为纵坐标（Y）作图，进行回归分析。丹参素钠回归方程为：Y=4.634 1×102+9.813 17×105X，相关系数：r=0.999 9。结果表明丹参素钠进样量在0.110 9～1.663 5 μg范围内与峰面积呈很好的线性关系。
2.2.6 阴性对照实验
按处方制备缺丹参的阴性样品。依照“2.2”项下方法制成阴性样品溶液。取供试品溶液、对照品溶液（每毫升含丹参素钠0.110 9 mg）、阴性样品溶液各10 μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，测定结果为供试品溶液在与对照品溶液相同位置的地方出峰，且分离效果较好，缺丹参阴性样品溶液无干扰。结果见图2。
2.2.7 精密度实验 精密吸取对照品溶液（每毫升参素钠0.110 mg）10 μl，连续进样5次，记录峰面积，结果丹参素钠平均峰面积为1 145 667，RSD=0.44%。
2.2.8 重复性实验
取同一批号样品5份，按样品测定方法测定，结果样品中丹参素钠的平均含量为5.79 mg・g-1，RSD=0.698%表明本法重复性良好。
2.2.9 稳定性实验 取同一批号的样品适量，按依照“2.2.3”项下方法制成供试品溶液，于室温下保存，按上述色谱条件测定方法于制备完成后放置不同时间精密吸取10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图，考察其稳定性，结果供试品平均峰面积为1 285 530.7，RSD=1.82%。可知样品溶液在16 h内稳定。
2.2.10 加样回收实验 精密称取丹参素钠对照品适量，加水制成每毫升含丹参素钠0.110 9 mg的溶液，精密称取样品（丹参素钠含量为5.79 mg・g-1）适量，5份，分别精密加入丹参素钠对照品溶液（C＝1.086 mg・ml-1）1.5 ml，再分别加甲醇20 ml，按样品含量测定方法测定，计算回收率。丹参素钠的平均回收率为98.82%，RSD=1.45%。结果见表1。
图2 对照品（a）、样品（b）、阴性样品（c）色谱图（略）
表1 丹参素钠含量测定加样回收率实验结果（略）
2.2.11 样品测定
取样品3批，分别按依照“2.2.3”项下方法制成供试品溶液；精密称取丹参素钠对照品适量，加水制成每毫升参素钠0.110 9 mg的溶液，作为对照品溶液。分别吸取供试品溶液和对照品溶液各10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见表2。
表2 样品含量测定结果（略）
*为每粒中平均含量
3 讨论
3.1 关于薄层鉴别 采用以上方法对三参胶囊进行薄层色谱鉴别，重现性好，阴性实验无干扰，经多批样品鉴别，均能检出与对照相同的斑点。同时我们也对方中莪术、土鳖虫的薄层色谱鉴别进行了研究，结果分离效果不好，且阴性有干扰，故未收入正文。
3.2 检测波长的选择 取丹参素钠对照品溶液及阴性溶液，分别进行紫外扫描（190～370 nm），丹参素钠峰在280 nm波长处均有最大吸收，而阴性对照的吸收较小，故选择280 nm作为检测波长。
3.3 提取溶剂的考察 曾分别用乙醇、稀乙醇、甲醇、水作为提取溶剂进行考察，丹参素钠含量分别为5.21，4.26，4.63，5.98 mg・g-1，结果以水为提取溶剂时，丹参素钠的含量最高，故选择水为提取溶剂。
3.4 提取时间的考察 取同批样品内容物，研细，取0.5 g，3份，精密称定，置25 ml量瓶中，分别加水20 ml，超声处理（150w，50kHz）15，30，45 min，进行测定，结果丹参素钠的含量分别为4.22，5.98，5.99 mg・g-1。超声处理30 min后含量几无变化，试验选择提取时间为30 min。
参考文献
［1］ 郑 萍，谢笑天，孟东华，等.中药丹参中丹参素、丹参酮ⅡA的提取及质量研究［J］.云南师范大学学报，2004，24（4）：50.
［2］ 覃 晓，黄红林.龟鹿补肾口服液何首乌薄层鉴别方法的改进［J］.华夏医学，2003，16（4）：566.
【关键词】 大黄；黄芩；薄层鉴别；质量控制
石黄清火丸是我院老中医的协定处方，经过多年临床应用，疗效满意，为方便患者服用，制成浓缩水丸。本方由大黄、黄芩、石膏、板蓝根、薄荷、苦杏仁(炒)、莱菔子(炒)等多味中药组成；具有清热泻火，宣肺止咳的功效。主治肺胃湿热型口舌生疮，牙痛，感冒初期。为控制产品质量，本文研究建立了大黄、黄芩的薄层定性鉴别。
1 仪器与试药
石黄清火丸由本院制剂室提供，批号：20090309、20090712、20100507；薄层板自制；硅胶G(青岛海洋化工有限公司制造)；其余试剂均为分析纯；大黄对照药材及黄芩对照品均由中国药品生物制品检定所提供。
2 薄层色谱鉴别
2.1 大黄的薄层色谱鉴别 ［1-2］
取本品内容物10 g，加甲醇20 ml，超声处理30 min,冷却，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 ml使溶解，再加盐酸1 ml，置水浴中加热回流30 min,立即冷却，用乙醚振摇提取2次，每次20 ml,合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.1 g，同上法制成对照药材溶液。按处方工艺去大黄制成样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液。吸取供试品溶液、对照药材溶液、去大黄阴性样品溶液各5 ul,分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30℃-60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，在日光下检视，斑点变为红色。阴性样品溶液无相应的斑点。见图1.
2.2 黄芩的薄层色谱鉴别 ［3-4］
取本品10 g，研碎，加乙酸乙酯-甲醇(3∶1)的混合溶液30 ml,加热回流30 min，放冷滤过，虑液水浴蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩甙对照品，加甲醇制成每1 ml含1的溶液，作为
作者单位：455000河南省安阳市中医院
对照品溶液。按处方工艺去黄芩制成样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液。吸取供试品溶液、对照品溶液、去黄芩阴性样品溶液各5 ul,分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶5∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品溶液无相应的斑点，见图1。
图1
石黄清火丸TLC图
3 讨论
采用薄层色谱法对石黄清火丸中大黄、黄芩进行定性鉴别。色谱斑点清晰，附近无杂质斑点干扰，专属性强、重现性好，本方法可作为石黄清火丸的质量控制标准。
参 考 文 献
［1］ 刘艳丽,姜燕,郭红艳.畅中胶囊中大黄、知母的薄层色谱鉴别.中国药业，2010(13)：28.
［2］ 王莉,马金秋,韩秀梅.排石通口服液的制备、质量控制与稳定性考察.中国药业，2011，20(09)：33-34.
[关键词] 鼻炎胶囊；质量标准；马兜铃酸A；细辛；白芷；川芎
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）01（b）-0008-03
鼻炎胶囊由苍耳子、白芷、川芎、、细辛等九味药材组成，经提取制成的中药复方制剂，具有祛风宣肺、清热解毒等功效，用于治疗急慢性鼻炎。为了有效监测该制剂的产品质量，本实验采用TLC法对制剂中的川芎和白芷进行定性鉴别；另细辛为本方的主要成分之一，为了控制其毒副作用，本文采用HPLC法对制剂中马兜铃酸A的含量进行检查，为该制剂的质量控制提供理论依据。
1 仪器与试药
Waters2695-2998型高效液相色谱仪；马兜铃酸A对照品、川芎对照药材和白芷对照药材，均购自中国药品生物制品检定所，批号分别为110746-200305， 120918-200608和120945-200406，甲醇为色谱纯，水为重蒸水；硅胶G购自青岛海洋化工有限公司。
2 方法与结果
2.1 川芎的薄层鉴别
取本品适量，倾倒出内容物，称取约8 g，置烧瓶中，加入乙醚约50 ml，水浴加热回流提取，时间约为1 h，提取液滤过，回收滤液至干，残渣加乙醚2 ml使溶解，作为供试品溶液。另制备缺川芎阴性样品，取缺川芎阴性样品5 g，同法制成缺川芎阴性对照溶液。再取川芎对照药材1 g，同法制成川芎对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各6 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-二氯甲烷（1∶9）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与川芎对照药材色谱相同的位置上，显相同颜色的荧光斑点，与缺川芎阴性样品相比较，阴性无干扰（图1）。
2.2 白芷的薄层鉴别
取本品适量，倾倒出内容物，称取约5 g，置三角烧瓶中，加入乙醚30 ml，密塞，轻轻振摇，放置1 h，提取液滤过，回收滤液至干，残渣加乙酸乙酯2 ml使之溶解，作为供试品溶液。另制备缺白芷阴性样品，取缺白芷阴性样品5 g，同法制成缺白芷阴性对照溶液。再取白芷对照药材0.5 g，同法制成白芷对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-乙醚（3∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与白芷对照药材色谱相同的位置上，显相同颜色的荧光斑点，与缺白芷阴性样品相比较，阴性无干扰（图2）。
2.3 马兜铃酸A含量检查
2.3.1 色谱条件 Kromasil C18色谱柱（4.6 mm×200 mm，5 μm）；以甲醇-1%冰乙酸（60∶40）为流动相；流速为1.0 ml/min；检测波长250 nm；柱温30℃，理论塔板数按马兜铃酸A峰计算，不低于2000。
2.3.2 供试品溶液的制备 取本品适量，倾倒出内容物，精密称取5 g，置烧瓶中，加入甲醇80 ml，水浴加热回流提取，提取时间为2 h，提取液滤过，接取滤液，回收滤液至干，残渣加10%氨水20 ml溶解，用乙醚提取3次，每次20 ml，弃去乙醚层，水层滴加稀盐酸，至pH 3～4，再加入乙醚20 ml，分取乙醚层，共提取3次，合并乙醚液，回收乙醚至干，残渣加甲醇1 ml使之溶解，即为供试品溶液。
2.3.3 对照品溶液的制备 取马兜铃酸A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 毫升中含马兜铃酸A 0.022 mg的溶液。
2.3.4 标准曲线的绘制及线性范围的考察 取上述马兜铃酸A对照品溶液，精密量取2、4、6、8、10 ml，分别置10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度为0.0044、0.0088、0.0132、0.0176、0.022 mg/ml的溶液，吸取上述系列浓度的对照品溶液10 μl，注入高效色谱仪，按上述色谱条件进行测定。以测得的色谱峰积分面积为纵坐标，以对照品的浓度含量为横坐标，绘制标准工作曲线，得线性回归方程Y=2.3183×104X+0.9281×103（r=0.9999），测得马兜铃酸A对照品线性范围为0.044～0.22 μg。
2.3.5 精密度试验 取上述马兜铃酸A对照品溶液（浓度为0.022 mg/ml），精密吸取5 μl，注入高效色谱仪，按上述色谱条件进行测定，重复测定6次，以所得色谱峰峰面积计算RSD为0.23%，表明仪器的精密度良好。
2.3.6 稳定性试验 取上述马兜铃酸A对照品溶液（浓度为0.022 mg/ml），精密吸取5 μl，分别于0、2、4、6、8、10、12 h注入高效色谱仪，进行测定，按上述色谱条件进行测定，以所得色谱峰峰面积计算RSD为1.52%，表明样品中的马兜铃酸A在12 h内测定，含量稳定。
2.3.7 最低检出限 取上述马兜铃酸A对照品溶液（浓度为0.022 mg/ml），精密吸取1 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取20 μl，注入高效色谱仪，进行测定。从20 μl起依次递减进样量，并记录各色谱图，结果表明当进样量达2 μl时，色谱图信噪比为3∶1，确定最低检出量为2 μl，即含马兜铃酸A对照品为1.76 ng。
2.3.8 细辛药材及样品的马兜铃酸A含量测定 取3批样品按2.3.2项下的方法制备供试品溶液。细辛药材溶液的制备：取细辛药材，精密称取0.2 g，置烧瓶中，加入甲醇20 ml，水浴加热回流提取，提取时间为2 h，提取液滤过，接取滤液，回收滤液至干，残渣加10%氨水10 ml溶解，用乙醚提取3次，每次10 ml，弃去乙醚层，水层滴加稀盐酸，至pH 3～4，再加入乙醚15 ml，分取乙醚层，共提取3次，合并乙醚液，回收乙醚至干，残渣加甲醇1 ml使溶解，即得。分别精密吸取马兜铃酸A对照品溶液（浓度为0.022 mg/ml） 5 ml、细辛药材溶液和供试品溶液各10 ml，注入液相色谱仪，测定色谱图见图3～5。对两批细辛药材进行检测，其马兜铃酸A含量为34.3 μg/g，并对三批样品进行检测，未检出马兜铃酸A（表1）。
3 讨论
本研究对鼻炎胶囊制剂中各味药进行了TLC定性鉴别，通过试验，确定了川芎、白芷的薄层鉴别方法。该方法专属性强，阴性对照无干扰，可以作为该制剂的鉴别方法。川芎鉴别实验参考药典[1]进行鉴别，实验过程中发现阴性对照有干扰。因此，参照文献[2-4]进行了反复实验，最后确定展开剂为石油醚（30～60℃）-二氯甲烷（1∶9），展开效果最好。白芷薄层鉴别参照药典[1]进行实验，展开效果好，斑点清晰。
马兜铃酸是细辛、关木通等马兜铃科植物中的一类硝基菲羧酸类化合物，主要由马兜铃酸A、B、C、D、E及其衍生物组成[5-6]。临床关于马兜铃酸肾损害的报道不断出现，“马兜铃酸肾病”也得到医药界的广泛关注[7-8]。研究表明，马兜铃酸作用部位在肾小管上皮细胞和肾间质成纤维细胞，其毒性机制主要是导致肾小管上皮细胞的变性、坏死和凋亡， 加速肾间质纤维化进程，降低肾小球滤过率，引起肾衰竭等[9-11]。为有效控制马兜铃酸的肾毒性，有学者采用HPLC法对药材中马兜铃酸A进行了测定[12-14]，参照上述文献方法，本文采用HPLC法测定鼻炎胶囊中马兜铃酸A的含量，来控制制剂的安全性。测定结果表明，细辛药材中马兜铃酸A的含量甚微，约为34.29 μg/g，含细辛药材的三批鼻炎胶囊样品中均未检出马兜酸A。
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作者单位：411102 湖南省湘潭职业技术学院（陈丹）；湖南省中医药研究院（李柯，李若存）
通讯作者：陈丹
【摘要】 目的 建立活血促愈胶囊的质量标准。方法 采用薄层色谱法对处方中的丹参、槐米、三七、积雪草进行鉴别；用高效液相色谱法对成品中人参皂苷Rg1进行含量测定。结果 薄层色谱中能检出丹参、槐米、三七、积雪草；人参皂苷Rg1在2.26～13.56 μg范围呈良好的线性关系，r0.9998，平均回收率为97.22%，RSD为1.42%。结论 所建立的方法能够用于本品的质量控制。
【关键词】 活血促愈胶囊； 薄层色谱法； 人参皂苷Rg1； 高效液相色谱法
Study on quality standard for Huoxue Cuyu Capsule CHEN Dan*，LI Ke，LI Ruo-cun.*Xiangtan Vocational Technical College,Xiangtan 411102,China
【Abstract】 Objective To establish quality standards for Huoxue Cuyu Capsule.Methods Radix et Rhizoma Salviae,Flos Sophorae,Radix et Rhizoma Notoginseng,Herba Centellae were identified by TLC;Ginsenoside Rg1 was determined by HPLC.Results Radix et Rhizoma Salviae,Flos Sophorae,Radix et Rhizoma Notoginseng,Herba Centellae were detected by TLC;Ginsenoside Rg1 in the range of 2.26-13.56 μg was a good linear relationship,r0.9998;The average recovery was 97.22%,and RSD was 1.42%.Conclusion The established methods can be used for the quality control of Huoxue Cuyu Capsule.
【Key words】 Huoxue Cuyu Capsule; Thin layer chromatography; Ginsenoside Rg1; High performance liquid chromatography
活血促愈胶囊是由丹参、槐米、三七、积雪草组方研制而成的中药6类新药，功能为活血化瘀、凉血消肿、通络止痛，用于急性软组织损伤，中医辨证属血瘀证者。为了有效地控制其质量，笔者采用薄层色谱法对制剂中的丹参、槐米、三七、积雪草进行了鉴别，采用高效液相色谱法对三七的人参皂苷Rg1进行了含量测定。现报道如下。
1 仪器与试剂
LC-10A高效液相色谱仪（日本岛津）；C18（Column 200×4.6 mm，5 μ）色谱柱（大连依利特分析仪器有限公司）；N2000数据处理软件（浙江大学智能信息工程研究所）。羟基积雪草苷（批号：1110893-200201）、积雪草苷（批号：110892-200403）、芦丁对照品（批号：0080-9504）、丹参酮ⅡA、（ 批号：0766-200010）、三七皂苷R1 （批号：110745-200415）、人参皂苷Rg1 （批号：110703-200726）、人参皂苷Rb1 （批号：704-200114）均为中国药品生物制品检定所提供。甲醇、乙腈（色谱纯试剂，天津科密欧化学试剂有限公司），水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯（为湖南汇虹试剂有限公司提供）。活血促愈胶囊（批号：20080401、20080405、20080409）由湖南省中医药研究院中药研究所制剂室提供。
2 薄层色谱鉴别
2.1 丹参鉴别 取三批样品各1.0 g，加甲醇25 ml，超声处理30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水15 ml使溶解，溶液置分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15 ml，分取乙酸乙酯层（水层备用），蒸干，残渣加乙酸乙酯1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参酮ⅡA对照品，加乙酸乙酯制成每1 ml含2 mg的溶液，作为对照品溶液。取除丹参外的其余处方量药材，按制备工艺方法制备缺丹参的阴性样品，按上述供试品溶液制备方法制成缺丹参的阴性溶液照。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各10 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯（19∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。
2.2 槐米的鉴别 取丹参鉴别项下的水层，加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次15 ml，分取正丁醇层，加氨试液振摇提取2次，每次15 ml，合并氨试液层（正丁醇层备用），蒸干，残渣加甲醇5 ml使溶解，作为供试品溶液。另取芦丁对照品，加甲醇制成每1 ml含4 mg的溶液，作为对照品溶液。取除槐米外的其余处方量药材，按制备工艺方法制备缺槐米的阴性样品，按上述供试品溶液制备方法制成缺槐米的阴性溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各10 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（8∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，待乙醇挥干后，分别置日光及紫外光灯（365 nm）下检视，阴性无干扰。
2.3 三七、积雪草的鉴别 取槐米鉴别项下的正丁醇层，用正丁醇饱和的水洗涤二次，每次15 ml，分取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇2 ml使溶解，摇匀，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rg1对照品、三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的混合溶液，作为对照品溶液。再取积雪草苷对照品及羟基积雪草苷对照品，加甲醇制成1 ml含1 mg的混合溶液，作为对照品溶液。取除三七外的其余处方量药材，按制备工艺方法制备缺三七的阴性样品，按上述供试品溶液制备方法制成缺三七的阴性溶液。取除积雪草外的其余处方量药材，按制备工艺方法制备缺积雪草的阴性样品，按上述供试品溶液制备方法制成缺积雪草的阴性溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述供品溶液3～6 μl，对照品溶液各10 μl，阴性溶液各3～6 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（7∶3∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰［1～5］。
3 含量测定
3.1 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.5%磷酸溶液（20∶80）为流动相；检测波长为203 nm。理论板数按人参皂苷Rb1峰计不低于2000。
3.2 对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rg1对照品适量，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，即得。
3.3 供试品溶液的制备 取本品内容物，研细，取约0.4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇20ml，超声30分钟（功率250W，频率40kHz），滤过，容器及滤渣用甲醇10 ml洗涤，洗液与滤液合并，蒸干，残渣加水15 ml使溶解，用以水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15 ml，合并正丁醇液，用氨试液25 ml洗涤1次，取正丁醇液，用以正丁醇饱和的水50 ml分2次洗涤，取正丁醇液，分液漏斗用适量正丁醇洗涤，洗液与正丁醇液合并，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3.4 阴性溶液的制备 取除三七外的其余处方量药材，按制备工艺方法制备缺三七的阴性样品，按上述供试品溶液制备方法制成缺三七的阴性溶液。
3.5 干扰试验 分别精密吸取对照品溶液、阴性溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定，结果表明，阴性溶液在人参皂苷Rg1保留时间处无吸收。
3.6 线性关系考察 精密吸取人参皂苷Rg1（C1.13 mg/ml）对照品溶液2、4、6、8、10、12 μl进样，测定其峰面积积分值，以浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：Y104623X+19645，r0.9998。结果表明人参皂苷Rg1在2.26～13.56 μg范围内具有良好的线性关系。
3.7 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液20 μl，重复进样5次，测定其峰面积积分值，计算RSD（%）为0.64%，说明精密度良好。
3.8 稳定性试验 分别精密吸取供试品溶液20 μl，于0、4、8、12、24 h进样，测定其峰面积积分值。计算结果RSD（%）为0.73%，说明24 h内供试液稳定性良好。
3.9 重复性试验 取同一批号样品（批号：20080401）按上述条件，测定5次，测定其峰面积积分值。结果RSD（%）为0.40%，说明方法重复性好。
3.10 回收率试验 精密称取已知含量为11.28 mg/g（批号：20080401）样品约0.18 g，共6份，分别精密加入人参皂苷Rg1对照品溶液（1.2 mg/ml）1.0 ml，即1.2 mg，按含量测定项下的方法测定含量，计算回收率，平均值为97.22%，RSD为1.42%。结果见表1。
表1 回收率测定结果表
3.11 样品含量测定 取三批样品，按上述方法测定。结果见表2。
4 讨论
4.1 薄层色谱鉴别 活血促愈胶囊既含有非极性成分，也含有极性性成分，所以先采用甲醇提取、浓缩，浓缩物用水溶解，水层分别用乙酸乙酯和正丁醇萃取出非极性成分与极性成分，然后利用槐米中芦丁易溶于碱性溶液的性质，用氨试液将芦丁从正丁醇层提取出来。分别制成供试品溶液，以化学对照品丹参酮ⅡA、芦丁、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1、积雪草苷及羟基积雪草苷对照，用TLC法分别检出成品中丹参、三七、积雪草、槐米。本法取样量少，处理方法简便，经济，省时，且薄层分离效果好。
表2 样品含量测定结果表
4.2 含量测定 三七为方中君药，主要含三七皂苷类成分，因此笔者拟参照《中国药典》2005年版一部三七含量测定方法测定三七总皂苷，由于成品中其它成分的干扰，未能达到要求。人参皂苷Rg1在三七中的含量较高，药理研究表明,三七Rg1是活血化瘀和促进骨拆愈合的有效成分，同时中国药品生物制品检定所已提供用于含量测定的对照品，参照《中国药典》2005年版一部人参叶项下的含量测定方法建立了成品中人参皂苷Rg1的含量方法，经方法学考察和产品测定的结果表明，所建立的方法简便，重现性好，能够作为控制本品内在质量的指标。
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