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开篇:写作不仅是一种记录,更是一种创造,它让我们能够捕捉那些稍纵即逝的灵感,将它们永久地定格在纸上。下面是小编精心整理的12篇化学发光免疫,希望这些内容能成为您创作过程中的良师益友,陪伴您不断探索和进步。
中图分类号:TP317 文献标识码:A 文章编号:1009-914X(2016)14-0049-01
近年来,化学发光免疫分析法备受人们的青睐,主要是因为此方法具有高灵敏度、强特异性、广适用面和设备简单等特点。在临床医学、食品药物等领域,此方法被广泛应用于抗原与抗体间的识别。生物分子的体积大、扩散率比较小,所加之对识别微电具有空间阻碍作用,所以受到传质速率和反应动力学控制的免疫反应速率一般都会比较低。传统的免疫分析方法需要的温育时间比较长,大大限制了样品测试的通量和适用范围。所以为了缩短免疫分析的时间,需要不断的进行技术创新,从而扩展化学发光免疫分析的应用范围。
一、化学发光免疫分析法
化学发光分析是一种利用化学反应产生的辐射光的强度来进行物质含量确定的分析方法。这种分析是化学发光系统和免疫反应的完美结合,主要是利用化学发光的相关物质对抗体或者是抗原进行标记,等到与需要进行测定的抗原或者抗体反应之后,再利用分离游离态化学发光物质的方法,使得加入到化学发光系统中的其他相关物产生化学发光,然后进行抗原或者是抗体的定量或者是定性的检测。在化学发光免疫分析中,主要使用4类标记物,分别是异鲁米诺及其衍生
物、过氧化物酶和碱性磷酸酶、鲁米诺和吖啶酯衍生物。在目前的化学发光免疫分析法中,以酶为标记物的化学发光是应用的主流。常用的标记酶是碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶。利用酶来做标记物主要是因为酶具有相应的化学发光底物,在临床上的应用比较广泛。
在化学发光免疫分析方法中不可避免的会利用到标记技术,而标记技术是现代免疫分析的关键性技术之一。新的标记免疫分析技术,在目前的社会诸多领域中得到了广泛的应用,并且展示了非常不错的发展前景。在实际标记技术的应用中,纳米技术广泛的用于生物标记,主要是因为纳米粒子具有非常良好的生物相容性,而且具有信号放大的效果。在实际应用中,量子点就是一种半导体纳米颗粒,所以在发光免疫分析法中被大量的使用。
二、化学发光免疫分析法的应用
(一) 快速化学发光免疫分析方法
传统的免疫分析方法需要的时间比较长,而且由于时间的延长往往会导致免疫试剂吸附在管道的内壁上,这样就会造成不同测定间的信号交叉,对于测定结果的准确度具有严重的影响。为了实现免疫分析的高通量,克服传统方法的不足,可以通过利用外场的驱动或者是利用溶液来进行有效混合策略,以此来达到加快抗原或者是抗体等大分子的传质速率。在实际中,还可以通过提高整个反应体系的温度来进行免疫反应动力学的加速,这样也可以实现快速的免疫检测。
在提高传质速率的方法选择上,主要有四种备选方案,分别是改变电渗流、超声波驱动、电磁搅拌和电场驱动。通过这种提高传质速率的方法,可以有效的实现快速检测,一般在3分钟之内就可以完成检测工作。除去提高传质速率的方法,外力驱动的加速也会提高检测,在实际应用中,利用外力驱动的加速效果,可以在16分钟内完成整个测定分析工作。
(二) 多组分化学发光免疫分析方法
多组分化学发光免疫分析方法也是化学发光免疫分析方法的一种重要应用。在单个的分析流程中,同时实现多组分的检测,具有的优势非常显著。利用这种方法,不仅所需要的时间短、样品的消耗量比较少,而且分析的通量高,分析成本整体较低。这些优势都是免疫分析长期追求的目标,也是未来免疫分析的发展研究热点。多组分免疫分析模式主要有两种实践模式,分别是:多组分同时检测模式和顺序检测模式。在实际应用当中,同时检测模式往往会与空间分辨技术,还有阵列检测器同时进行结合检测,而顺序检测一般是在同一个时间期限内对多个组分进行分别检测。近年来由于安培免疫传感器阵列在多组分免疫分析中的广泛应用,多组分化学发光免疫分析的方法获得了非常快速的发展。多组分化学发光免疫分析法的广泛使用得益于其他技术的长足进步,也就是说多组分化学发光免洗分析的发展要建立在与其相关技术的发展基础上,所以这种技术在未来的发展潜力巨大。
(三) 高灵敏化学发光免疫分析方法
从过去的实践经验中得知,现有的检测手段其灵敏度和特异性都不是很理想,所以选择高灵敏度的检测方法越来越重要。纳米技术快速发展和在检测中的应用为实现化学发光免疫分析的高灵敏度提供了可能。就目前的情况而言,纳米粒子在生物分析中得到了广泛的使用,其信号放大的功效对于高灵敏免疫分析方法的构建非常有帮助。
通过研究发现不同粒径的纳米粒子可以增强鲁米诺过氧化氢体系的化学发光 ,在试验中,38 nm 粒径的纳米粒子的增强效果最为显著。通过实验,合成的特殊形状的不规则金纳米粒子,对鲁米诺过氧化氢化学发光体系的催化活性是普通纳米粒子的100倍。在试验中,将抗体固定在不规则金纳米粒子表面后发现,会形成夹心免疫复合物,这中复合物对于信号的放大,其效果更加的显著。也正是通过试验得知,将纳米粒子广泛应用于化学发光免疫分析中时,由于其信号放大的效果显著,测定分析的敏感性和准确度显著加强。
三、发展与展望
化学发光免疫分析方法在目前的生命科学领域、食品、药物的测定等方面被广泛的使用,而且随着我国对食品安全的重视程度不断加深,测定范围和深度肯定会逐渐增加。化学发光免疫分析方法其本身就具有成本低、操作简单、灵敏度较高、测定速度快等突出的优势,在未来的发展中这些优势会被充分的利用,化学发光免疫分析法的适用范围也会更加的广泛。再者,化学发光免疫分析法与技术的进步有着密切的关系,随着未来技术的不断进步,与化学发光免疫分析法相关的技术会得到不断地改进和发展,这对于化学发光免疫分析法来说,是一个强有力的助推力。
结束语
化学发光免疫分析方法因为其优势突出所以在目前的各个领域具有非常广泛的应用。在实际应用中,一定要不断的加深对此方法的认识深度,不断地提高利用此方法的技术,使这种技术更好的为现代的测定工作来服务。
参考文献
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关键词梅毒;化学发光法;胶体金
梅毒(Syphilis)是由梅毒螺旋抗体(又称苍白螺旋体)引起的常见性传播疾病之一。其临床病程漫长,临床表现极为复杂,几乎可侵犯皮肤粘膜,晚期侵犯内脏器官。实验室可以通过检测血液中的非特异性抗体和特异性抗体[2],判断是否感染梅毒螺旋体。现采用化学发光免疫法和胶体金法检测190例梅毒患者的血清标本,结果报告入下。
1 材料和方法
1.1 标本来源
经病史、临床症状及血清学实验确诊的梅毒患者的血清标本190例。
1.2 试剂
科美CHEMCLIN600全自动化学发光免疫分析仪,试剂是由北京科美东雅生物技术有限公司提供的配套试剂盒,(胶体金法)梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒是由广州万孚生物技术有限公司生产。
1.3 方法
采用化学发光免疫法和胶体金法严格按照说明书对190例确诊标本进行检测。
1.4 结果判定
化学发光免疫法的结果判定:临界值=2.1×N(N为阴性对照RLU的平均值),待测样品RLU值≥临界值,判定为阳性,待测样品RLU值
1.5 统计学方法
计数资料比较用X2检验。
2 结果
2.1 两种方法检测结果如下(见表1)
3 讨论
梅毒的实验室诊断常依靠血清学检查,当梅毒螺旋体进入人体3~6周后可检出两种抗体,一种是针对螺旋体抗原的抗体,另一种是针对非螺旋体抗原的抗体。
胶体金法采用纯化重组基因的梅毒抗原,以胶体金作为指示标记,于硝酸纤维素膜上进行反应,以双抗原夹心法原理快速定性检测血清中的梅毒螺旋体特异性抗体。本组胶体金方法对Ⅰ期梅毒的阳性率为90.6%;Ⅱ期梅毒的阳性率为100%;潜伏梅毒的阳性率为33.3%。因此胶体金法对特异性梅毒螺旋体浓度过低时会产生假阴性反应,但是此法快速简便,结果容易观察,适用于临床急诊标本。
化学发光免疫法是采用一步法双抗原夹心免疫分析模式,属于梅毒螺旋体抗原结合实验,使用多种TP特异性蛋白抗原制备固相抗原,辣根过氧化物酶(HRP)标记的相同蛋白作为标记抗原,与样品中的梅毒螺旋体抗体形成双抗原夹心。经洗涤后,加入化学发光底物液,于5~30分钟内测定发光强度,判断是否含有梅毒螺旋体特异性抗体[3]。此法对Ⅰ型梅毒的阳性率为93.8%;Ⅱ期梅毒和潜伏梅毒的阳性率为100%,具有敏感性高,特异性强的特点,并且全自动免疫分析仪的使用大大提高了检验质量,避免人为因素的影响,不仅提高了工作效率,也提高了梅毒血清学的阳性率,以便梅毒患者能得到及时有效的诊治。
参考文献
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[关键词] 化学发光免疫测定;生化检验;应用效果;放射免疫分析法;评价
[中图分类号] R446.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2016)05-0113-03
化学发光免疫测定法又被称为化学发光标记免疫测定法,国际上通称为chemiluminescent immunoassay,即CLIA。该方法通过磁场将抗原、抗体沉淀部分与游离部分进行分离,从而达到定量或定性检测的目的,广泛应用于临床病毒、肿瘤标志物、免疫系统疾病以及心脏疾病的诊治过程。本次研究以甲状腺肿瘤为主要研究方向,选取本院580例甲状腺肿瘤患者,就化学发光标记免疫测定法与放射免疫分析法在生化检验中的应用效果展开研究,并结合文献调研与临床经验,对化学发光免疫测定在其他疾病临检确诊过程中的应用进行了简要阐述,现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取我院2013年5月~2015年5月580例甲状腺肿瘤患者,按抛硬币法将其分为检测组和放射组各290例,其中检测组男142例,女148例,年龄7~85岁,平均(46.2±7.5)岁,病程1~6年,平均(3.2±1.3)年;放射组男151例,女139例,年龄9~83岁,平均(47.3±4.2)岁,病程1.5~8年,平均(4.3±1.7)年。本次研究在取得我院医学伦理委员会认证通过的前提下进行,所有患者均与我院签署《调查研究知情同意书》,符合《甲状腺病理诊断》(人民军医出版社,2011版)中的临床标准,排除心脑血管疾病、特殊情况过敏、肾功能严重障碍以及有精神病史或家族精神病史的患者。检测组患者性别、年龄、病程等一般资料与放射组比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。
1.2 方法
将各组人员进行编号并分别抽取3 mL静脉血,将患者血液中加入适量肝素(Glaxo Wellcome Production,国药准字J20090006)抗凝,离心分离,3500 r/min,取血浆冻存,检测患者甲状腺球蛋白,检测时间控制在4 h以内。
放射组患者采取放射免疫法进行检测,使用FJ-20003/50P型γ全自动双探头放射免疫计数仪(西安国营二六二厂提供)对患者甲状腺球蛋白进行检测。
检测组患者采取化学发光免疫法进行检测。MAGLUMI-4000型分析仪与配套化学发光试剂盒(深圳新产生业生物医学工程股份有限公司)进行甲状腺球蛋白检验,采用雅培i2000仪器与配套试剂(美国雅培公司)进行第三方验证。
1.3 观察指标
通过对各组甲状腺球蛋白检测结果进行分析,以假阳性和假阴性检出率为依据,对两种检测方法特异性和灵敏性进行比较。放射免疫法检测甲状腺球蛋白正常水平为11.45~20.25 ng/mL,化学发光免疫法检测甲状腺球蛋白正常水平为0.73~84 ng/mL。灵敏度=真阳性/(真阳性+假阴性)×100.0%,特异性=真阴性/(真阴性+假阳性)×100.0%,符合率=(真阳性+真阴性)/总例数×100.0%。
1.4 统计学处理
文中涉及数据均在SPSS13.0中输入,计数资料采取率(%)表示,行χ2检验,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,行t检验,P
2 结果
2.1 两组检测结果比较
检测组实际阳性143例,阴性147例,检测出真阳性142例,真阴性142例。放射组实际阳性146例,阴性144例,检测出真阳性125例,真阴性118例。采用化学发光免疫法的检测组检测甲状腺球蛋白灵敏度、符合率、特异性等数据明显高于采用放射免疫检测法的放射组,差异有统计学意义(P
2.2 两组甲状腺球蛋白水平比较
检测组甲状腺球蛋白水平为(690.8±89.1)ng/mL,放射组为(631.2±51.3)ng/mL,两组比较差异有统计学意义(t=9.872,P
3 讨论
化学发光免疫测定技术最早应用于20世纪70年代,当时只作为示踪信号,且灵敏度与发光时间明显不足,局限了应用领域。随着医学仪器技术发展,到80年代中期,出现辣根过氧化物酶标记技术,大大提高了信号强度,延长了发光时间,解决了测定技术难题。化学发光通常被分为3大类型:第一种为发光酶免疫测定,即LEIA;第二种为发光物免疫测定,即LIA;第三种为发光辅助因子免疫测定,即LEIA。化学发光类型虽然各异,但其内在原理却能通用,化学发光均为通过化学发光物质通过化学反应从而产生光辐射[1]。本次研究所讨论的化学发光免疫测定方法与放射免疫测定方法具有一定相似之处,二者都可以用Ag-L+CRlight进行标示(Ag-L代表发光物;CR代表协同反应物)[2]。化学发光免疫测定用途十分广范,在医学领域中,化学发光免疫测定法常见于肿瘤测定过程之中,凭借其特有的光辐射,能对CA153、CA242、CEA、NES、AFP、PSA等十多种肿瘤进行测定。
本次研究结果表明,使用化学发光免疫测定对甲状腺球蛋白浓度进行检测,检测灵敏度、符合率、特异性均明显高于放射免疫检测,差异有统计学意义(P
此外,化学发光免疫检测还广泛应用于临床生化检验中,包括病毒检测、心脏疾病检测等。具体内容如:(1)梅毒螺旋体检测。临床常用方法为对患者体内非密螺旋体特异性抗体进行检测,之后再进行确证检测,根据结果才能确诊,常用的人工检测方法效率低且耗时长,操作复杂,无法满足临床要求,在何惠[3]等的研究中,采用化学发光免疫检测则可利用全自动分析仪,通过两步法进行定性检测,能有效降低假阳性率,提高临床检出准确率。(2)乙肝病毒标志物检测。在乙型病毒性肝炎传统检测过程中多采用ELISA法进行定性检测,无法满足临床定量的需求,由于目前多以HBsAg作为病毒感染的判断标志物,因此可采用化学发光免疫测定法对乙肝HBsAg抗原进行测定,达到定量与定性的双重标准,灵敏度可达100%,符合率和特异性分别可达97.61%,98.74%,且各检测指标均符合临床诊疗需求,在较大范围内线性良好。(3)肿瘤标志物检测。肿瘤标志物存在与细胞和组织当中,包括蛋白质、酶、激素等,国内外大部分学者通过化学发光免疫测定法检测肿瘤标志物,对肿瘤患者早期诊断和术后检测提供了有参考价值的指标,例如张国军等[4]人以化学发光免疫测定发对血清中鳞状细胞癌抗原以及cy-fra21-1浓度进行测定,从而实现了对食管癌的有效诊断和病情观察,效果良好。(4)心脏疾病检测。陈丽珠等[5]对心脏病患者心肌损伤标志物和肌红蛋白间的关系进行了数据分析,结果显示三者间有密切相关性,因此在心脏疾病临检过程中可利用化学发光免疫测定对临床标本进行检测,能实现对心脏疾病患者及时、准确、有效的诊断和临床症状监护。
在临床生化检验过程中,能有效满足疾病标记的抗原毕竟占少数,因此还需对检测方法进行充分优化,具体表现为:(1)有效提升分析结果的准确性和灵敏度,提高分析结果放大倍数,延长检验下限,扩大化学发光免疫检测的应用范围,使其发挥更大的临床价值[6-9];(2)提高分析仪器的准确性,以促进仪器小型化、智能化转变为发展方向[10-12];(3)化学发光免疫测定对发光物的生成和催化剂效果依赖较大,为有效扩大应用范围,提升检测灵敏度,还需研发出新型发光物和催化剂,同时还需修饰和增强化学发光反应效果,进一步探讨新型分析方法, 提升检验准确性[13-18]。
综上,化学发光免疫检测具有较高灵敏度与准确性,在临床诊断与治疗中应用效果显著,对准确诊断出患者病情意义重大,有一定的临床推广价值。
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【关键词】2型糖尿病;胰岛素;C肽;电化学发光法
电化学发光法具有检测灵敏、准确、分析检测限低,不受轻度黄疸、脂血的干扰等优点。2型糖尿病患者多数肥胖,此型不发生胰岛β细胞的自身免疫性损伤,很少发生酮症酸中毒,“三多一少”症状不明显,具有广泛的遗传特异性。我们初步探讨电化学发光法在2型糖尿病诊断中的应用,结果报告如下。
1资料与方法
11一般资料2型糖尿病组75例,均为我院糖尿病专科确诊的门诊和住院患者,空腹血糖在91~15 mmol/L之间,男40例、女35例,年龄42~73岁,平均年龄(58±4)岁,均未发生糖尿病并发症,未用胰岛素治疗。对照组36例,为我院健康体检者,其中男21例、女15例,年龄43~70岁,平均年龄(55±3)岁,对照组所有人肝肾功能、血脂血糖均无异常,两组患者性别年龄差异无统计学意义(P>005)。
12测定方法所有受检者均禁食8 h后清晨坐位抽取静脉血,检验当日停用一切药物。口服2两馒头(约75 g葡萄糖),餐后1 h、2 h、3 h各抽血一次,分别测定胰岛素和C肽。检测所用仪器:Roche全自动电化学发光免疫分析仪,试剂盒由德国罗氏诊断有限公司提供。所有操作严格按照相关说明进行。
13统计学方法用SPSS统计软件进行统计分析,数据以x±s表示,组间差异采用t检验,P
本文对75例已确诊的2型糖尿病患者进行馒头餐试验,并应用电化学发光法测定其血清胰岛素和C肽。我们发现2型糖尿病组胰岛素和C肽释放峰时出现较对照组晚。且峰高倍数降低,这与国内的相关报道一致。
电化学发光免疫分析检测胰岛素和C肽操作简单、迅速、无放射性污染,敏感性和特异性完全能达到临床要求[3]。我们建议在葡萄糖刺激试验中,最好联合检测胰岛素和C肽的含量,能够帮助糖尿病的诊断、分型,在指导治疗和监控病情方面有重要意义。
参考文献
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[关键词] 化学发光免疫分析仪;操作;维护;故障处理
[中图分类号]R392-33 [文献标识码] B[文章编号] 1673-7210(2009)05(b)-127-02
美国拜耳公司生产的ACS:180SE全自动化学发光免疫分析仪以其独特的免疫分析技术,齐全的检测项目,简便的操作,快速、灵敏的测试结果,在临床上广泛应用。该机使用的一次性样品杯、定标液、酸碱试剂、辅助试剂等均为厂家负责免费提供,降低了检测成本,方便了客户。
1 仪器的使用环境及保养
环境温度、尘埃、电源的稳定性对机器的影响很大。环境温度和湿度过高或过低,仪器都会报警,因此实验室应安装空调和除湿机。室内湿度过大时仪器无法正常启动,可用吹风机对准仪器后部的窗口吹10~15 min即可。同时要做好环境的防尘、清洁工作。定期用无水乙醇擦拭吸样针和试剂针,同时调整吸样针和试剂针的位置,试验用水必须使用达标水质。
2 操作流程
2.1 仪器工作全程由微机控制
仪器自检、灌注、编排工作表、样本和试剂的识别与定标、样本和试剂的混合、进样、清洗等均由自动程序控制,操作简便。
2.2 样品杯为一次性使用,厂家负责免费提供
使用时将杯子放如杯仓内,由机械装置引导自动进入轨道,吸样针和试剂针将样本和试剂吸入,反应分析后样品杯被清洗送入污物仓,同时将检测结果自动传送至电脑,整个过程全自动化检测。
2.3 吸针均由程序自动控制
为使吸样针和试剂针准确吸样和吸试剂,机内有一负压泵为吸针提供负压,针上有传感器及液面检测器负责检测。吸针的吸样位置和吸样量多少均由程序自动控制。
2.4 结果分析
分析结果直接传入英文版的微机,再自动传送至中文版的微机中,打印中文综合报告。
3 常见故障及处理
3.1 系统故障及电路故障
当系统发生故障时,英文版微机显示器左上角窗内后黄色表识闪动,机内故障检测系统将指示出故障发生的具体部位及处理办法。大部分故障可自己解决。当电路发生故障时就要与厂家维修工程师联系解决。因为控制仪器的微机是全英文版的,所以操作人员必须能够具备一定的英文水平,仪器旁也应该随时放置英文词典以备查用。
3.2 微机故障
微机是该系统的心脏。有时由于微机不能启动,与主机之间的连接松动等都会造成整个系统不能工作。这时应该检查微机电源、与主机间的连接线路、系统软件等。如确属微机本身硬件或软件故障,就要与厂家维修工程师联系解决。
3.3 卡杯子
卡杯子故障是该仪器出现故障率较高的现象之一。杯子一旦卡住,整个检测过程就要重新开始,既浪费时间又浪费试剂。
3.3.1 杯仓卡杯子由于样品杯是在杯仓内任意放置,由仓内机械传送带随机拾取的,使用一段时间后仓内灰尘及塑料样品杯上的毛刺等都可能使杯子卡住。此时轨道上无杯,机器空走。解决的方法是将机器左侧上外板拆下,将卡杯取出,用棉签蘸取无水乙醇清洁传输带、杯仓即可。
3.3.2 污物仓卡杯子检测后样品杯被清洗送入污物仓内。长时间使用后,杯子进入污物仓的出口处会有灰尘积聚,出口斜面变涩,使杯子不能顺利滑入污物仓,从而堵住出口。此时仪器报警,检测停止。解决的方法是将污物仓打开,用用棉签蘸取无水乙醇清洁杯子出口即可。
3.4 过滤器渗漏或过脏
仪器左边上一小窗可看见水过滤器。由于受水炙和环境的影响,如果一段时间结果出现较大偏差,并从小窗上看到过滤器发黄或是渗漏,就需要与厂家维修站联系更换水过滤器。
3.5 样品(试剂)盘无动作
当传动装置发生故障时,样品(试剂)盘不能动作,此时应首先检查传动马达有无动作,在拆开清洁后发生此故障,多半是由于条形码检测器没有检到条形码。只要将样品(试剂)盘转一下位置就可解决。所以在拆盘时要记住原始位置很重要。如果条形码检测器灯不亮,无扫描,则是检测器本身故障,就要与厂家维修工程师联系解决。
3.6 液面检测故障
当进样(吸试剂)的1~3号针任一发生故障时,该针进到样本(或试剂)杯中,只是轻点一下,不能吸液,则要考虑是否液面检测器损坏。可将两只针上液面检测器互换。如果故障也随之转移,就可断定是液面检测器损坏。此电路板在机上为软线连接,拆装时要格外小心,以免扩大故障。
3.7 水量过少或水液面过低
在仪器的左面有上下两个水桶,上面是净水桶,下面是污水桶。两个水桶分别由两个带圆型塑料垫的盖子盖住。使用一段时间后,即使净水桶里是满的仪器也会出现水液面过低的报警现象。此时,可打开净水桶盖子,将盖子上的圆形塑料垫转动位置盖上即可。如果长期磨损,转动后仍不能解决,就需要与厂家维修站联系更换塑料垫。
3.8 样品或试剂量过少,液面过低
此时吸针因吸不到样品或试剂而报警,无法检测。可将样品管或试剂瓶稍微向上提3~5 mm,以不影响吸针吸样为准,这样可将样品或试剂液面稍微提高,从而顺利检测,同时避免了试剂的浪费。
总之,在使用过程中日常维护和保养至关重要,能消除隐患,降低故障率;如果能了解一些常见的故障发生的原因并及时加以处理,更有利于提高仪器的使用效率,充分发挥该仪器快速、准确的性能。
[参考文献]
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[3]毕波,吕元.定量检测方法学性能验证的系统设计[J].中华检验医学杂志,2007,30:143-145.
关键词:全自动电化学发光免疫法;5项指标;甲状腺功能
甲状腺功能异常是近年来较为多发的一种疾病,该病发病症状不明显,诊断检测的准确性低,漏检、误检发生率很高[1]。近年来全自动电化学免疫法检测逐渐应用到甲状腺功能检测当中,但是对于该种检测方法的相关研究和报道却比较少。本研究旨在探究自动电化学免疫法检测甲状腺功能5项指标的临床价值。
1 资料与方法
1.1一般资料 选取2015年4月~2016年4月在我院接受治疗的52例甲状腺功能异常患者为检测对象,男28例,女24例,平均年龄为(36.17±8.34)岁;另外选取和51例健康体检及门诊患者参考对象,男26例,女25例,平均年龄为(37.28±7.54)岁。检测仪器为SIEMENS全自动电发光仪,型号为CentaurXP,由江西百康实业有限公司提供SIEMNS配套试剂。
1.2方法 使用5ml的真空抗凝试管采集检测者的血液样本,并将其放置在2~8℃的冰箱中保存以留待检测。检测在23~29℃的室温条件下严格按照说明书进行操作。检测对象和参考对象分别检测。
1.3检测原理[2] 使用电化学发光原理,以三联吡啶钌分子为标记物,在链霉亲和素-生物素包被的基础上,使用直径为2.8μm的磁性聚苯乙烯微粒为载体,反应环境为类似液相状态,根据抗原浓度对光强度进行调节,浓度越高,光强度也越大。
1.4评定标准 ①批内精密度检测:采集一份混合血清,对其进行20次批内反复检测,计算检测结果的平均值。②批间精密度检测:收集同一份血液样本存放在4℃的冰箱中,并将其分装处理,坚持5d,2次/d,对每日每份的量进行测定,计算测定结果的平均值。
2 结果
2.1研究对象批内和批间精密度 研究发现使用全自动电化学发光免疫法检测甲状腺功能5项指标剧透较好的重复性,精密度高,见表1。
2.2甲状腺功能5项指标的线性范围 检测使用试剂的线性范围较宽,能够满足本次实验的要求。检测使用试剂盒提供提供的甲状腺功能5项指标的线性范围见表2。
2.3参考对象检测结果 对参考对象进行检测的监测结果显示此参考对象的各项指标均在试剂盒参考值范围内,较为合理,见表3。
3 讨论
甲状腺功能紊乱是一种较为多发的内分泌性疾病。普查和有效的检测能够尽早发现病情,从而使患者尽早接受治疗,以防止病情恶化给患者带来的不良影响。但是甲状腺紊乱的诊断正确性和诊出率很低,尽管是在医疗卫生事业发达的西方国家其漏诊率也很高[3]。因此探究有效而准确的检测方法具有世界性意义。自动电化学发光免疫检测法能够同时对人体的5项甲状腺功能指标进行检测,今年来被一些医院所使用,但是至于其使用价值却很少有介绍。
本研究结果显示使用自动电化学发光免疫检测法检测甲状腺功能5项指标具有较高的精密度;其次,本研究使用的试剂盒线性范围宽,符合研究需要,保证了研究的科学性;最后研究中以本院门诊患者及健康体检者为参考对象,参考值均符合试剂盒参考范围,这也证明了本研究的准确性。
长久以来医学界都通过检测游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)和游离甲状腺素(FT4)来判断患者是否发生甲状腺功能紊乱。虽然FT3和FT4的检出率很高,但是仅凭这两项指标来对患者做出诊断具有较大的局限性,很容易发生漏检。抗甲状腺过氧化物酶抗体(Anti-TPO)是人体中甲状腺炎极为重要的一项标志物,对患者的抗甲状腺过氧化物酶抗体(Anti-TPO)进行检测能够极大的提升甲状腺功能紊乱的检出率,但是常规检测法无法对Anti-TPO进行有效检测。另外对抗甲状腺球蛋白抗体(Anti-TG)和抗甲状腺过氧化物酶抗体(Anti-TPO)、促甲状腺素(TSH)、同时检测更能保证简称为结果的精密度。
本研究采用自动电化学发光免疫检测法对甲状腺功能紊乱患者的5项甲状腺功能指标进行同时检测具,监测结果显示有较高的精密度,且重复率也较好,这与相关研究结果一致,具有科学性。
综上所述,使用自动电化学发光免疫检测法对人体的5项甲状腺功能指标进行检测能够提升甲状腺功能紊乱的检出率,精密度高,具有很高的临床应用价值,值得推广使用。
参考文献:
[1]黄佳,崔燕,王生玲,等.新疆维吾尔族地方性克汀病患者甲状腺功能的研究[J].中华地方病学杂志,2015,34(12):862-865.
[关键词] 电化学发光法;放射免疫法;甲状腺激素
[中图分类号] R446.62 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2012)03-0071-02
Comparing of measurement of thyroid hormones by ECLIA and RIA
ZHANG Yuping
Deparment of Clinical Laboratory, the Affiliated Hospital of Xinyang Vocational and Technical College, Xinyang 464000, China
[Abstract] Objective To compare which one is superiority in result of reliability and methodology of convenience between ECLIA and RIA measurement. Methods The thyroid hormones were measured by ECLIA and RIA. The measurements were compared of precision, sensitivity, coefficient of recovery, linear range and others. Results Precision, sensitivity, coefficient of recovery, linear range of ECLIA have had an advantage over RIA. Conclusion ECLIA is an outstanding method applied in clinical laboratory.
[Key words] ECLI; RIA; Thyroid hormones
放射免疫法(RIA)检测成本低,但具有报告时间长、结果不稳定、同位素污染等缺点,渐趋于淘汰。近年来随着检测分析技术的发展,电化学发光(ECLI)分析法日益受到关注,本文分别采用2种方法对甲状腺激素标准品、质控品和20份患者血清甲状腺激素进行测定并对其评价,现报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料
20份血清标本取自门诊患者,均为甲状腺疾病,血标本无脂血和溶血。标准品及质控品均为罗氏公司提供。
1.2 仪器与试剂
电化学发光免疫分析仪为美国罗氏公司生产的2010型;美国产全自动γ计数仪。电化学发光免疫分析试剂购于罗氏公司,放射免疫分析试剂购于天津九鼎公司。
1.3 方法
1.3.1 精密度 用两种方法分别对中、高值质控品进行测定,每份样品连测20次,计算批内CV值。每日测定1次,连续20次,计算批间CV值。
1.3.2 线性范围 将甲状腺激素标准品(FT3 40 pmol/L,FT4 45 pmol/L,TSH 100 mIU/L)及中、高值质控品按不同比例关系混合制成评价样品,重复测定5次。坐标图上预期值与实测值的直线所达的限值即为线性范围。
1.3.3 灵敏度 分别对空白零标准做批内20次检测,分别记录放射强度和发光强度并做统计,再计算检测低限(LLD)[1]。公式:LLD=均值BIK+2SBLK。
1.3.4 回收实验 将甲状腺激素标准品(FT3 40 pmol/L,FT4 45 pmol/L,TSH 100 mIU/L)作为基质,在其中分别加入中、高值质控品作为样品1和2 ,然后分别进行测定,计算均值并进行比较。
1.4 统计学方法
采用SPSS13.0统计软件包,所有数据均以均数±标准差(x±s)表示,两组间比较计量资料采用t检验,以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 精密度
观察两种方法测定甲状腺激素的批内和批间CV结果可见,两种方法均达到了临床检验的质量要求,但电化学发光法的精密度更高。见表1、2。
2.2 线性范围
2种方法检测FT3、FT4、TSH的可报告范围:电化学发光免疫法(0.26~115) pmol/L、(0.12~116) pmol/L、(0.08~90)mIU/L。放射免疫法为(1.14~65)pmol/L、(1.69~82) pmol/L、(0.23~58)m/L。
2.3 灵敏度
两种方法检测FT3、FT4、TSH的低限,电化学发光免疫法为0.12pmol/L、0.16pmol/L、0.09mIU/L;放射免疫法为1.11pmol/L、1.77pmol/L、0.24mIU/L。
2.4 回收实验
检测结果平均回收率见表。均有较好的回收率,比较后发现电化学发光免疫法优于放射免疫法(P < 0.05)。
3 讨论
放射免疫分析始于20世纪60年代,其敏感度、特异性均较好,发生交叉反应少,准确性好、重复性好、批内批间误差低,但容易发生放射性污染,不能形成自动化,不能快速地检测、出报告[1]。电化学发光免疫法是电化学发光和免疫测定相结合的新一代标记免疫技术,近年来在国内一部分临床实验室相继应用。电化学发光免疫法不仅可用于检测激素类、肿瘤标志物类,还可用于传染病、血药浓度的监测,预计将来临床应用会更加广泛。电化学发光免疫法自动化强,可以24小时开机,能够随时满足现代医院的节奏和病人对医院的更高要求,如一些急诊项目;绒毛膜促性腺激素、肌红蛋白、肌钙蛋白等,随时检测,具有更大的临床应用价值[2]。
本组试验表明两种方法检测血清FT3、FT4、TSH的结果在精密度、线性范围、灵敏度、回收率等几方面均有显著性差异,显示电化学发光免疫法明显优于放射免疫法。电化学发光免疫法检测血清FT3、FT4、TSH时,被测抗原与抗体全部参与反应;而放射免疫法是竞争性反应,被测物和标准物都不能全部参与反应,最大结合时一般在50%左右,亦即抗体结合位点与标记抗原结合一半[3]。试验结果显示了电化学发光免疫法在可测定范围上要远胜于放射免疫法。
电化学发光可以最大程度消除样本底的干扰及对位量的散射,可以获得较高的灵敏度。另外电化学发光免疫法可以全自化,能够最大限度减少系统和随机误差。而且电化学发光免疫法试剂有效期长,检测快速准确,且安全无毒,不会出现同位素辐射污染的问题[4]。
因此,电化学发光将会成为微量法检测的发展和普及方向,可以替代放免法,使实验室的服务具有竞争力。
[参考文献]
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[3] 吴婴. 放射免疫分析与电化学发光法测定血清FT3、FT4结果分析[J]. 放射免疫学杂志,2010,23(1):29-30.
关键词:化学发光分析;植物激素;应用进展
0 引言
化学发光分析法是一种高灵敏的微量及痕量分析法,具有仪器设备简单、灵敏度高、操作方便、易与其他技术联用和实现自动化显著等优点,在药物分析、食品分析环境监测等领域的应用日益广泛。植物激素作为内源性植物生长调节剂,在植物的生长发展中具有重要研究意义,其测定方法受到国内外广大研究者的关注。化学发光分析法以高灵敏痕量分析优势在植物激素分析测定中具有重要应用。本文介绍了化学发光分析的原理,并综述了化学发光分析法植物激素分析中的应用进展。
1 化学发光分析
化学发光分析法是依据某一时刻化学发光反应产生的辐射光强来确定参与反应的相应组分的含量的分析方法。化学发光体系是化学发光法的应用前提和基础。高灵敏度、高选择性的化学发光体系的选择和使用是建立满意化学发光分析方法的关键。随着化学发光分析技术的成熟及其与其他技术的联用迅速发展,人们已发现了许多新的化学发光体系,目前常见的化学发光体系有:鲁米诺化学发光体系、高锰酸钾发光体系、Ce(IV) 发光体系、过渡金属超常氧化态发光体系等。
2 化学发光法在植物激素分析的应用
植物激素主要有6类:生长素、赤霉素、细胞分裂素、脱落酸、乙烯和油菜素甾醇。植物激素在植物体内含量甚微,分离时易破坏,掌握植物体内激素的含量变化规律,可更好地控制植物的发育,但其在使用的同时,对环境、以及人类的健康的影响亦日趋严重,已引起了人们广泛的关注[1]。化学发光分析法具有线性范围宽、灵敏度高、仪器设备简单和分析速度快等优点,其在实际样品中植物激素的含量检测中已有文献报道。张韶虹等[2]基于吲哚乙酸(IAA)对 [Ru(phen)32+]-Ce(Ⅳ)化学发光体系的发光增强作用,建立了一种化学发光直接检测IAA的新方法,该方法实现了合成样品中IAA含量的准确测定。Xi等[3]采用高效液相-化学发光法([Ru(phen) 32+]-KMnO4体系)实现了绿豆芽中的吲哚乙酸和脱落酸的含量检测,检出限分别为0.02 μg/mL、0.2 μg/mL。Neves[4]等采用Ce(Ⅳ)-HNO3-β-环糊精为发光体系实现了环境水样中IAA的含量测定,检出限为0.1mg/L。刘丽珍等[5]利用铁氰化钾-鲁米诺体系分析测定了土壤中IAA的含量,方法的检出限5.8×10-10 mol/L。米娟等[6]采用固相萃取-化学发光法测定Leukamenin E处理前后拟南芥中IAA含量的变化,回收率为90.9~100.9%。马桂贤等[7]采用铁氰化钾化学发光体系实现了土壤和池塘水中IAA的含量测定,检出限为3.0×10-8mol/L。Han等[8]采用高锰酸钾-甲醛体系对生物样品和土壤提取液中IAA进行了含量测定,检出限为1.0 nM。周国华等[9]发展了一种简化的磁性免疫分析方法,结合CdSe/ZnS纳米粒子放大化学发光信号,实现了脱落酸的高灵敏检测,脱落酸的检测范围为1pM到10 nM。
3 研究展望
随着化学发光分析法的应用日益广泛,化学发光分析法与流动注射系统、免疫技术、液相色谱等技术的联用必将拓宽化学发光分析法在植物激素分析中的应用,从而在农业和工业生产中起到重要作用。
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关键词化学发光法孕酮试剂
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.27.186
孕酮(4-孕烯-3,20-二酮)是一个C21类固醇激素,分子量314.5。孕酮是人体内分泌的一种重要的性激素,未孕女性的孕酮主要由黄体分泌,孕妇则主要由胎盘分泌。男女两性的肾上腺皮质及男性的也分泌少量孕酮[1]。孕酮的异常分泌与经前期紧张、子宫内膜的不规则脱落、痛经及黄体功能不全有关。血清孕酮浓度的测定在临床上用于判断有无排卵及未孕女性的黄体功能,对鉴别诊断宫内早早孕、先兆流产、难免流产及异位妊娠有重要价值[2],对判断男性生殖功能状态也有一定作用。郑州安图生物生产的化学发光孕酮检测试剂,采用竞争抑制法,在固相微孔板上包被羊抗鼠IgG的二抗,操作时将特异性抗孕酮抗体溶液、HRP标记的孕酮溶液和血清样本一起加入到微孔板内,室温孵育60分钟后,经过清洗,加入化学发光底物,在检测仪上进行读数,检测信号值与血清标本中的孕酮含量成反比。本文对该试剂的灵敏度、标准曲线线性、特异性、重复性、稀释准确性进行检测评价并与进口贝克曼化学发光孕酮检测试剂进行比较并综合分析[3]。现将试验结果报告如下。
资料与方法
随机抽样送检血清标本40份,-20℃保存。
仪器:LUMO化学发光仪、IWO洗板机,DXI800化学发光仪。
试剂:孕酮发光定量检测试剂盒,DXI800配套试剂。
方法:灵敏度计算,测定20份0值标准品,计算测定发光信号值的(x±S),灵敏度=(x±S)回算的浓度值;特异性计算,测定睾酮(20ng/ml)、雌二醇(1000pg/ml),回算浓度值;重复性,3次测定同3份血清标本,计算其3次测定结果的变异系数CV%;稀释回收率,用稀释液稀释两份高值标本,回收率=实测值/理论值×100%。操作严格按照试剂说明书进行,试验标本收集后,-20℃保存,室温复溶后统一测定。
统计学处理:采用SPSS10.0统计分析软件进行统计分析。
结果
灵敏度、标准曲线线性:国产孕酮检测试剂的灵敏度较高,满足临床需求,用logit-log的曲线拟合方式对标准曲线进行线性拟合R20.995以上。
特异性:特异性即交叉反应性,睾酮含量20ng/ml,雌二醇含量1000pg/ml时孕酮测定结果为0.10ng/ml和0.15ng/ml,相当于与20ng/ml的睾酮和1000pg/ml的雌二醇交无交叉反应。
重复性:3份血清标本,进行3次测定,3份标本的变异系数分别为8.64%、4.57%、5.60%,均<10%。
稀释回收率:把两份血清标本用稀释液倍比稀释后,测定其孕酮含量,各稀释比的测定稀释回收率85%~110%。
被评价试剂与对比试剂检测结果的比较:对随机抽样的40份标本用两种试剂进行同时测定标本中孕酮含量,并将两者测定结果进行统计学分析,r2=0.9790,直线回归方程y=1.0067x+0.2636,P<0.001,两者呈显著相关性。
讨论
临床检测血清孕酮的方法有放射免疫法、酶联免疫法、化学发光法、电化学发光法、磁微粒化学发光法等。酶联免疫法由于其灵敏度较低,已基本不再应用。放射免疫法,存在着放射性核素污染,试剂保存期短等缺点,目前也较少有医院使用。占主流的是化学发光法,相应试剂和仪器主要有国产和进口贝克曼、雅培、罗氏等,进口试剂价格昂贵,本文旨在对国产试剂进行评价,即能够有较好的性能,满足临床应用,又有较低廉的价格。本次评价的国产化学发光试剂,是一种基于微孔板式化学发光方法。结果显示,被评价的国产试剂的灵敏度0.09ng/ml,与20ng/ml的睾酮、1000pg/ml的雌二醇无交叉,三份标本的重复测定结果变异系数分别为8.64%、4.57%、5.60%,均<10%,稀释回收率85%~110%,与进口对比试剂的相关系数r2=0.9790,P<0.001,表明该国产试剂在灵敏度、特异性、重复性、稀释回收率等指标上能满足临床测定的要求,与进口对比试剂具有显著的相关性和符合性。国产化学发光孕酮检测试剂既能满足临床需要又能符合国情降低患者负担,在本院使用过程中,比较稳定,值得进一步推广使用。
参考文献
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2来婷,蒋庆春.血清孕酮在鉴别宫内早早孕、先兆流产、难免流产及异位妊娠的价值[J].中国临床实用医学,2007,1(3):34-36.
关键词:丙型肝炎病毒抗体检测;血液筛查;酶联免疫吸附试剂
丙型肝炎是临床上较为常见的肝类疾病,血液传播是其主要传播途径,丙型肝炎病毒感染的发病率逐渐增加,加强临床诊断和确诊尤为重要。丙型肝炎病毒抗体检测可对丙型感染患者的感染状态进行显示,本文选取2014年1月~12月我院血液筛查中的47例丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)阳性标本为研究资料,对丙型肝炎病毒抗体检测在血液筛查中的应用价值进行评价,具体如下。
1资料与方法
1.1一般资料
1.1.1标本资料 选取2014年1月~12月我院血液筛查中的47例丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)阳性标本为研究资料,由专业人员对标本进行血液筛查和血液滞留,并将其放置在零下20~25℃的温度下保存。
1.1.2试剂选择 本次研究采用Ortho酶联免疫吸附试剂、新创酶联免疫吸附试剂、重组免疫确认试剂和化学发光试剂进行检测。所有检测试剂均符合使用标准,且均在可使用的有效时间内。
1.2方法 使用重组免疫确认试剂对收集的47例丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)阳性标本进行试剂,同时,使用两种酶联免疫吸附试剂(Ortho酶联免疫吸附试剂、新创酶联免疫吸附试剂)以及化学发光试剂对标本进行阳性检测。严格按照相关标准及试剂使用说明书进行操作,若检测结果中阳性值和阴性性均在可允许的范围内,则判定检测结果有效。
1.3数据分析 对四种检测方法的阳性检出率进行对比分析;通过对酶联免疫吸附试剂对标本的检测OD值与阳性判定值(S/CO)范围的比较,分析检测结果真假阳性率的内在相关性。
1.4统计学方法 本研究所有数据均采用SPSS13.0统计软件进行数据统计,计量资料用(x±s)进行表示,采用t进行检验,技术资料用%表示,采用χ2进行检验,P
2结果
2.1 四种检测方法在血液筛查中丙型肝炎病毒抗体阳性标本检测结果比较 Ortho酶联免疫吸附试剂的阳性检出率为76.60%,新创酶联免疫吸附试剂检阳性检出率为100%,重组免疫确认试剂的阳性检出率为80.85%,化学发光试剂检出的阳性检出率为80.85%。Ortho酶联免疫吸附试剂的阳性检出率优于新创酶联免疫吸附试剂,化学发光试剂阳性检出率优于两种酶联免疫吸附试剂,四种检测方法间差异具有统计学意义(P
2.2 四种检测方法下的S/CO值与检测结果真阳性率的相关性 Ortho酶联免疫吸附试剂和新创酶联免疫吸附试剂在S/CO值>0.9的条件下,阳性标本的真阳性率达到99.89%,当S/CO值
3讨论
丙型肝炎病毒抗体若发生感染,则通常为持续性感染,加强血液筛查检测对控制感染极其重要。若丙型肝炎病毒抗体检测结果显示为阳性,则证明患者已为丙型肝炎感染者。由于丙型肝炎感染者在受到感染后,丙型肝炎病毒抗体出现速度较慢,这就导致丙型肝炎病毒抗体检测结果中极有可能出现少量的假阴性诊断结果,延误患者的临床治疗,对患者的生存质量造成严重影响。相关研究显示,我国现阶段主要采用酶联免疫吸附试剂法进行检测,但不同形式的酶联免疫吸附试剂的检测结果和检测能力存在一定差异,此外,其检测的灵敏度和特异性也存在不同程度的差异,导致检测结果的可信度较低。本次研究中,Ortho酶联免疫吸附试剂的阳性检出率为76.60%,新创酶联免疫吸附试剂检阳性检出率为100%,当S/CO值
通过对近年来的临床报道和医学文献进行研究,发现化学发光试剂的阳性检出率较高,同时,假阴性和假阳性的现象较少。若化学发光试剂可与Ortho酶联免疫吸附试剂和新创酶联免疫吸附试剂联合使用,血液筛查的有效性和安全性会不断提升。以经济、适用为主要出发点和落脚点,化学发光试剂可对酶联免疫吸附试剂中不确定的标本使用重组免疫确认试剂进行再次确认,可提高血液筛查的准确率和有效性。
本次研究结果显示,Ortho酶联免疫吸附试剂的阳性检出率优于新创酶联免疫吸附试剂,化学发光试剂阳性检出率优于两种酶联免疫吸附试剂,四种检测方法间差异具有统计学意义(P
综上所述,化学发光试剂联合两种酶联免疫吸附试剂的阳性检出率较高,在丙型肝炎病毒抗体检测中具有较高的临床应用价值,可为临床诊断和治疗提供重要数据支持,从而提升丙型肝炎患者的生存质量,因此值得在临床上进一步推广和应用。
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胰岛B细胞的功能测评通常通过测量血清当中的胰岛素实现的,在目前临床当中,最为常用的测定方法有化学发光免疫分析(CLIA)、酶联免疫分析(ELISA)和放射免疫分析(RIA)等。本文采用化学发光检测法(CLIA)对50名糖尿病患者进行胰岛素的检测,以观察法学发光检测法对胰岛素检测的有效程度。现在在结果报道如下:
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择在2010年2月到2010年8月到我院治疗的住院糖尿病患者50例,均经过专科资深医生确诊的糖尿病患者。其中男性28例,女性22例,年龄从36到71岁,平均为53.3岁。患者的空腹血糖在10-16.5mmol/L之间。另外取50名健康的体检者作为对照组,对照组被试均无糖尿病史和严重肝肾疾病。对照组中男性25例,女性25例,年龄37-72岁,平均年龄52.5岁。
1.2 检测方法 糖尿病组和对照组所有被试都未进行过胰岛素治疗。在检测前一天晚餐之后禁止进食,检验日当天停止一切药物,在清晨取空腹静脉血。抽血后进食二两馒头一个或75g葡萄糖,在餐后1小时、2小时、3小时后各抽血一次,之后糖尿病组采取化学发光检测法测定胰岛素。化学发光检测法的试剂盒由北京科美东雅公司提供,并使用其公司的化学发光分析仪进行测定。对照组采用放射免疫分析法进行胰岛素检测,试剂盒为北京北方生物技术研究所提供,并用伤害原子核研究所日环仪器厂的全自动计数仪进行测定。
1.3 统计方式 采用SPSS13.0软件进行数据统计分析,计量资料通过x±s表示。统计方式主要为t检验。
2 结果
胰岛素的分泌详情参见表1。在馒头测试当中,糖尿病患者的空腹胰岛素值高于对照组,其差异具有统计学意义(P<0.05)。馒头进食后,对照组的胰岛素值在1小时处达到分泌最高值;糖尿病组的胰岛素值在2小时处达到分泌最高值,但峰值不如对照组高,且糖尿病组在进食3小时后仍无法回复到正常水平。两种测定方法的胰岛素检测结果的比较详见表2。
3 讨论
胰岛是人体内的负责调节物质储存与动员的器官,可分泌胰岛素,胰岛素的不足可引发糖尿病(diabetes)。原发性糖尿病可分为1型糖尿病和2型糖尿病,其中1型糖尿病是相对少见的胰岛素依赖型,诊断比较简单;2型糖尿病是临床上多见的非胰岛素依赖型。2型糖尿病的“三多一少”症状不如1型明显。
糖尿病虽然无即时生命危险,但长期患病可引起一系列严重的并发症。如心血管病变、肾脏病变、神经病变、视网膜上病变和足溃疡(糖尿病足)。此外,牛群还发现由于糖尿病的慢性终身性和不可根治性,使得很多患者都背负了沉重的思想负担,继而导致情绪障碍等心理问题。因此,对于糖尿病的确诊,增加糖尿病检测的灵敏度和简便性,是目前公共卫生领域一个非常引人注目的问题。众多医护人员也为糖尿病的治疗护理出谋划策。如农丽宁就认为进行胰岛素治疗的病人可用对家属进行指导、为患者提高信心和惊醒胰岛素治疗只是的健康宣教等护理细则。
在目前临床当中,最为常用的测定方法有化学发光免疫分析(CLIA)、酶联免疫分析(ELISA)和放射免疫分析(RIA)等。过去以放射免疫法(RIA)较为多采用,此法的使用已有超过30年的历史了。在1959年由美国学者Yalow等人首先建立,当时取得了十分振奋人心的效果。然而由于该法的操作时间长、保质期短、检测的设备十分昂贵等缺憾,影响了RIA在临床糖尿病诊断当中的推广。化学发光免疫分析(CLIA)是继酶免疫测定法和放射免疫测定法后出现的一种新型技术,它既具化学发光分析的灵敏性,又具免疫测定的特异性。不单有快速、特异和敏感不差于其他两者,又以其无毒性、安全稳定性和经济实用性的优势。目前发光免疫分析在应用在临床当中超过40项,例如在生殖系统、甲状腺、贫血、治疗药物的检测等,其应用广泛并快速准确的特点已被广泛认可。但由于试剂的费用昂贵,且可能造成实验人员的损害,因此制约了其发展。
化学发光免疫分析法的灵敏度高、范围广、使用的设备简便的一种令人满意的胰岛素测定法,而且其成本低,无放射性污染,是目前较为有发展前途的一种方式。本次研究的结果也表明,在空腹时糖尿病患者的胰岛素水平较非糖尿病患者高,其原因可能是糖尿病患者在空腹的时候血清的生长激素和皮质醇上升,令到患者空腹的血糖升高,这一点贾伟平等已有资料表明。糖尿病人胰岛分泌胰岛素的反应时间较非糖尿病人慢,胰岛素的回复速度也较非糖尿病人慢,可见糖尿病人的胰岛B细胞功能较差。CLIA法的检测时间也较RIA的检测时间短,因此认为CLIA可作为糖尿病的快速诊断方法之一,在临床当中可广泛推广。
参考文献
[1] 谢玮,赵枰,陶国华.化学发光免疫分析测定胰岛素及C肽在2型糖尿病诊断中的临床应用[J].标记免疫分析与临床,2009,16(5):283-285.
[2] 牛群.糖尿病患者生存质量和心理教育的关系研究综述[J].中外医疗,2009,33:172.
[关键词] 化学发光法;CA125;卵巢肿瘤
[中图分类号] R737.31 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2010)06-81-02
CA125的主要用途是协助诊断卵巢癌,估计疗效和监测病程[1]。随着化学发光仪的普及,化学发光法检测血清CA125已成为鉴别卵巢肿瘤性质的常规项目。然而,由于化学发光法检测CA125的高灵敏度和低特异性,导致了较高的假阴性和假阳性率。现分析锡矿山中心医院2006年8月~2009年8月的化学发光法CA125检测病例223例,以期让CA125更好地应用于临床。
1临床资料
1.1一般资料
本组病例共223例,为2006年8月~2009年8月在娄底市锡矿山中心医院妇产科住院患者,年龄最小者8岁,最大者61岁,平均年龄37.2岁。
1.2分析方法
全部病例手术前均行化学发光法CA125检测,以65U/mL作为界限,≥65U/mL为阳性,
1.3统计学处理
计数资料采用χ2检验,P
2结果
该223病例,手术后经病理确诊,卵巢浆液性癌7例,浆液性囊腺瘤62例,黏液性癌2例,黏液性囊腺瘤86例,单纯性囊肿25例,黄体囊肿29例,其他肿瘤12例。化学发光法检测浆液性癌阳性6例,浆液性囊腺瘤阳性41例,黏液性癌阳性2例,黏液性囊腺瘤34例阳性,单纯性囊肿8例阳性,黄体囊肿2例阳性,其他5例阳性;免疫组化CA125浆液性癌7例阳性,浆液性囊腺瘤62例阳性,其他2例阳性。经χ2检验,化学发光法检测CA125与免疫组化CA125诊断卵巢肿瘤差异具有显著性(χ2= 6.95,P
3讨论
CA125作为卵巢癌的首选标志物,是1983年由Bast等从上皮性卵巢癌抗原检测出可被单克隆抗体OC125结合的一种糖蛋白。95%的健康成年妇女CA125水平≤35U/mL,如果患者血清CA125的水平是基线水平的两倍,就应立即进行物理检查,如阴道超声和CT检查;CA125迄今为止是用于卵巢癌的早期诊断、疗效观察,如果以65U/mL为界限,ⅢⅣ期癌变准确率可达100%。CA125临床正常参考范围为血清
CA125是一种相对分子量为200KD的糖蛋白,在血清中CA125以群体形式存在,普遍分布于胸膜、心包、腹膜、子宫内膜、生殖道和系膜等间皮组织细胞表面。当这些部位发生恶性变或受到炎症刺激时,血清CA125水平将显著升高。浆液性腺癌CA125的升高幅度比黏液性腺癌更明显;在复发监测中,CA125的升高可早于临床几个月;在消化道恶性肿瘤如胰腺癌、肝癌、胃癌、肠癌,以及慢性胰腺炎、肝硬化、肺腺癌、特别是浆膜腔结核[2]、盆腔炎性病变、子宫内膜异位症时,血清CA125水平亦可升高。在卵巢良性囊腺瘤和恶性囊性上皮瘤的穿刺液中,CA125水平可明显升高。因此,CA125不能作为卵巢癌单一的检测指标。鉴于CA125的非特异性,在许多良性和恶性病变中,均显示水平升高[3]。Bilgin等[4]回顾分析728例妇科癌症病人中10例腹、盆腔病变误诊为晚期卵巢癌的病例,该10例因疑似晚期卵巢癌实施手术,经各项检查显示,10例有数种腹、盆腔病变,如积液、肿块、肥厚等,血清CA125水平升高,其中6例已临床确诊卵巢癌,但穿刺结果为良性细胞,实施剖腹探查,病理确诊为结核,抗结核化疗后2个月,全部治愈,CA125恢复正常。对于腹膜结核被误诊为晚期卵巢癌的病人,腹部穿刺不能排除结核,血清CA125水平升高不能鉴别诊断。刘洋等[5]在临床实践中发现,大量结核病人血清CA125水平也呈升高趋势,结核病人血清CA125水平明显高于正常对照组,阳性率高达85.7%,经抗结核治疗后,随病情的缓解CA125水平呈下降趋势,病愈后CA125水平恢复到正常参考范围内。
CA125起源于胎儿体腔上皮组织,免疫组化证实,CA125在胎儿体腔上皮有表达。CA125是卵巢浆液性癌一种癌蛋白,卵巢上皮性肿瘤中,浆液性癌、内膜样癌、透明细胞癌、小细胞癌CA125阳性。在病理诊断中,CA125用于区别卵巢原发性和转移性癌,主要是证实卵巢特异性抗原或非卵巢性抗原存在,有报道CA125抗原表达有实用价值,因为此抗原仅存在于苗勒管衍生的上皮组织如卵巢上皮、输卵管上皮、子宫内膜和宫颈内膜上皮等,这些组织发生的癌CA125呈阳性表达,但黏液性癌一般没有表达。卵巢其他的肿瘤如性索-间质肿瘤、卵巢的生殖细胞肿瘤、神经外胚层肿瘤及伴有肝样分化的肿瘤免疫组织化学CA125阴性[6]。
血清CA125的临床意义:(1)卵巢癌病人血清CA125水平明显升高,手术和化疗有效者CA125水平很快下降,若有复发时,CA125升高可先于临床症状之前。(2)其他非卵巢恶性肿瘤也有一定的阳性率,如乳腺癌40%、胰腺癌50%、胃癌47%、肺癌44%、结肠直肠癌32%,其他妇科肿瘤43%。(3)非恶性肿瘤,如子宫内膜异位症、卵巢囊肿、盆腔炎、胰腺炎、肝炎、肝硬化等虽有不同程度升高,但阳性率较低。(4)胸腹水中发现有CA125升高,羊水中也能检出较高浓度的CA125。(5)早期妊娠头3个月内也有CA125升高的可能。(6)行经期、子宫纤维变性、急性输卵管炎、胸膜炎和心包感染等也稍高[7]。
化学发光检测血清CA125,受体腔上皮、卵巢、输卵管、子宫内膜上皮以及间皮等多种抗原因素的影响,灵敏度高而特异性差,在许多病理诊断免疫组织化学CA125阴性的肿瘤中,也呈现CA125明显升高的现象;而病理免疫组织化学CA125是以抗体直接作用于受检组织细胞,排除了其他组织因素的影响,因而特异性高,应用价值大。我们的检测结果亦表明化学发光法检测血清CA125与免疫组织化学CA125的差异具有显著性。
综上所述,化学发光法检测血清CA125不是卵巢癌的特异性标志物,不能作为卵巢癌单一的检测指标,输卵管腺癌、子宫内膜癌、宫颈癌、胰腺癌、乳腺癌、肺腺癌以及慢性胰腺炎、肝炎、肝硬化、浆膜腔结核、盆腔炎、胸腹腔积液、子宫内膜异位等患者血清CA125水平也会升高。CA125作为一种非特异癌胚抗原,其实际参考意义也并不局限于单纯的盆腔肿瘤,在良性病变中也有一定的参考价值。
[参考文献]
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[2] 于维霞,张治荣,郭悦鹏. CA125检测在活动性结核判定及疗效评估中的价值[J]. 中国实用内科杂志,2003,(2):2.
[3] Sevinc A, Camic, Turk HM,et al. How to interpret serum CA125 levels in patients with serosal involvement? A clinical dilemma[J]. Oncology,2003,65(1):1-6.
[4] Bilgin T,Karabay A,Dolar E,et al. Pexitoneal tuberculosis oith pelvic abdominal mass,ascites and elevated CA125 mimicking advanced ovarian carcinoma: a series lf 10 cases[J]. Int J Gynecol Cancer,2001, 11:290-294.
[5] 刘洋,申红,汪远山. 蛋白芯片法检测CA125在卵巢癌筛查和诊断中的价值[J]. 中国误诊学杂志,2003,3(6):855-856.
[6] 纪小龙. 免疫组织化学新编[M]. 北京:人民军医出版社,2005:353 -369.