时间：2023-05-30 09:15:04
开篇：写作不仅是一种记录，更是一种创造，它让我们能够捕捉那些稍纵即逝的灵感，将它们永久地定格在纸上。下面是小编精心整理的12篇载脂蛋白，希望这些内容能成为您创作过程中的良师益友，陪伴您不断探索和进步。
首先，载脂蛋白b偏高的人一定要注意饮食控制，这是治疗的基础，需要少吃高脂肪食物，多吃鱼和豆制品，多吃蔬菜、水果等。
其次，载脂蛋白b偏高的人要根据自身情况进行运动锻炼；在饮食控制、运动锻炼的基础上，使用他汀类降血脂药物如氟伐他汀、辛伐他汀等治疗。
最后，对于载脂蛋白b偏高的情况一定要查明原因，及早对症治疗，对于生理性原因引起的日常注意合理的饮食调养即可，若是病理性原因引起的，一定要尽早对症治疗。
（来源：文章屋网 ）
原因一：饮食原因造成载脂蛋白b偏高，体内摄入脂肪含量过高，而有不能及时的代谢，造成载脂蛋白b偏高，此种情况往往会使载脂蛋白B与载脂蛋白A均偏高。
原因二：肝功能异常，肝功异常导致低密度脂蛋白胆固醇代谢受阻，作为其主要的结构蛋白的载脂蛋白b也会相应升高。
原因三：高血压、心血管疾病患者一般会出现载脂蛋白b偏高的现象，常见于老年人。
（来源：文章屋网 ）
【关键词】 转基因鼠;hapoe基因;甘油三酯;胆固醇
【摘要】 目的 探讨载脂蛋白e基因在转基因鼠体内的表达及其在血脂代谢中的作用。方法 显微注射法建立hapoe转基因鼠，southern杂交对阳性小鼠基因组鉴定。elisa测定血清载脂蛋白e含量。酶法分别测定小鼠血清甘油三酯(tg)和血清胆固醇(tc)。结果 转基因鼠血清载脂蛋白e含量分别为：tg4鼠(2.06±0.22) mg/l，tg7鼠(1.89±0.33) mg/l。血清tg水平转基因鼠〔12月龄：tg4(2.89±0.31)mmol/l,tg7(1.99±0.45)mmol/l〕与对照组鼠〔12月龄：(2.05±0.12)mmol/l〕比较有显著性差异(p<0.05)，血清tc水平转基因鼠〔12月龄：tg4(3.02±0.14)mmol/l〕与对照组鼠〔12月龄：(2.11±0.01)mmol/l〕比较也表现出显著性差异(p<0.01)。结论 hapoe基因异常表达影响到了小鼠的血脂代谢。
【关键词】 转基因鼠;hapoe基因;甘油三酯;胆固醇
【abstract】 objective to establish transgenic mice and investigate the role of hapoe gene in lipoprotein metabolism. methods the human apoe transgenic mice were generated via microinjection. southern blot hybridization was used to identify the expression of the gene. the human apoe level was measured in the serum of hapoe transgenic mice with elisa methods. the serum triglyceride and cholesterol were also elevated with the enzymatic methods. results the human apoe gene could be expressed in the first generation of transgenic mice. the apoe levels of transgenic mice〔tg4(2.06±0.22) mg/l,tg7(1.89±0.33) mg/l〕 were significant. the serum triglyceride level were high in transgenic mice〔12 month age groups: tg4(2.89±0.31)mmol/l,tg7(1.99±0.45)mmol/l〕 than that in the respective control mice〔12月龄：(2.05±0.12)mmol/l〕(all p<0.05).and serum cholesterol level in the 12 month transgenic mice 〔tg4(3.02±0.14)mmol/l〕 were higher than that in control mice (2.11±0.01)mmol/l(p<0.01). conclusions the overexpression of apoe gene impairs the lipoprotein metabolism.
【key words】 mice transgenic; hapoe gene; triglyceride; cholesterol
遗传基因的异常是血脂代谢的基础〔1〕。载脂蛋白e(apoe)是血浆脂蛋白的组成成分之一，与受体蛋白结合，调节机体血脂代谢〔2〕，apoe基因的异常表达将造成血脂代谢紊乱，并与动脉粥样硬化、高胆固醇(tc)血症、高甘油三酯(tg)血症等密切相关〔3〕。因此建立转基因鼠并利用转基因鼠从整体水平上研究apoe基因在机体内的作用，对探讨血脂代谢及相关疾病的发病机制具有十分重要的意义。
1 材料与方法
1.1 实验动物
显微注射方法获得hapoe4、hapoe7转基因鼠，用于繁殖后代，建立转基因鼠系〔4〕。
1.2 方法
1.2.1 转基因鼠建立与分析
制备显微注射用dna片段及建立鼠系按已报道的文献操作〔4〕，即将显微注射用dna片段纯化，注射到受精卵的雄性原核中，共获得73只小鼠，提取4周龄小鼠基因组dna，pcr初筛，southern杂交印证，杂交信号经molecular dynamics扫描分析，再将首建鼠与正常c57bl/6j杂交繁育，建立转基因鼠系。
1.2.2 目的基因表达
为诱导增强hapoe基因的表达，在f1代小鼠饮用水中加入20 mmol/l znso4，2 w后，鼠尾静脉取血，测定apoe蛋白水平。操作按试剂盒说明进行。
1.2.3 血清tc和tg水平
参与实验的3月龄、12月龄小鼠，均禁食、禁水过夜，鼠尾取血，甘油磷酸化酶(gpo)和tc氧化酶(chodpap)法分别测定血清tg和tc水平，操作按试剂盒说明进行。
1.3 统计学处理
应用spss13.0统计软件进行处理，数据以x±s表示，采用t检验。
2 结 果
2.1 转基因鼠鉴定及鼠系建立
以人apoe基因组dna/ecorⅰ2.0 kb片段为探针，得到4只apoe4鼠和2只apoe7鼠，之后将转基因鼠分别与正常c57bl/6j鼠杂交繁育，f1代杂合子被用于进一步的实验。见图1。1～4为转基因鼠; a：apoe4探针杂交;b：apoe7探针杂交图1 southern杂交结果分析
2.2 f1代仔鼠基因表达
测定结果显示：zn诱导2 w后tg4鼠、tg7鼠的基因表达水平〔tg4鼠(3.01±0.10) mg/l，tg7鼠(2.31±0.15) mg/l〕与诱导前比较〔tg4鼠(2.06±0.22) mg/l，tg7鼠(1.89±0.33) mg/l〕均有显著性差异(p<0.05)。
2.3 血清tg和tc水平
与对照组鼠比较，转基因鼠血清tc和tg水平均有显著差异(p<0.05，p<0.01)。见表1。表1 血清tc和tg水平
3 讨 论
elisa结果显示，转基因鼠诱导后的aope水平较诱导前明显提高，表明hapoe基因在小鼠体内表达良好，并且zn诱导增强了启动子的活性。随后的血清tg和tc水平显示，在常规饮食结构情况下，hapoe基因的异常表达引起了转基因鼠血脂代谢的变化，进一步说明hapoe基因组dna表达了具有生物学功能的物质。
apoe的受体结合区域主要涉及126191位氨基酸，该区域内碱性氨基酸残基在与受体结合中具有重要的作用，当该区域为碱性氨基酸时，apoe受体结合活性明显增高，其结果是血清tg水平降低，tc水平增高〔5〕，而apoe4基因的158位上的氨基酸是精氨酸(arg)，因而apoe4与受体结合的活性应增高。但本结果显示血清tg和tc水平均明显高于对照组。有关血清tg水平与apoe等位基因间的关系众多研究结果不乏矛盾之处，有待于进一步的探讨。
apoe7基因为一突变基因(glu244,245lys244,245)，与脂代谢紊乱，特别是高tg血症有关〔6〕,且临床迹象表明约5%以上的动脉粥样硬化的高脂血症患者携带有apoe7基因。实验显示apoe7转基因鼠血清tg水平明显高于对照组鼠(p<0.05)。有关apoe7异构蛋白在体内的作用机制还不十分清楚，有待于进一步的研究。
【参考文献】
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关键词：2型糖尿病；血脂；载脂蛋白；Meta分析
中图分类号：R587.1 R255.4 文献标识码：B
doi：10.3969/j.issn.1672-1349.2014.09.027 文章编号：1672-1349（2014）09-1084-03
2型糖尿病是一种慢性的全身代谢性疾病，糖尿病合并高脂血症是患者致残或死亡的重要原因，观察患者的血脂指标的变化是一种早期有效的预测手段，对患者及时调脂、降糖治疗有重要的指导意义[1]。国内外有关2型糖尿病患者血脂异常的文章较多，但结果尚不一致，本研究采用Meta分析方法对国内相关研究进行了综合分析与评价。
1 资料与方法
1.1 纳入与排除标准
1.1.1 研究类型 纳入2000年―2013年国内公开发表的关于2型糖尿病与血脂及载脂蛋白水平关系的独立病例对照研究，剔除重复报道，报道不完整无法利用的文献。
1.1.2 研究对象 2型糖尿病组（DM），累计病例753例，糖尿病的诊断标准符合世界卫生组织（WHO）（1980年、1985年、1999年）或美国糖尿病协会（ADA，1997年）的诊断标准。对照组（NCG）为年龄、性别与糖尿病组相当的门诊非2型糖尿病检查者。
1.2 文献检索 以“2型糖尿病、血脂、载脂蛋白”为关键词检索中国期刊全文数据库（2000年―2013年）、万方数据库（2000年―2013年）、维普数据库（2000年―2013）、中国生物医学文献数据库（2000年―2013年），结合手工文献检索的方法，查阅与该课题有关的文献。
1.3 数据提取与质量评价 由两名评价员独立使用统一的提取表阅读所获文献，以确定是否符合纳入标准，如遇分歧可通过讨论解决或由第三方裁定。依据Lichtenstein[2]的标准对纳入研究进行质量评价。
1.4 统计学处理 统计分析由Cocrane协作网提供的RevMan 5.0完成，采用卡方检验对纳入研究进行异质性分析，若P
2 结 果
2.1 纳入文献基本情况 排除了重复报道、个案分析、综述等文献，最终纳入文献10篇，地点均为国内。共1 362例研究对象，糖尿病组753例，对照组609例。测量总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）低密度脂蛋白（LDL-C）、 载脂蛋白A（apoA）、载脂蛋白B（apoB）、 apoA/apoB。详见表1。
表1 纳入文献基本情况
2.2 Meta分析结果 纳入的10项研究中有统计学异质性，P值均小于0.05，故使用随机效应模式进行合并分析，结果显示两组血TC、TG、HDL-C、LDL-C、apoA、apoB、apoA/apoB水平差异均有统计学意义。详见表2。森林图见图1～图7。
表2 各测量指标Meta分析结果
图1 2型糖尿病与TC水平关系的Meta分析
图2 2型糖尿病与TG水平关系的Meta分析
图3 2型糖尿病与HDL-C水平关系的Meta分析
图4 2型糖尿病与LDL-C水平关系的Meta分析
图5 2型糖尿病与apoA水平关系的Meta分析
图6 2型糖尿病与apoB水平关系的Meta分析
图7 2型糖尿病与apoA/apoB水平关系的Meta分析
3 讨 论
美国胆固醇教育计划成人治疗组指南（NCIP-ATP Ⅲ）明确将糖尿病视为冠心病的等危症，即糖尿病患者发生冠心病的绝对危险相当于冠心病患者再发冠心病的危险性[13]。WHO的研究显示，冠心病是糖尿病患者的死亡原因之一，占其死亡人群总数的75%，而绝大多数的糖尿病患者合并脂代谢紊乱，脂代谢紊乱为糖尿病及其并发症的原发病理生理改变[14]。
血脂是血浆中中性脂肪和类脂的总称。高TC、高TG、低HDL-C被认为是动脉粥样硬化的重要危险因素[15，16]。而LDL-C易于被氧化修饰，容易通过血管内皮，所以对动脉粥样硬化斑块的形成更具危险性。血浆脂蛋白是由蛋白质[载脂蛋白（apo）]和三酰甘油、胆固醇、磷脂等组成的球形大分子复合物。apoA蛋白是HDL-C的结构蛋白，apoA的血清浓度可以代表HDL的含量。apoB是LDL的结构蛋白，有研究表明apoB是各血脂指标中较好的反应动脉硬化的标志物[17]。而apoA/apoB是诊断动脉粥样硬化最重要的指标，较单项apoA和单项apoB指标更有意义。
国内外有关2型糖尿病与血脂及载脂蛋白水平关系的研究较多，研究结果尚有争议，国内尚未有两者关系的Meta分析。本文基于国内人群的Meta分析结果显示，2型糖尿病组与正常对照组相比，TC、TG、HDL-C、LDL-C、apoA、apoB、apoA/apoB 水平差异有统计学意义，提示2型糖尿病引起的血脂紊乱表现为TC、TG、LDL-C、apoB、apoA/apoB水平升高，HDL-C、apoA水平降低。需要指出的是，只检索了中文数据库，最终纳入10篇中文文献，没有纳入灰色文献及外文文献，存在检索偏倚和发表偏倚，且纳入的文献均为病例对照研究，在说明两者相关性上缺乏足够的说服力，只能说明两者有关联。2型糖尿病可以引起血脂紊乱，测量血脂对防治2型糖尿病具有重要的意义，因此在2型糖尿病的诊疗过程中应该密切观察各项血脂指标的变化，及时采取相应措施，减少引起心血管并发症的相关危险因素。
参考文献：
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关键词：载脂蛋白E；血管性痴呆；多态性检测
为了对载脂蛋白E基因多态性对血管性痴呆患者的症状进行诊断和病情程度进行评价的临床效果进行研究分析，使临床对血管性痴呆患者的症状有更加全面的了解，为临床提供对血管性痴呆患者进行诊断的有效方法，使该类患者病情程度能够得到更加客观的评价，组织进行了此次研究。在研究的整个过程中，抽取在过去一段时间内就诊的患有血管性痴呆和脑梗死的临床确诊患者以及健康体检的健康人各30例，对三组研究对象的载脂蛋白E水平进行检测，并对结果进行比较分析。现将分析结果报告如下。 1 资料与方法
1.1 一般资料：选取2008年10月～2011年10月我院就诊的患有血管性痴呆和脑梗死的临床确诊患者以及健康体检的健康人各30例。A组男17例，女13例，年龄61～77岁，平均68.3岁；B组男16例，女14例，年龄62～79岁，平均69.2岁；C组男14例，女16例，年龄64～80岁，平均69.7岁。抽样研究对象的自然资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。所有患者在接受治疗前，均经过相关的临床检查后确诊。
1.2 方法：将抽样中的三组共90例研究对象分别定义为A、B、C三组，对三组研究对象的载脂蛋白E水平进行检测，并对结果进行比较分析。
1.3 统计学处理：在本次研究过程中所得到的所有相关数据，均采用SPSS 14.0统计学数据处理软件进行处理分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
经过仔细研究后我们发现，A组研究对象的载脂蛋白E水平明显高于B、C两组，差异有统计学意义（P＜0.05）；B组研究对象的载脂蛋白E水平略高于A组研究对象，差异无统计学意义（P＞0.05）。三组患者载脂蛋白E基因频率比较见表1。
表1 三组患者载脂蛋白E基因频率比较[例（%）]
组别
ε2/2
ε3/3
ε4/4
ε2/3
ε2/4
ε3/4
A组
0（0.0）
17（56.7）
1（3.3）
2（6.7）
1（3.3）
9（30.0）
B组
1（3.3）
19（63.3）
0（0.0）
2（6.7）
2（6.7）
6（20.0）
C组
1（3.3）
20（66.7）
0（0.0）
2（6.7）
1（3.3）
6（20.0）
3 讨论
载脂蛋白E（ApoE）是机体脂质代谢过程中的一种非常重要决定性因素，其结构基因具有遗传多态性特点[1]。临床上认为导致患者出现血管性痴呆（VaD）症状的因素有很多，如脑卒中的具体部位、数量及大小等因素，但关于遗传因素特别是与ApoE基因的多态性因素的报道和研究目前还相对较少[2]。载脂蛋白E主要作为乳糜微粒的一种残基受体和LDL受体的一种配体在机体血脂代谢过程中起非常重要的作用。相关研究结果表明，载脂蛋白E是导致患者出现动脉粥样硬化和冠心病症状的一个重要因素[3]。载脂蛋白E2可以使血浆中的TC、LDL水平明显降低，HDL水平明显升高；载脂蛋白E4则能够使血浆中的TC、LDL水平明显升高，HDL水平明显降低。通常情况下临床认为，血浆胆固醇水平变化的8%左右与载脂蛋白E基因多态性有关[4]。载脂蛋白E对神经系统也有非常明显的影响，其参与神经系统的许多生理和病理过程，与神经系统的一些变性疾病、脑血管类疾病、血管性痴呆、水肿性损伤等多种临床常见疾病有关[5]。载脂蛋白E在导致血管性痴呆患者发病发病发面的主要作用机制目前还不是十分明确，相关研究认为可能与以下因素有关[6]：①导致机体血脂代谢功能发生紊乱，对动脉粥样硬化的形成起到促进作用；②对巨噬细胞、泡沫细胞的形成产生刺激效果，作用于脂蛋白的结构蛋白可以直接参与动脉粥样硬化的形成过程；③ε4基因携带者神经细胞缺血性损伤的程度相对较重；④对患有脑血管病的患者的预后产生极大影响，ε4对神经细胞损伤后神经功能的恢复具有阻止作用。
总而言之，载脂蛋白E水平明显升高，是血管性痴呆患者的一个非常重要的临床特征性表现，对这一指标进行检测，可以对该类患者进行准确诊断并对症状变化情况进行客观的评价，值得临床进一步推广。
4 参考文献
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载脂蛋白E(apoE)是一种富含精氨酸（Arg）的碱性蛋白质，由于apoE与冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)关系密切，至今仍然是大家研究的热点之一。研究认为apoE是人体中最重要的载脂蛋白之一，其基因多态性是决定血脂水平进而影响动脉粥样硬化发生发展的遗传因素之一， apoE 缺陷的人血浆胆固醇(TC)水平明显上升，容易发展为CHD。近年来从apoE 的基因多态性出发，研究apoE在CHD发病机制中的作用取得很大进展。笔者就此作一简要的综述。
1 人类apoE的生物学特性
1.1 人类apoE的分子生物学 人apoE的双性а-螺旋结构是其结合和转运脂质的结构基础。它由299个氨基酸组成，分子量34145D ，含32个Arg和12个半胱氨酸（Lys）。apoE 分子可被凝血酶分解为二个区域，N-端区较稳定，该片段的136～158 位肽段为受体结合位点。C-2端区不稳定，是与脂蛋白的结合区。apoE异构体突变常发生在中段（112～158氨基酸残基），这些突变几乎均导致各种高脂蛋白血症和其他的动脉粥样硬化性疾病，说明了该区段的重要性。
1.2 人类apoE的基因结构 apoE由位于人类第19号染色体上的单一结构基因所编码，基因长度约为3.7kb。包括4个外显子（长度分别为44、66、193和860bp）和3个内含子（长度分别为760、1092和582bp）。apoE蛋白前体由317个氨基酸组成，含有18个氨基酸的信号肽，成熟的apoE蛋白由299个氨基酸组成。apoE基因的调节区位于5′末端上游和第一个内含子中。
1.3 人类apoE的多态性 apoE具有明显的多态性，已发现至少30种以上的多态性。人apoE主要有3种异构体即E2、E3、E4，在人群中主要表现两种多态性，即外显子4和内含子1内增强元件的多态性。外显子4基因的3种等位基因组成六种基因型：3种纯合子即E2/2、E3/3、E4/4；3种杂合子为E3/2、E4/2、E4/3。3种等位基因形成的3个异构体间的区别仅在于第112位和158位氨基酸残基的不同。ε3的产物在112位是Arg，158位是Lys；ε2在这两个位点均为Lys；ε4均为Arg。apoE3和apoE4与LDL受体有相同的结合活性，apoE2与低密度脂蛋白(LDL)受体结合活性差，只有apoE3或apoE4与LDL受体结合活性的2%。
2 apoE基因多态性与CHD的关系
2.1 apoE生理功能与CHD的关系 apoE是多种脂蛋白的重要结构及功能蛋白质。其主要存在于乳糜微粒（CM）、VLDL、LDL和部分高密度脂蛋白（HDL）中。体内许多组织能合成和分泌apoE，主要由肝脏合成，近来发现脑、肾、骨胳、肾上腺及巨噬细胞也能合成。apoE作为配体与机体组织细胞的LDL受体、VLDL受体结合，有助于脂质在周围组织被利用及将胆固醇运送至肝脏代谢排除。apoE基因多态性与CHD及动脉粥样硬化的血脂代谢异常尤其是LDL、TC增高的关系最为密切，其他诸如脂蛋白α、甘油三酯(TG)等也与CHD有关系。apoE基因多态性一旦发生变化，可引起一系列的疾病。祝成亮等［1］应用多重聚合酶链反应对113例高脂血症患者和108例健康对照者进行apoE基因型分析，高脂血症患者中apoE的ε4等位基因频率明显高于健康对照组，认为apoE基因多态性与高脂血症有关。而此因素正是CHD的危险因素之一，可见apoE是脂类代谢和心血管疾病的决定因子之一。
2.2 apoE基因多态性和(或)多因素相互作用与CHD的关系 人们早就注意到apoE基因型的种族变异性，近年来国内外许多研究表明［2～5］，apoE基因型及等位基因频率存在种族和地域的差异，且分布不同。欧洲从北到南apoE4等位基因频率是降低的，其中芬兰CHD发病率居世界首位，其人群中ε4等位基因的频率最高为22.74%；非洲黑人和巴布亚岛新几内亚人中apoE4等位基因频率是升高的；而在中国、日本等亚洲人群CHD发病率相对较低，ε4等位基因也相对较低，约为6.7%。
Keavney等［6］研究了4685例心肌梗死患者和3460例健康人后发现，携带有ε2/3、ε3/3和ε3/4基因型的个体发生心肌梗死的概率逐渐升高。Ranjith等［7］报道具有ε3/4基因型的北美印第安青年人群中
也有研究表明，apoE基因多态性与CHD的严重程度有关，还有一些研究没有发现这种相关性，迄今为止对这些结论尚未有明确的定论。大多数学者倾向于认为apoE基因多态性在CHD中起一定作用，但并非是独立因素。Song等［9］收集了从1996～2004年发表的48篇文献中apoE与CHD关系的数据，认为以上不同的结论是由于研究方法、区域、种族、性别不同或者基因与基因之间的相互作用而导致的，但apoE的ε4等位基因依然与CHD联系较大，能使CHD发病风险增高42%。apoE异构体不同的受体结合活性，导致个体间血脂水平差异，这可能是apoE基因多态性与CHD的发生发展密切相关的重要解释。
2.3 apoE基因多态性主要基因型与CHD的关系 随着分子生物学技术的迅速发展和对apoE基因多态性研究的深入，方向侧重于各个基因型对CHD影响的研究。apoE基因型频率：E3/3>E2/3和E3/4>E2/2、E2/4和E4/4［10，11］。何印蕾等［12］以壮族42例、汉族52例CHD患者为研究对象，用聚合酶链反应（PCR）技术分析壮、汉两个民族CHD患者apoE基因多态性与CHD的关系。发现壮、汉两民族CHD人群中apoE基因多态性（ε2等位基因缺失）为CHD的危险因子之一，且壮族人群中ε2等位基因频率(0.239)明显高于汉族(0.101)，P
许英等［14］通过52例CHD患者和60例正常对照者探讨ApoE基因多态性与CHD的相关关系。结果显示，CHD组ε3/3型频率为61.5%，低于对照组的76.7%，而ε3/4基因型频率CHD组为17.3%，明显高于对照组8.3%。等位基因分析CHD组ε3等位基因频率为59.6%，明显低于对照组76.7%，ε4等位基因频率为21.2%，明显高于对照组的4.2%。杨丽霞等［15］对50例CHD患者和156例正常对照者的apoE基因多态性的研究表明，CHD组携带E3/4基因型较对照组增高，对照组携带E3/3基因型较CHD组增高(P
3 结语
CHD是一种数量性状，由多基因决定，并受环境等因素影响的疾病。apoE是CHD发生、发展的遗传因素之一。随着分子生物学技术的迅速发展，对apoE基因多态性与CHD的关系研究不断深入，如果能确定易致CHD发病的apoE敏感基因型，对于发现CHD的高危人群有很重要的意义，有望从其基因表达和调控以及对它们保护基因出发，为及早发现CHD易感人群并进行一级预防提供强有力的依据；同时，也可能为它在CHD的诊断和预防、药物开发等方面开拓新的前景。
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2型糖尿病患者高血压、冠心病、肥胖、卒中等并发症 的发生率明显高于普通人群。2型糖尿病和高血压均为一 类具有共同遗传背景的多基因疾病。近年有关于载脂蛋白 e（apoe）基因多态性与高血压关系的研究报道，但结果很 不一致。本文采用分子生物学手段以中国东北地区汉族为 对象，探讨apoe基因多态性与2型糖尿病合并高血压的关 系。
1 对象与方法
1.1 研究对象 病例来源于2002年10月～2003年7月 在我院住院患者。对照来源于同期无糖尿病史及脑血管病 史的住院患者和门诊体检者。2型糖尿病诊断和分型依照 1999年who制定的标准。高血压诊断按1999年who和 ish标准。本研究收集单纯2型糖尿病患者45例，2型糖 尿病合并高血压患者92例，对照组68例;性别、年龄和体 重指数在3组之间比较差异均无显著性，具有可比性。
1.2 研究方法
1.2.1 标本的采集与处理 所有受试者在上午6～8时空 腹抽取肘静脉血2.7ml，注入含枸橼酸钠抗凝的真空管，置 -70℃保存。采用酚-氯仿法提取基因组dna，-20℃保 存至分析用。
1.2.2 apoe基因的pcr扩增 以基因组dna为模板， pcr扩增apoe基因第4外显子片段。反应引物按wenham 等 ［1］ 报道设计，由上海sangon公司合成。上游引物序列 为:5′-tccaaggagctgcaggcggcgca-3′;下游引物序 列为:5′-acagaattcgccccggcctggtacactgcca- 3′。pcr扩增在10μl反应体系中进行，其中包括基因组 dna 1μl（10～20ng/μl），10×buffer 1μl，4×dntp 0.6μl （2.5mm），引物各0.4μl（10μmol/l），二甲亚砜1μl，taq dna聚合酶0.5u。先进行94℃10s、68℃10s、72℃30s共4 个循环，再进行94℃10s、62℃10s、72℃30s共30个循环，最 后置于72℃延伸7min。pcr产物经2%琼脂糖凝胶电泳，eb染色检测扩增结果。
1.2.3 限制性内切酶消化 限制性酶切反应在20μl反应 体系中进行，其中包括pcr产物6μl，hin6i内切酶6u （10u/μl）及相应buffer 2μl。轻轻混匀后置37℃消化过 夜。酶切产物经8%中性聚丙烯酰胺凝胶电泳，dna快速 银染，电泳图谱按文献 ［3］ 的方法鉴定apoe基因型。
1.3 统计学方法 用χ 2 检验进行等位基因和基因型频率 分布的比较，用方差分析进行组间均数的比较，数值用均数 ±标准差（ ˉ x±s ）表示。 p <0.05差异具有显著性。所有统 计学分析均采用sas 6.0统计软件系统进行。
2 结果
2.1 apoe基因型鉴定 载脂蛋白e基因pcr-rflp电 泳结果见图1。
图1 载脂蛋白e基因pcr-rflp电泳结果 略
2.2 apoe基因型及等位基因频率分布 见表1。
表1 3组人群apoe等位基因及基因型频率分布 （略）
3 讨论
载脂蛋白e根据氨基酸序列的不同，有3种主要的异 构体e 2 、e 3 和e 4 ，分别由19号染色体上的一个基因位点 的3个等位基因ε 2 、ε 3 和ε 4 编码，形成apoe基因多态性 ［2］ 。这3种等位基因呈共显性表达，在人群中组成了6 种不同的基因表型，即3种纯合子（ε 2 ε 2 、ε 3 ε 3 、ε 4 ε 4 ）和3种 杂合子（ε 2 ε 3 、ε 2 ε 4 、ε 3 ε 4 ）。 apoe基因多态性与血压的关系仍未阐明，临床研究结 果亦有较大分歧。uusitupa等 ［3］ 根据apoe多态性对胆固 醇的影响，推测它可能和血压间存在着某种联系，经研究发 现ε 4 等位基因携带者收缩压较其他等位基因者高，而舒张压则与apoe基因多态性无关 ［3］ 。de knijff等 ［4］ 认为apoe 基因多态性与血压无关。uusitupa等［3］认为apoe可能 通 过升高ldl来减弱内皮依赖性血管舒张而使血压升高; 另外它可能通过影响高血压的相关危险因素而间接起作 用，如携带e 4 等位基因者ldl较高 ［5］ ，而较高的ldl个 体易发生动脉硬化，进而影响血压;有研究认为apoe基因 多态性与高胰岛素血症及胰岛素抵抗间存在相关性 ［6］ ， 胰岛素抵抗被认为是高血压的重要危险因素和病理生理 机制。本研究的结果显示，2型糖尿病合并高血压患者携 带ε 4 等基因的频率与单纯2型糖尿病组和对照组差异无 显著性。这与郑以漫等 ［7］ 研究的结果一致。我们认为 apoe基因型与中国东北地区汉族人2型糖尿病合并高血 压无相关性。 apoe基因多态性与血压之间的关系颇为复杂，可能通 过基因-基因及基因-环境间的相互作用 ［8］ ，以某些直接 或间接的方式影响血压。其确切关系和机制还有待于进一 步研究。
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【摘要】 【目的】探讨冠心病(chd)痰瘀证候与载脂蛋白e(apoe)血清水平及其基因多态性的关系。【方法】选择符合中医痰瘀证型的chd患者(chd组)97例,其中又分为痰证组30例、瘀证组32例、痰瘀证组35例。另选择健康人群35例设为正常对照组。检测所有样本的apoe血清水平,提取全血dna,用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(pcrrflp)技术检测apoe基因型,采用spss 110软件进行相关性分析。【结果】传统危险因素中糖尿病、吸烟、低密度脂蛋白胆固醇(ldlc)和高密度脂蛋白胆固醇(hdlc)等指标chd组明显高于正常对照组(p<005)。chd组及组内各型的apoe血清水平均高于正常对照组(p<001)。chd组内各证型间比较,痰瘀证apoe血清水平明显高于痰证和瘀证(p<001),瘀证apoe血清水平也高于痰证(p<005)。chd组e3/3基因型频率低于正常对照组(p<005),而e3/4基因型频率明显高于正常对照组(p<001)。chd组e4等位基因频率高于正常对照组(p<005)。痰证的e3/4基因型和e4等位基因频率高于痰瘀证、瘀证(p<005),而e3/3基因型及e3等位基因在痰证中的频率低于痰瘀证及瘀证(p<005)。133229.cOM【结论】apoe可能是chd独立预测因子之一,其血清水平升高与chd痰瘀证关系密切。apoe e4等位基因和chd密切相关,其中e3/4基因型可能是chd及其痰证的主要易感基因之一。
【关键词】 冠状动脉疾病;载脂蛋白e;基因多态性;痰瘀证
冠心病(chd)是威胁人类健康的重要疾病。既往研究识别了多种冠心病危险因素,但仍有约50%的chd患者不能以已知危险因素解释[1],因而进一步深入探讨其病因势在必行。目前,chd病因研究主要集中在两个方面：继续从宏观水平寻找危险因素及从微观水平探讨chd发病的遗传易感机理。
随着分子生物学理论和技术的发展,chd基因机制的研究也日益受到重视,chd是一种复杂的多基因遗传病这一观点也日益为人们所接受,这将为从分子水平上治疗chd开辟新的途径。载脂蛋白e(apoe)是一种多功能蛋白,是胆固醇和脂蛋白代谢的关键调节蛋白之一[2],与chd的关系密切,其功能与结构和基因表达密切相关,因此,研究apoe基因多态性与chd的相关性已成为热点[3-4]。本研究通过观测chd患者与健康人之间、chd患者痰瘀各证型之间apoe血清水平及其基因多态性的异同,以期能进一步揭开中国人apoe基因多态性与chd关系,指导chd中医临床诊治。现将结果报道如下。
1研究对象与方法
11研究对象观察病例均为2006年1月～2007年6月广州中医药大学第一附属医院心内科收治的chd患者(chd组),均符合中医痰瘀证型的辨证标准,共97例,其中男58例,女39例;平均年龄(6297±1261)岁。97例痰瘀证型chd患者又分为痰证组(30例)、瘀证组(32例)、痰瘀证组(35例)。另选择同期医院门诊体检且与chd组年龄、性别相匹配的健康者35例(设为正常对照组),其中男18例,女17例;平均年龄(6651±1264)岁。chd组和正常对照组均为无血缘关系的中国广东地区汉族人,2组性别、年龄等基本资料比较,差异无显著性意义(p>005),具有可比性。
12诊断标准chd诊断按国际心脏病学会和协会及世界卫生组织临床命名标准化联合专题组制定的《缺血性心脏病命名和诊断标准》[5]。中医诊断参照《中医病证诊断疗效标准》[6]中胸痹心痛的辨证标准。排除标准：感染性疾病及非感染性炎症疾病患者;严重心力衰竭,美国纽约心脏病协会心功能3级或以上患者;严重肝功能不全(谷丙转氨酶达正常上限2倍以上);严重肾功能不全需透析者;肿瘤患者;造血系统疾病患者。
13观察指标观察chd组与正常对照组的基线资料,各组apoe血清水平,apoe基因型与等位基因频率在chd不同中医证型中的分布情况。
131chd组与对照组基线资料比较两组的性别、年龄、吸烟、饮酒、家族史、合并症、体质量指数(bmi)及血脂水平。
132标本收集与模板dna制备研究对象入院后次日凌晨6时进行采血，采集其空腹非抗凝外周静脉血3 ml,标本置于-70℃冰箱保存。使用试剂：dna分子标准dl2000 marker(大连宝生物公司产品),qiaamp dna blood mini kit(qiagen公司产品),taq dna polymerase 、dntps(均为北京索奥公司产品)。外周血白细胞dna的提取具体步骤(操作方法按照试剂的说明书进行)：取15 ml离心管,注明名字;管底加蛋白酶k(protease k)20 μl,全血200 μl, buffer al 200 μl,混匀后56℃水浴10 min;取无水乙醇200 μl加入管中,混匀,转移入spin column,8 000 r/min 离心5 min;弃滤液,用spin column转移入清洁收集管中,加浓缩洗涤缓冲液1(aw1)500μl,8 000 r/min离心5 min;弃滤液,用spin column转移入另一清洁管中,加浓缩洗涤缓冲液2(aw2)500 μl,8 000 r/min离心5 min;弃滤液,用spin column转移入已标名字的15 ml离心管中,加buffer ae或蒸馏水200 μl,8 000 r/min离心5 min;-20℃保存备用。
133聚合酶链反应——限制性片段长度多态性(pcrrflp)检测和基因定型采用pcrrflp方法鉴定apoe基因的基因型。pcr引物序列为5’aacaactgaccccggtggcg3’(正义链),5’atggcgctgaggccgcgctc3’(反义链)。反应总体积为50 μl,其中包括：10倍pcr buffer 5 μl,10 mmol dntps 1 μl,上下游引物各10 pmol(2 μl),taq酶3 u(15 μl),模板 5 μl,不足体积用灭菌去离子水加至50 μl。混匀后离心 ,加无菌石蜡油覆盖液面,置于pe9700 pcr扩增仪。反应条件：93℃热启动10 min,93℃ 3 min预变性,55℃退火温度,共35个循环,72℃延伸10 min。扩增产物用限制性内切酶hhai(mbi公司产品)37℃酶切2 h后,取10 μl酶切产物用20 g/l的琼脂糖凝胶进行电泳。根据消化片段大小即可检出apoe基因的6种基因型,分别如下：(1)e2/2：91bp、83bp;(2)e2/3：91bp、83bp、48bp、35bp;(3)e3/3：91bp、48bp、35bp;(4)e2/4：91bp、83bp、72bp、48bp、35bp;(5)e3/4：91bp、72bp、48bp、35bp;(6)e4/4：72bp、48bp、35bp。图1中可见e2/3、e3/3及e3/4基因型。
1、3: e2/3;2:e3/4;4、5、6、7:e3/3
图1apoe基因型图谱
figure 1agarose gel electrophoregram
of apoe genotypes
134血清apoe水平测定采集研究对象入院后次日凌晨6时的空腹非抗凝外周静脉血2 ml,3 500 r/min离心15 min,分离血清,-20℃保存;以及收集细胞培养后上清液,-20℃保存,应用酶联免疫吸附剂测定法(elisa法)测定apoe含量。酶联板内、板间变异系数均<10%。
14统计学方法应用spss 110统计软件包进行数据的统计分析。基因型和等位基因频率采用频率计数法计算,研究对象基因型与hardy weinberg平衡定律的符合程度、组间基因型与等位基因频率的比较均采用卡方检验,不同等位基因间临床和生化特征的比较采用t检验或卡方检验,比值比(odds ratio,or)、交互作用采用logistic回归分析,相关性检验采用秩相关回归分析。检验水平α=005。
2结果
21chd组与正常对照组基线资料比较表1结果表明：传统危险因素中糖尿病、吸烟、低密度脂蛋白胆固醇(ldlc)和高密度脂蛋白胆固醇(hdlc)等指标chd组高于正常对照组(p<005),但高血压病史、体质量指数(bmi)以及性别、年龄、饮酒、家族史等方面2组比较差异均无显著性意义(p>005)。
22chd组内痰证、瘀证及痰瘀证患者基线资料比较表2结果表明：chd组内痰证、瘀证及痰瘀证患者基线资料比较,性别、年龄、糖尿病、吸烟、ldlc、hdlc、高血压病史和bmi等各项指标差异均无显著性意义(p>005)。表1chd组与正常对照组基线资料比较表2chd组内痰证、瘀证及痰瘀证基线资料比较
23各组间apoe血清水平比较表3结果显示： chd组以及组内各型的apoe血清水平均高于正常对照组(p<001),但chd组内各证型间比较,痰瘀证apoe血清水平明显高于痰证和瘀证(p<001),瘀证apoe血清水平也高于痰证(p<005)。表3各组间apoe血清水平比较(±s)
24apoe基因多态性与chd的关系2组共观察到6种基因型及3种等位基因,分别是e3/3型、e3/4型、e2/3型、e2/4型、e4/4型、e2/2型和e2、e3、e4。正常对照组中,e3/3型、e3/4型、e2/3型、e2/4型、e4/4型、e2/2型频率分别为690%、115%、171%、29%、0%、0%。而在chd组中,e3/3型、e3/4型、e2/3型、e2/4型、e4/4型、e2/2型频率分别为526%、312%、140%、11%、11%、0%。两组均未见e2/2基因型。经检验,各等位基因频率符合hardy weinberg遗传平衡定律,表明各等位基因已达到遗传平衡,具有群体代表性。由于e2/2基因型分布频率少于1%,因此在分组统计时将其忽略。
chd组和正常对照组apoe基因型和等位基因频率的分布比较见表4。chd组e3/3基因型频率明显低于正常对照组(p<005),而e3/4基因型频率明显高于正常对照组(p<001),e2/3在两组间差异无显著性意义(p>005)。chd组e4等位基因频率明显高于正常对照组(p<005),or值为4065,95%ci分别为0996～7126,表明e4等位基因变异与chd发病显著相关。而e3、e2等位基因在两组间差异无显著性意义(p>005)。
25apoe基因型与等位基因频率在chd不同中医证型中的分布比较表5结果显示：带有e3/4基因型和e4等位基因的chd患者数在痰瘀证、瘀证中明显低于痰证(p<005),而带有e3/3基因型及e3等位基因在痰瘀证及瘀证中的频率则明显高于痰证(p<005)。表4chd组和正常对照组apoe基因型和等位基因频率的分布比较表5apoe基因型与等位基因频率在chd患者不同中医证型中的分布比较
3讨论
31apoe血清水平与chd及其证型关系在众多发病因素中,高脂血症尤其是高胆固醇血症与chd关系最密切。apoe主要由肝脏、脑组织合成,是胆固醇和脂蛋白代谢的关键调节蛋白之一,与高脂血症及chd关系密切[2]。动物实验发现[7]缺乏apoe的大鼠有自发性的总胆固醇(tc)、甘油三酯(tg)水平升高和hdlc水平的下降,并有粥样斑块形成的典型改变。wilson等[8]的研究显示apoe可能导致个体间血脂水平的差异,并可能与高脂血症和冠心病发生有关。本研究结果显示chd组与正常对照组间的apoe血清水平的差异有显著性意义(p<001), 提示apoe血清水平升高与chd发病有关,apoe可能是chd独立预测因子之一,与既往报道相符。
中医学认为,chd所表现的“胸痹”、“心痛”、“怔忡”等病症,主要是因年老脏衰、饮食不当、劳逸失度及外邪内侵等引起。由以上诸因素所产生的多种病理产物如痰浊、水饮、瘀血等,导致了心脉痹阻和胸痹心痛。以往的证候调查已证实,chd病变程度严重的患者以痰浊证和血瘀证为多见。痰浊血瘀是chd的重要病机已成为共识[9],且痰浊血瘀与脂质代谢紊乱密切相关。本研究结果显示,chd血瘀组(瘀证组)及痰瘀互结组(痰瘀证组)apoe血清水平较痰浊组(痰证组)增高(p<005),考虑与apoe介导的脂质代谢异常在chd血瘀组及痰瘀互结组患者中表现更为显著有关。
32apoe基因多态性与chd发病的关系
321广东省汉族人群apoe基因多态性的分布人类apoe有3种主要的异构体(e2、e3和e4),其间的差异仅在于112位和158位上的单个氨基酸不同。e2的112位和158位均为半胱氨酸(cys),e3的112位是精氨酸(arg)，158位是cys,而e4的112位和158位均为arg。这种因单个氨基酸不同造成的异构体是由apoe基因多态性决定的。在人群中3种不同的apoe等位基因分布频率不同,因而决定了不同人群中apoe表型的频率差异[10-15]。本研究通过pcrrflp法分析了35例广东地区健康成人apoe基因多态性分布,发现此类人群中apoe基因多态性分布符合hardy weinberg遗传平衡定律,达到遗传平衡,具有群体代表性,可以代表广东地区汉族人群,提示了本研究的可靠性。
322apoe基因多态性与冠心病的关系apoe基因中e4等位基因的频率在各国人群中有很大差异,而chd的发病率也有很大差异。芬兰chd发病率居世界首位,其人群中e4等位基因频率也最高,达227%[9]。亚洲人群发病率相对较低,e4等位基因频率也低[13,16-17]。e4等位基因频率较高的患者中，tc、ldlc水平也较高,而tc、ldlc均是chd的易患因素,提示e4等位基因与chd存在一定的相关关系。如马洪盛等[18]随机选择潍坊地区汉族人88例chd患者与75例健康成人,研究apoe基因多态性与chd的相关性,结果表明apoe基因多态性与血脂代谢及chd的发生密切相关。e4等位基因是chd发病的遗传易感因子,e2等位基因是预防chd发生的保护因子,认为apoe基因多态性可能通过影响apoe水平而实现chd致病作用。杨丽霞等[19]的研究也显示apoe e4等位基因可能是冠心病的遗传易感因子。王学铭等[20]研究表明apoe e3/4基因型频率升高是chd发病的重要危险因素。潘家华等[21]的研究表明e4等位基因是影响血清tc、ldlc水平的重要遗传因素之一,并可进一步导致冠状动脉粥样硬化及chd的发生,是chd发病的重要危险因素。
本研究在此基础上,通过分析97例chd患者及35例健康对照者与apoe基因多态性关系,发现e4等位基因和chd密切相关,与其他基因型比较,e4等位基因携带者患chd的风险较其他等位基因高,提示apoe基因多态性与广东汉族人chd关系密切,而e4等位基因可能是chd发病的遗传易感基因。
33apoe各基因型及等位基因分布与冠心病证型关系如上所述,apoe e4等位基因的携带者更易于发生脂质代谢紊乱,与此基因多态性相关的各种疾病如冠心病、老年痴呆、高血压、糖尿病等,均与中医学的痰瘀有关。因此,对apoe基因多态性与痰瘀证候的关系进行研究,有利于认识痰瘀证候的病因病机。本研究结果表明：apoe等位基因e4携带者更倾向于发生痰证,表明e4等位基因,特别是e3/4基因型可能是chd及其痰证的主要易感基因之一。
本研究初步显示：apoe血清水平升高与chd痰瘀互结证关系密切,apoe基因多态性与广东汉族人chd关系密切,e4等位基因可能是chd发病的遗传易感基因。因此,通过检测apoe血清水平及其基因型,对chd的早期发现、早期预防意义重大,同时也有助于指导chd中医临床诊治。
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1. 辽宁省沈阳市第二中医医院，辽宁沈阳 110101；2.大连医科大学附属第一医院内分泌科，辽宁大连 116011
[摘要] 目的 分析并研究载脂蛋白E基因多态性与2型糖尿病血脂及其脑梗死并发症的关系。方法 从2012年5月—2014年5月期间该院收治的2型糖尿病患者中选取100例作为临床研究对象，设定为试验组，其中50例患者并发脑梗死，50例患者无并发症；同时从全市范围内征集100例健康者作为对照组。两组实验者均采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测其ApoE基因多态性，通过基因多样性的检结果分析并研究其与2型糖尿病血脂及其脑梗死并发症的关系。结果 对照组和试验组等位基因分布频率相差不大，差异无统计学意义(P＞0.05)；对试验组的100例患者进行组间比较发现，患者低密度脂蛋白与胆固醇含量在携带E4等位基因的患者中最高，在携带E2等位基因的患者中最低，差异有统计学意义(P＜0.05)。且实验结果显示并发脑梗死的患者E4等位基因的携带率高，无并发脑梗死的患者E4等位基因的携带率低，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 载脂蛋白基因多样性与2型糖尿病之间不存在必然的关系；2型糖尿病高脂血症及其并发脑梗死与E4等位基因的携带有关。
关键词 载脂蛋白E基因多态性；2型糖尿病；血脂；脑梗死
[中图分类号] R743.33[文献标识码] A[文章编号] 1674-0742（2014）11（a）－0037-03
2型糖尿病具有明显的遗传倾向和家族群发现象，是一类与血浆脂蛋白代谢有关的基因疾病[1]。而载脂蛋白是构成血浆脂蛋白的重要成分，在血浆脂蛋白的代谢中发挥着极其重要的作用，因此载脂蛋白与2型糖尿病之间存在着密切的关系[2]。临床研究发现[3]2型糖尿病患者且并发脑梗死的患者往往表现为低密度脂蛋白和胆固醇水平的异常增高。在该研究中，对2型糖尿病载脂蛋白E基因多态性与其血脂及其脑梗死并发症的关系进行分析和研究，现分析2012年5月—2014年5月间该院收治的100例2型糖尿病患者的临床资料，报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料
从该院收治的2型糖尿病患者中选取100例作为临床研究对象，设定为试验组，其中50例患者并发脑梗死，50例患者无并发症；同时从全市范围内征集100例健康者作为对照组。对照组100例，男性48例，女性52例；年龄21～86岁，平均（53.3±10.1）岁；对照组的100人经全身检查确定为健康者。试验组100例，男性55例，女性45例，年龄24～82岁，平均（53.8±10.2）岁；病程1～3年，平均（2.5±1.1）年。
1.2检测方法
首先采集标本：参加实验的200名受试者于清晨空腹状态下采集静脉血8 mL，其中的3 mL用于血脂检查，检测其低密度脂蛋白和胆固醇含量，其余5 mL加入抗凝剂后低温保存。随后提取DNA：应用酚-氯仿法从低温保存的静脉血液样品中提取DNA,立即放入冰箱中低温保存等待下步实验时再取出。然后扩增PCR：该反应在PCR扩增仪中进行，其中引物位于ApoE基因第四外显子内，包含了两个多态性位点，反应物包括适量模板DNA，dNTP，Mgcl2,Kcl,二甲亚砜及相应的反应酶等，随后循环进行变性，退火，延伸等过程直至得PCR产物。最后向PCR产物中加入内切酶得酶切产物行凝胶电泳后，染色观察。
1.3统计方法
应用 spss l5.0统计软件对数据进行分析，计数资料采用百分比表示,数据对比采取χ2校验。
2结果
2.1等位基因分布频率
对两组受试者等位基因分布频率进行比较，发现E2，E3，E4分布频率相差不大，差异无统计学意义(P＞0.05)，见表1。
2.2ApoE基与脑梗死并发症的关系
将试验组中的50例并发脑梗死者与50例无并发症者进行比较，发现并发脑梗死组21例携带E4基因，无并发症组7例携带E4基因，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。
3讨论
载脂蛋白是一种关系到体内脂蛋白转运的多态性蛋白，其多态性与机体多种疾病有着密切关系。其具有多态性的原因主要是载脂蛋白基因的多态性与基因多样性表达。目前，关于载脂蛋白E基因多态性与疾病的关系已成为研究的热点[4]。在该研究中设置了对照实验，其中对照组为100名健康者，试验组为100例2型糖尿病患者，对这200例受试者E2，E3，E4等位基因进行检测。E3为野生型基因而E2和E4为突变型基因，突变型基因与人体内血脂的含量有着密切的关系[5-6]。E2基因所表达的载脂蛋白与低密度脂蛋白的亲和力较低而E4基因表达产物与低密度脂蛋白的亲和力较高[7-8]。E4与低密度脂蛋白以及胆固醇的高亲和力，大大降低了体内血脂的代谢速度，从而使血脂含量较高，随后通过高血脂来促进脑梗死的病发，而E4与2型糖尿病的发生并无直接关系[9-10]。在该实验中，对两组检测结果进行比较，对照组和试验组等位基因分布频率相差不大，差异无统计学意义（P＞0.05）；患者低密度脂蛋白与胆固醇含量在携带E4等位基因的患者中最高，在携带E2等位基因的患者中最低，差异有统计学意义（P＜0.05）。且并发脑梗死的患者E4等位基因的携带率高，无并发脑梗死的患者E4等位基因的携带率低，差异有统计学意义（P＜0.05）。
综上所述， 2型糖尿病高脂血症及其并发脑梗死与E4等位基因的携带有密切的关系。
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【关键词】高脂血症；载脂蛋白；动脉粥样硬化指数
载脂蛋白（apo）是脂蛋白（Lp）颗粒外层的蛋白质部分，是脂蛋白组成中的关键物质，已经阐明各种载脂蛋白与脂代谢的关系非常密切，其主要功能是维持脂蛋白结构与脂类运输，调控脂代谢存在酶的活力，以及作为细胞表面Lp受体的配体，而参与脂蛋白代谢，从人和动物血浆和淋巴液中分离的多种apo中明确存在于人血浆中的有APOA-Ⅰ、AⅡ、AⅣ、B-100、B-48。CⅠ、CⅡ、CⅢ、D（即AⅢ）、E、F、G及apo（a）等用于动脉粥样硬化（AS）风险度估计的指标是APOA-Ⅰ、APOB-100[1]。
APOA-Ⅰ是高密度脂蛋白的主要蛋白质，它的血清浓度代表HDL水平，正常情况下APOB占低密度脂蛋白（LDL）中蛋白质的97%及低密度脂蛋白（VLDL）中蛋白质的37%左右，所以APOB水平主要反应LDL水平，但VLDL多时，APOB也会有所增高，通常认为HDL是动脉粥样硬化的防御因素，而LDL是致病因素，所以血清APOA-Ⅰ减少及APOB升高，提示动脉粥样硬化发生的危险性增加，APOA-Ⅰ/APOB-100比值，被称为动脉粥样硬化指数[2]。
1标本来源与方法
住院患者空腹静脉血，同时用生化分析仪做胆固醇、甘油三脂、其中一项或两项均高者，再用联合免疫电泳去测其血清中APOA-1，与APOB-100的含量。
3讨论
从表1可以看出，随着年龄的增加，其APOA-Ⅰ的水平在下降，APOB-100的水平相对增高，胆固醇的含量也随着年龄的增加而增高，A/B比值，随着年龄的增加而减少，甘油三脂的含量随着年龄的增加而增高，通过P值可以看出，各年龄组的测定结果有显著性差异。
从表2可以看出，高血脂病人当中63.3%患者血清APOA-Ⅰ与APOB-100的含量仍维持在正常水平。
其二者的比值也在正常水平，其平均比值为1.5。说明高血脂人群中，有少数人载脂蛋白含量未发生改变，而大多数病人已发生改变，根据有关资料报道，A/B的正常参考值为1.3±0.56比值小于1.3就预示着疾病的存在，比值越小，疾病严重程度越深。
从表3可以看到高血脂病人当中，48.9%患者血清APOA-Ⅰ的含量仍维持在正常水平，其A/B的平均比值为1.36，51.1%的患者血清APOA-Ⅰ的含量下降，其A/B的平均值为0.9。
从表4可以看到高血脂病人当中，88.9%患者血清APOB-100的含量明显增高，其A/B的平均比值为1.11，而11.1%的患者血清APOB-100仍维持在正常水平，其A/B的平均比值为1.35。
综上所述，用联合免疫电泳测人血清APOA-Ⅰ，APOB-100方法简易，准确性高，在冠心病危险的预测上APOB的测定，可能比总胆固醇测定更好、更有意义。
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方法：选取我院诊断为脂肪肝患者106例，及健康对照组120例，分为二组，分别记录各组中患者各项血脂指标的情况，并应用超声进行诊断，分为轻度、中度以及重度，分别记录不同程度脂肪肝患者的血脂情况。应用SPSS18.0统计软件进行统计。
结果：脂肪肝组患者，其甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B、脂蛋白小a明显高于对照组，而高密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白A明显低于对照组。而甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、脂蛋白小a指标，重度组要高于轻度组，尤其是以甘油三酯最明显。
结论：脂肪肝患者的甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B、脂蛋白小a明显高于对照组，高密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白A明显低于对照组。重度脂肪肝患者甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B、脂蛋白小a比高于轻度组，而以甘油三酯增高更明显。
关键词：超声 脂肪肝 血脂
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.03.042
【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2014）03-0034-02
脂肪肝是目前比较常见的一种疾病，为一种代谢性的疾病，多是指肝脏方面的脂代谢的异常而引起，因为肝内脂质代谢异常，那么就会出现脂类的堆积，而这种脂肪有堆积，又反过来影响到肝细胞的功能，从而使肝功能有所影响，而在影响较大的情况下，会出现肝脏的结构性的改变，甚至会发展为肝硬化。目前我国的脂肪肝的人数在每年有逐渐增长的趋势，这与近些年来我国国民的生活习惯有明显的关系[1]对于了解这些代谢性的疾病以及进行针对性的预防以及治疗，是提高国人的生活质量，减少疾病发生，减轻社会医疗负担，都是十分重要的。本研究旨在对脂肪肝患者的血脂情况进行分析，以便针对性进行预防和治疗，对于提高全民的生存质量是有益的。
1 研究对象及方法
1.1 研究对象。选取我院2010年1月至2013年10月于我院进行超声检查的患者共106例，年龄30-76岁，其中男性74例，女性32例。再选取健康对照组120例，其中男性78例，女性42例，年龄32-70岁。二组患者从年龄、性别方法无统计学意义。所以患者超声都是由专业的二位超声医师进行操作。
1.2 研究方法。脂肪肝的超声诊断为：①肝脏可不增大或是增大，肝包膜光滑，肝实质呈点状高回声，肝回声强度大于肾回声强度。②肝深部回声衰减。③肝内回声血管显示不清。其中第一项和第二或是第三项，可做为诊断。而区分脂肪肝的程度的情况，其标准为轻度为：前半部回声肝实质回声弥漫性增高增粗，分布均匀。而肝切面后半部回声稍减低，肝内管状结构清晰，实质回声反差增大，存在出肝面光带。中度为：肝切面前半部回声肝实质回声增高增粗，包膜边界尚清，后半部回声衰减1/3-1/2，管状结构走行变细、模糊，但是可辩认，提高远程增益可出现出肝面光带。重度为：前半部回声肝实质回声明显增高增粗，后半部回声显著衰减超过1/2，甚至可能消失，肝内管状结构难以辩认，实质回声反差显著增大，出肝面光带不明显。
所有患者皆于入院后第二天，清晨空腹8小时以上，进行血脂检查。分别记录脂肪肝组患者以及健康对照组各例的各项血脂指标。比较脂肪肝组及对照组中血脂各指标差异。再根据超声的结果，将脂肪肝患者分为轻度、中度及重度，分别比较不同程度脂肪肝患者的各项血脂指标差异。应用SPSS18.0统计软件进行统计，其中计量资料用均数±标准差（X±S）表示，组间均数比较采用t检验。P
2 结果
根据患者超声结果示是否为脂肪肝而分为二组，即脂肪肝组及对照组，分别记录各组病例血脂情况，显示，脂肪肝组患者，其甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B、脂蛋白小a明显高于对照组，而高密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白A明显低于对照组。具体见表1。
对脂肪肝的患者进行超声的定性，分为轻度、中度、重度，根据程度分为三组，记录各组患者甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B、脂蛋白小a的情况，其中，轻度患者所占比例最高，在轻度脂肪肝组中，其甘油三酯情况，明显要好于重度脂肪肝患者组。而对于总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、脂蛋白小a，重度组皆高于轻度组。而三组比较来看，甘油三酯水平明显增高，而其它的指标增高不明显。具体见表2。
3 结论
脂肪肝患者的甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B、脂蛋白小a明显高于对照组，高密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白A明显低于对照组。重度脂肪肝患者甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B、脂蛋白小a比高于轻度组，而以甘油三酯增高更明显。
4 讨论
在临床中，脂肪肝的发生，以男性居多，在本研究病例中，男性也是相对较多，考虑是与男性的生活习惯有一定的关系。而脂肪肝的本身，开始并不会有特别的临床表现，只有在重度并引起肝功异常的情况下，才会有肝区不适的临床表现，故早期并不能够很容易发现[2]。而对于脂肪肝的血清学检查，也没有特定的检查，而有创性的检查如肝穿刺等，在临床上也不能够很全面的展开，患者相对也不容易接受，费用也是较高的。而超声检查做为一种无创性的检查，对于脂肪肝的普查是有一定的意义的。而在超声的检查中，对于一些轻度的脂肪肝，其诊断有一定的困难，不能完全很确切的得出诊断。故结合患者的血脂的情况，对于脂肪肝的诊断有一定的价值。
从上面的研究结果来看，脂肪肝组较对照组的血脂的各项指标明显有增高，说明脂肪肝与高脂血症有一定的关系[3]。而高脂血症的患者更容易引起脂肪肝的，其考虑可能与高甘油三酯血症有关，在高甘油三酯血症中，其游离的脂肪酸有所增加，血中的游离脂肪酸的增加，会出现胰岛素抵抗，从而使胰岛素的生理作用相对性的减低，从而使脂肪更容易有肝脏堆积，从而引起脂肪肝。在上面的研究中，其各项血脂指标都有所增加，其中以甘油三酯的增加更为明显，这与其它的研究结果相似。
这些代谢性的疾病，包括血脂的异常以及脂肪肝，可引起机体的代谢的紊乱，进而会影响到身体的其它的系统的功能，出现心脑血管等各种并发症的情况，危害身体健康，故及时发现及治疗是有意义的。故临床上广泛应用超声检查，对脂肪肝等情况进行普查，对提高患者的生活质量，减少并发疾病是有益处的。
参考文献
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【关键词】糖尿病早期肾病；血脂；载脂蛋白A；载脂蛋白B
糖尿病脂代谢紊乱是糖尿病研究领域的重要分支之一，而其中糖尿病肾病时脂代谢异常研究应有相关报道，我们研究了33例二型糖尿病早期肾病时血脂、载脂蛋白的变化，并与无肾病的二型糖尿病病人及正常健康人比较，探讨糖尿病早期肾病与血脂的关系。
1 资料与方法
1.1 研究对象
（1）正常对照组：选择健康人60例，年龄32～66（51.2±8.3）岁作为正常对照组，无糖尿病、高脂血症病史，24h尿白蛋白定量
（2）糖尿病无肾病组：收集我院2011年—2013年住院病人39例，根据WHO糖尿病诊断标准确诊糖尿病病人，年龄36～72（54.3±9.10）岁，24小时尿白蛋白定量
（3）糖尿病早期肾病组：收集住院病人33例，年龄42—78（60.42±9.12）岁，根据WHO糖尿病诊断标准确诊糖尿病，24小时尿白蛋白定量>30mg/24h，
1.2 研究方法
所有研究对象均取早晨空腹静脉血测血糖（P/C），肌酐（Cr），甘油三酯（TG），总胆固醇（TC），高密度脂蛋白（HDL-C），低密度脂蛋白（LDL-C），载脂蛋白A（apoA），载脂蛋白B（apoB），以上指标均由贝克曼DXC800全血动生化分析仪测定，留24h尿测定尿白蛋白排出量，将以上数据分组比较。
1.3 统计学分析
结果以x±s表示，组间比较用t检验。
2 结果
糖尿病早期肾病与糖尿病无，肾病及正常组血脂，载脂蛋白的分析比较见表1。
糖尿病早期肾病组病人TG、LDL-C明显高于正常组及糖尿病无肾病组（P
3 讨论
糖尿病病人血脂紊乱特点是以血TG和LDL增高、HDL降低为特征的三联症，本研究结果基本符合上述观点，而DM早期肾病组中TG和LDL与正常对照组比明显升高，与DM无肾病组比较亦明显升高，HDL与前二组相比显著下降。
乙型糖尿病最常见的血脂异常是高甘油三酯血症，尽管TG在动脉粥样硬化斑块上很少存在，其在心脑疾病的关系上不如LDL-C和HDL-C那样确切，但很多试验逐渐表明高TG血症是一个不依赖HDL-C和LDL-C的另一冠心病独立危险因素[1]。循环中的甘油三酯25%存在于VLDL中，75%存在于LDL中，血中TG升高主要使LDL水平明显升高，而临床流行病学研究证实LDL水平升高与动脉粥样硬化密切相关，本研究显示DM早期肾病病人TG升高更明显，其降脂治疗更有意义。
HDL-C对动脉粥样硬化具有保护作用，流行病学证实HDL与冠心病危险性呈负相关。HDL主要功能是在血浆中促进乳糜微粒和VLDL分解并合成胆固醇酯，将肝外组织细胞中的胆固醇转运出来，然后被肝脏分解代谢，阻止TG在动脉壁和其它组织积聚，HDL被认为是抗动脉粥样硬化因子，在糖尿病病人中HDL常降低，因此增加了动脉硬化的危险性，而本研究显示糖尿病早期肾病病人具有更高的危险性。
同时本研究显示apoA较正常组明显下降，apoA可以反应细胞中HDL的水平，本研究系DM早期肾病病人HDL、apoA均下降明显，其一致性可以解释。LDL-C与HDL-C在对动脉粥样硬化形成中具有同等重要作用，血中apoB浓度是反应LDL水平的指标。LDL水平升高与心血管疾病患病率和病死率升高有关，尤其LDL2亚型更易致动脉粥样硬化。本研究表现DM早期肾病病人LDL-C升高与糖尿病无肾病病人相比更明显，其致动脉硬化因素升高。
糖尿病作为冠心病、脑血管疾病危险因素日益受到关注，1994年WHO报告在DM死因中，心血管疾病占75%，糖尿病冠心病死亡率比普通人群冠心病死亡率多3-4倍，这其中重要因素应为LDL-C升高和HDL-C下降。糖尿病脂代谢紊乱对脑血管病起重要作用，排除血糖对脑率中发病的影响，高 TG、高TC、低HDL-C可使脑率中发病危险性增加。本研究发现糖尿病合并早期肾病的病人血脂紊乱比正常人及糖尿病无肾病病人更明显，提示其心脑血管发病率明显升高，故应积极预防糖尿病发展致早期肾病阶段，而对于已有早期肾病合并症的病人更应严格调脂治疗，减少其心脑血管并发症的发生。
另外，在糖尿病肾病的危险因素中，高脂血症亦是除高血糖、高血压外的另一危险因素。有研究表明高脂血症可增加糖尿病病人的尿蛋白的排出量，其机制可能与血脂改变肾小球基底膜的通透性有关，引起尿蛋白的排出增多[3]。本研究认为预防糖尿病早期肾病的发生，除了有效降低血糖、血压外控制糖尿病病人的血脂亦很重要。
参考文献
[1]Niskaneul.Hyperglycemic and corn positional lipoprobein abnormally as perdictors of cardiovacular mortality in type 2 diabetes：a 15-year-fllowuo form the time of diagosis. Diabetes care，1998，21：1861.