时间：2023-05-30 09:37:35
开篇：写作不仅是一种记录，更是一种创造，它让我们能够捕捉那些稍纵即逝的灵感，将它们永久地定格在纸上。下面是小编精心整理的12篇高效液相色谱，希望这些内容能成为您创作过程中的良师益友，陪伴您不断探索和进步。
早在上世纪60年代，高效液相色谱技术就得以出现。该技术是在经典液相色谱和气相色谱的基础上发展而来，具有检测限低和灵敏度高的特点，所以在多个领域的检测工作中得到了运用。而食品安全问题是关系到民生和社会发展的重要问题，因此还应加强高效液相色谱技术在食品检测中的运用分析。
高效液相色谱技术概述
在色谱法中，高效液相色谱技术是重要分支，使用的流动相为液体，能够利用高压输液系统将流动相泵入色谱柱。而色谱柱内装有固定相，能用于进行不同极性单一溶剂、缓冲液和不同比例混合溶剂的分离，并将分离得到的各成分送入检测器，以实现试样分析。作为在农学、化学和商检等多个领域得到应用的重要分离分析技术，该技术具有较低检测限度，并且灵敏度较高，因此能够在食品检测中得到运用。
高效液相色谱技术在食品检测中的运用分析
在营养成分检测中的运用。在食品检测中，高效液相色谱技术可用于检测营养成分。在食品中的糖含量检测上，运用该技术能够完成多种糖的测定，比如酒类糖分和果聚糖异构体等。在脂肪酸检测方面，运用该方法能够对二十碳五烯酸等脂肪酸物质进行检测，从而为食品的加工、贮存和配比提供科学依据。而蛋白质具有相对分子量大和易发生变性等特点，以至于难以实现分离分析。运用高效液相色谱技术，则可以完成蛋白质和氨基酸分离，所以能够对这些营养成分进行灵敏测定。在食品保鲜方面，有机酸发挥着防腐的作用，同时也是食品鲜味和酸味的组成成分之一。运用高效液相色谱法进行检测，可利用反向C18柱完成有机酸分离，然后利用紫外吸收检测器等设备进行乳酸、柠檬酸和苹果酸等物质的检测。此外，在维生素检测上，可运用高效液相色谱法进行保健食品中多种水溶性维生素的检测。
在添加剂检测中的运用。在食品加工过程中，一般都要使用添加剂进行食品色、香、味得到改进，并对食品进行保鲜。而添加剂为人工合成或天然的物质，可以划分为甜味剂、色素、防腐剂和抗氧化剂等。但是，人工合成的添加剂具有一定毒性，需限制其使用，所以还要进行食品中添加剂含量的检测。在甜味剂检测方面，运用高效液相色谱技术使用的色谱柱通常为C18柱、-NH2柱和阴离子交换柱，使用的检测器包含电导检测器和紫外-可见光检测器，可完成甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和甜味素等多种甜味剂的测定。在防腐剂检测方面，可使用R高效液相色谱法进行脱氢乙酸、BA和对羟基苯甲酸乙酯等防腐剂的测定，具有准确、灵敏和操作简便的特点。在色素检测方面，联合使用高效液相色谱技术和紫外-可见光检测器，并使用C18柱分离的梯度洗脱系统，可完成胭脂红、亮蓝、柠檬黄和日落黄等多种色素的测定。在抗氧化剂检测方面，运用R高效液相色谱法能够完成油脂中的9种抗氧化剂的同时测定，最低检测浓度可以达到2mg/kg。另外，运用高效液相色谱法进行BHA、PG、BHT等物质的分离，可分别达到84%、95%和99%的样品回收率。运用高效液相色谱法检测食品中的增白剂，可使用阴离子柱进行亚硫酸盐的分离，最低检出限能够达到0.2μg/kg。
在有毒有害物质检测中的运用。在食品中，可能含有多种有毒有害物质，如农药兽药残留和霉菌毒素等。如果误食含有霉菌毒素的食品，可能导致人出现急性或慢性中毒现象，甚至引发人体细胞癌变。运用高效液相色谱法，可进行食品中霉菌毒素的检测。从原理上来看，利用该方法能够结合不同微生物的化学组成或代谢产物进行样品中各种细菌的分析，以确定病原微生物的特异性化学组分，进而判定食品是否存在微生物超标问题。比如，在黄曲霉毒素检测方面，运用高效液相色谱法和质谱法进行食品检测，最低检测限可达0.02μg/kg，回收率则在77%-102%范围内。在农兽药残留检测方面，运用高效液相色谱法可完成热稳定性差和沸点高的农药残留检测，使用的色谱柱通常为C18或C8，联合使用的检测器包含荧光检测器、紫外检测器等。比如，联合使用高效液相色谱法和紫外检测器，可完成除虫脲、氟苯脲等蔬菜中苯甲酰脲类农药残留量的测定。此外，还可以利用高效液相色谱法与质谱法完成水果、蔬菜等多种食品中四溴菊酯残留检测。在兽药检测方面，联合使用高效液相色谱法和质谱法，则能完成多种磺胺类药物残留的测定，检出限在1.0-4.5μg/L的范围内，回收率在92%-100%之间，具有准确、方便和快速等检测优势。
通过分析可以发现，由于具有检测灵敏度高、分离效能高和分析速度快等优点，高效液相色谱法在食品营养成分、添加剂和有毒有害物质检测等方面得到了广泛应用，所以能够为食品安全提供更多保障。而相信随着该项技术的不断发展，其未来也将在食品检测领域获得更好的发展前景。
（作者单位：南京汉钦食品有限公司）
关键词：高效液相 邻苯二甲酸酯类 残留
当今社会食品安全问题愈来愈受到广大百姓的关心 ,食品安全的范围很广,它不仅仅指食品本身 ,还涉及到与食品相关的诸多方面 ,如食品所用原材料、食品加工工艺过程污染控制、食品放置与储存、食品包装所用材料等方面。
邻苯二甲酸酯（PAEs）也称为酞酸酯，主要用作塑料增塑剂，随着塑料工业的发展和塑料制品的大量使用，邻苯二甲酸酯已成为环境中无所不在的污染物，极为普遍地存在于土壤、底泥、大气、水体和生物体等环境样品中，酞酸酯类物质是一类环境雌激素，它可以扰乱内分泌, 对人体健康危害巨大。世界卫生组织（WHO）1995年公布的必须控制的[5]。其中有6种商品化的邻苯二甲酸酯被美国EPA列为重点控制的污染物（邻苯二甲酸二甲酯 DMP 、二乙酯 DEP 、二丁酯 DBP 、邻苯二甲酸二 2-乙基己 酯 DEHP 、二辛酯 DOP 、丁基苄基酯 BBP）,3种被我国列为优先控制污染物（DMP、DBP和 DOP）,8种被列在世界野生动物基金会(WWF)的环境激素名单中。本文针对食品用塑料包装中添加的增塑剂邻苯二甲酸酯类化合物展开研究 ,建立一种方便、快捷、准确的检测方法。
1实验部分
1.1仪器与试剂
高效液相色谱仪(Waters Allance 2695-2996),Empower2色谱工作站,PDA检测器； SunFire C18 ,15cm×4.6mm×5μm色谱柱；吉尔森GX271全自动固相萃取仪。固相萃取小柱，Waters公司的 OASIS.HLB（6mL,200mg）小柱；分析天平：感量0.1mg；美国Organomation N-EVAP112型氮吹仪；IKAR werke T25型均质机；离心机；溶剂过滤装置；0.45μm有机滤膜；Milli-Q超纯水机。
甲醇、乙腈为HPLC级（美国Fisher公司）；丙酮、氯化钠、无水硫酸钠无为分析纯试剂。
邻苯二甲酸酯类标准品：邻苯二甲酸二甲酯（DMP）、邻苯二甲酸二乙酯（DEP）、邻苯二甲酸二丁酯（DBP）、邻苯二甲酸二戊酯（DPP）、邻苯二甲酸二己酯（DHXP）、邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）、邻苯二甲酸二辛酯（DNOP）。标准品纯度均在97%以上,美国进口,购于百灵威化学品部。
1.2标准溶液的配制[4，7，8]
准确称取上述标准品各0.1000g,分别用甲醇定容至100mL容量瓶中,配成100mg/mL的单标储备液。分别移取上述单标储备液各10mL，放置到100mL容量瓶中。用甲醇定容，配制成100mg/L的混合标准储备液，置于4℃冰箱中保存备用。标准储备液每6个月更换一次，或与标准品比较，发现问题时，必须立即更换。
混合标准系列溶液的制备：取一定量的100mg/L的混合标准储备液，用甲醇分别稀释成质量浓度为0.16、1.60、16.00、40.00mg/L的标准系列，置于4℃冰箱中保存。混合标准系列溶液每1～2个月进行更换，或与标准品比较，发现问题时，必须立即更换。
1.3样品前处理[6]
1.3.1 食品
（1）油脂类固体或半固体样品：称取均匀样品2g(精确至0.1mg)置于离心管中，加入10mL正己烷，均质2min，2500r/min离心3min，己烷层转入125mL分液漏斗中，再用10mL正己烷重复提取一次，己烷层并入125mL分液漏斗中。用90ml乙腈分三次提取，合并三次乙腈提取液于500mL分液漏斗中，加入250mL10%氯化钠溶液，用200mL正己烷分两次提取，经装有10g无水流酸钠的漏斗收集于梨形瓶中，40℃下蒸发近干。残留物用5mL正己烷溶解，待过柱用。
（2）油脂类液体样品：称取均匀样品1g(精确至0.1mg)于小烧杯中，加入20mL正己烷充分溶解，转入125mL分液漏斗中，用30mL乙腈洗烧杯后也转入分液漏斗中，其余处理同（1）进行。
（3）不含油脂的固体或半固体样品：称取混匀试样5.00g，置于50mL离心管中，加适量水（使总水量约10mL），加入20mL丙酮+正己烷混合液（2+3），均质2mim，2500r/min离心3min，取上层清液经装有5g无水硫酸钠的漏斗收集于梨形瓶中。再用20mL正己烷提取一次，合并提取液于40℃下蒸发近干（若含色素较多按（1）过柱净化），用正己烷定容至2mL,待分析。
(4) 不含油脂的液体样品（不含啤酒）：称取均匀样品20g，置于100mL具塞量筒中，加入10mL饱和食盐水，再加入30mL正己烷剧烈振摇，静止分层，上清液经装有5g无水硫酸钠的漏斗收集于梨形瓶中，再用30mL正己烷重复提取一次，合并上清液，40℃下蒸发近干（若含色素较多按（1）过柱净化），用正己烷定容至2mL,待分析。
（5）啤酒：称样20g，置于100mL具塞量筒中，加入10mL饱和食盐水，再加入20mL乙腈、20mL正己烷剧烈振摇，静止分层，上清液经装有5g无水硫酸钠的漏斗收集于梨形瓶中，再用20mL 、20mL正己烷重复提取两次，合并上清液，40℃下蒸发近干，用正己烷定容至2mL,待分析。
1.3.2．食品包装材料：称取经粉碎混匀的试样0.2g(精确至0.1mg)于三角瓶中，加入50mL正己烷，超声提取30min，取上清液直接进行分析（视含量作相应的稀释或浓缩）。
1.3.3净化
(1)．层析柱的制备：玻璃层析柱底部放入少许脱脂棉，加入1cm高的无水硫酸钠，然后依次干法装入2g弗罗里硅土（层析用，200℃烘3h后备用），0.5gPSA（硅胶键合氨基吸附剂），上部再加入1cm高的无水硫酸钠。使用前依次用10mL丙酮、10mL正己烷预淋洗。
(2)．净化与浓缩：待淋洗液下降至无水硫酸钠层时，将试样提取液加入，再用5mL正己烷洗梨形瓶，洗液加入层析柱中，待其下降至无水硫酸钠层时，用25mL丙酮+正己烷（2+98）混合液洗脱，将洗脱液收集于合适的容量瓶中，用正己烷定容，待分析。
1.4测定
1.4.1．色谱条件：
色谱柱：SunFire C18 ,15cm×4.6mm×5μm
波长:224nm
柱温度:30℃
进样量:10μL
流速：1.0mL/min
流动相：A-水；B-乙腈 ，梯度配比如表1。
Empower色谱工作站
检测器:PDA检测器
定量方法 ： 取10μL进样，根据保留时间定性，以峰面积计算，以外标法定量。
1.4.3．结果计算
食品及食品包装物中邻苯二甲酸酯类化合物的含量（mg/kg）
式中：x―试样中某种邻苯二甲酸酯的含量（mg/kg）；
v―试样定容体积（mL）；
m―试样质量（g）；
c1--试样中某种邻苯二甲酸酯峰面积对应的标准品组分的浓度（mg/L）；
c0―空白试样中某种邻苯二甲酸酯峰面积对应的标准品组分的浓度（mg/L）
2．实验结果与讨论
2.1 样品前处理：由于食品包装材料及部分样品中成分比较复杂，含有一定量的蛋白、脂肪和纤维等成分，处理不好将直接影响进样，对液相色谱柱损害较大，所以应将样品充分混匀提取后，过净化柱，最后再经高速离心，可较好的去除大分子杂质物质，得到进样溶液。
2.2 波长的选择[3-4]:通过对几种邻苯二甲酸酯标准溶液进行210～400nm扫描,发现在220～240nm之间,吸收峰较强,本实验选择224nm作为方法的固定波长。
2.3标准及样品：在本方法的实验条件下，七种邻苯二甲酸酯类均得到了较好的分离，能够满足实验要求。
2.4 加标回收率：向5份样品中分别加入不同量的邻苯二甲酸二丁酯标准溶液，按本法处理、测定并计算回收率，结果见表2：
2.4 检出限：本方法检出限0.50mg/kg。
3.结论
实验表明，本方法所用乙酸铵流动相浓度低，样品进样量少，对分析柱的损害较小；样品加标回收率在78.00%～114.80%之间；线性系数R>0.9999；检出限为0.50mg/kg；能够满足一般食品等样品中邻苯二甲酸酯类残留量的分析要求。另外本方法具有简便快速、准确灵敏、成本低、可靠性强等优点，应用前景广泛。
参考文献
[1] 修丽华,王陆玲等.高效液相色谱法测定畜、禽肉中土霉素的残留量[J].现代食品科技,2007,Vol.23,No.10
[2] 中华人民共和国国家标准, GB/T18932.5-2002.
[3] 何华, 倪坤仪. 现代色谱分析[M]. 化学工业出版社, 2000, 228-245.
[4] 阎吉昌. 环境分析[M]. 化学工业出版社, 2002, 308.
[5] 陈珠灵, 黄瑜奎, 王桂美, 陈飞.化妆品中邻苯二甲酸酯类环境激素检测方法研究[J] . 环境科学与技术, 2007,Vol30,No.4
[6]佟克兴等食品包装材料中邻苯二甲酸酯的测定.监督与选择[J],2008,64-66.
[7]GB/T5009-2003,食品卫生检验方法[M].中华人民共和国国家标准.
【关键词】 复方胆通片；，，高效液相色谱；，，色谱指纹谱
摘要：目的建立复方胆通片的高效液相色谱（HPLC）指纹谱，对不同厂家生产的复方胆通片所含的组分以绿原酸为参照进行综合评价，为复方胆通片的质量鉴定提供依据。方法采用HPLC法，将获得的色谱数据转化为指纹谱，据此对复方胆通片的质量进行分析鉴别。结果确定了12强峰和21个色谱峰为复方胆通片的特征指纹峰。结论不同厂家生产的复方胆通片中绿原酸的含量相差较大。该方法专属性强、重现性好，可为复方胆通片的质量控制提供依据。
关键词：复方胆通片； 高效液相色谱； 色谱指纹谱
Study on HPLC Fingerprint Chromatogram of Fufangdantong Tablets
Abstract：ObjectiveTo establish the HPLC fingerprint spectrum of Fufangdantong tablets for different areas.MethodsHPLC results of Fufangdantong Tablets were used to evaluate and distinguish areas Fufangdantong Tablets from different factory.ResultsThere are 21 major features of HPLC fingerprint and 12 strong peaks of the Fufangdantong tablets.ConclusionThere are different areas of their chlorogenic acid quantity contained. This method is good at its specialization and restoration，and it can provide scientific reference to controlling the quality of Fufangdantong Tablets for different areas.
Key words：Fufangdantong Tablets； HPLC； Fingerprint spectrum
复方胆通片是临床常用的治疗急慢性胆囊炎、胆管炎、胆囊、胆管结石并感染、胆囊术后综合征、胆道综合性疾患等的中成药。具有清热利胆，解痉止痛的作用。由茵陈、胆通、溪黄草、穿心莲、大黄组成。茵陈是方剂中的君药，其具有利胆作用的有效成分为篙属香豆精(scoparone)，即6，7二甲氧基香豆精(6，7dimethoXycoumarin)、绿原酸等，而其制剂中的胆通即为篙属香豆精，所以我们采用HPLC技术对不同厂家生产的复方胆通片所含的组分以绿原酸为参照进行了横向比较，建立了复方胆通片指纹谱，为复方胆通片真伪鉴别和品质评价提供依据。
1 仪器与材料
HPll00高效液相色谱系统(脱气机、四元泵、柱温箱、紫外检测器，HPll00 3D化学工作站，美国Agilent公司产品)，乙腈为色谱纯(天津科密欧)，磷酸为分析纯(河北省保定化学试剂厂)，水为三蒸水，0.45 μm针筒式滤器(购自北京超声技术开发公司)，绿原酸标准品购自中国药品生物制品检定所，各厂家生产的复方胆通片购自张家口市各药店。
2 方法
2.1 HPLC指纹谱原理［1~3］在给定的条件下，样品中各组分的相对保留值，相对峰 面积值为各组分所特有，如利用各样品的相对保留值和相对峰面积值建立样品的HPLC相对保留值指纹谱，通过对样品HPLC色谱的数据化可产生一系列的参数，包括重叠率，n强峰，特征峰群及特征指纹峰检出率等，为鉴定药品真伪和区分药品的品质提供客观依据。
2.1.1 相对保留值a的计算我们选择出峰时间居中，峰面积较大，各样品均存在的绿原酸的色谱峰为参照峰，其a值为1，求出样品所有峰的相对保留值a。 a=tRi／tRa(tRi一各组分的出峰时间，tRa一绿原酸的出峰时间)
2.1.2 a值窗口的设定由于保留时间受各种实验因素的影响，每一次实验数据不可能完全一致，故对每个峰位的a值设定窗口为2％，也是每个峰位a值取可信限在±2％的范围内。
2.1.3 指纹谱的建立按a值大小次序排列，在每个a项下标出该组分的相对 面积值(RA)。RA是以1#复方胆通片的总面积为分母，样品中各色谱峰面积为分子，计算得到各色谱峰的相对面积值。各样品中具有相同a值的组分，通过RA的比较，就可以清楚地了解各种样品中该组分的含量多少。这样，由a值和RA值组成样品的相对保留指纹谱。RA=(样品中各峰的面积值/1#复方胆通片的总面积)×100
2.1.4 峰重叠率 峰重叠率是在2个相互比较样品的各自峰数及两者共有峰(指a值相同的峰)的基础上，考虑从质的角度上说其相关性，计算方法是以某样品的指纹谱为基准，以其峰数与被比较样品的峰数之和为分母，两者共有峰的两倍为分子，求得百分率即为峰的重叠率。
2.2 色谱条件色谱柱，HypersilC18(200 mm×4.6 mm，5 μm)，检测波长 280 nm，柱温30℃，流动相 A液0.4％磷酸水溶液，B液乙腈，进样量20 μl，按表l进行洗脱。
表1 流动相线性（略）
2.3 绿原酸标准溶液制备 精密称取一定量的绿原酸标准品，用0.4％磷酸水溶液乙腈95∶5定容至，配成0.120 0 mg・ml1的原液备用。
2.4 供试液的制备将不同厂家生产的复方胆通片碾碎，精密称取各样品粉末1.000 g，用0.4％磷酸水溶液乙腈=95∶5定容至10 ml，超声提取50 min，过0.45 μm针筒式滤器，放4℃冰箱备用。
2.5 样品分析 将不同厂家生产的复方胆通片制成的供试液，按上述色谱条件进样分析(图1)，得各样品的HPLC图谱及各色谱峰的数值。
3 结果
3.1 相对保留值指纹谱的建立根据上述公式计算各样品色谱峰的a值和RA值，凡是a值相同或相近，最大吸收波长、比吸收值都相等的峰，即可认为同一化合物峰，将各个样品每个峰的RA列在相应的a值项下，某a值项无相应峰的样品其RA值为0，得到相对保留值指纹谱。结果见表2。
表2 不同厂家复方胆通片HPLC相对保留值指纹谱（略）
3.2 样品之间的相似性 计算各个样品两两之间的峰重叠率并列表，组成反映样品间相似性的峰重叠率矩阵，该矩阵为对称矩阵，只列出一半即可。结果见表3。
3.3 样品的HPLC的12强峰 每个样品均选出其中峰面积最大的12个峰排列成表，得样品的12强峰。结果见表4。
3.4 特征指纹峰 根据样品中的12强峰及各色谱峰出现的频率，选出a值为0.24，0.42，0.60，0.74，1，1.08，1.22，1.27，1.38，1.42，1.53，1.63，1.70，1.81.92，2.12，2.18，2.28，2.36，2.44，2.87共21个峰为本实验所研究复方胆通片的特征指纹峰。现将样品的特征指纹峰检出情况列于表5中。
表3
复方胆通片HPLC峰重叠率 （略）
表4
复方胆通片HPLC 12强峰（略）
表5
不同厂家复方胆通片HPLC特征指纹峰检出率（略）
4 讨论
本研究采用了HPLC技术，建立了复方胆通片的指纹谱。在实验色谱条件下，能得到较多的色谱峰且分离效果好，椐此所得的相对保留值也十分稳定，所建立的色谱指纹谱具有较大的稳定性和可控性。我们认为该方法能得到复方胆通片所含组分的大量信息，其指纹谱能反映复方胆通片的内在品质。
从上述各表可以看出，不同厂家生产的复方胆通片的化学组分和含量相差较大。可能受方剂中各味中草药的产地、采收时期及其生产工艺等的影响，所以，为控制中成药的质量，应建立从原材料采购到工艺生产的一整套质量标准。
参考文献
［1］ 洪筱坤，王智华．色谱指纹谱在中药质量标准研究中的应用［J］.中成药，2001，23(3)：157.
关键词：水质检测：高效液相色谱技术；应用技术
作为一种常见的水质检测技术，高效液相色谱技术是通过固相萃取的方式使溶质的分析能力大大提升，因此被广泛的应用于环境、医疗等领域。此外，高效液相色谱技术还能对具有高沸点的有机物质及高分子物质进行有效的分析，因此具有较高的研究价值，本文将立足于高效液相色谱技术的应用特点，深入研究水质检测中对高效液相色谱技术的应用。
一、高效液相色谱技术概述
高效液相色谱技术是一种高效的分离分析技术，诞生于上世纪七十年代中期，并在医疗、环境等领域都得到了广泛的实践，该技术立足于经典液相色谱的技术和理论，并辅以计算机、色谱柱，普遍应用于有机化学、食品卫生、环境科学等领域，并表现出了良好的应用效果。高效液相色谱技术主要依靠高效液相色谱仪，该仪器的造价低廉、自动化程高，主要由高压输液系统、色谱分离系统、检测器、数据处理系统组成。其中高压输液系统负责输送流动相，色谱分离系统负责将样品进行分析检测，数据处理系统是将分析检测的结果输出，并在数据处理器的帮助下完成记录与处理工作。因此高效液相色谱技术对高效液相色谱仪具有较高的依赖性，为了实现快速的分离分析，应该不断的对色谱柱进行完善。此外，还应该根据不同的工作需求，调整高效液相色谱仪的高压送流系统、色谱分离系统，使高效液相色谱技术在水质检测工作中发挥出更大的作用。[1]
二、高效液相色谱技术的应用特点
（一）局限性
虽然高效液相色谱技术能够对具有高沸点的有机物质及高分子的有机物质进行有效的分析，然而高效液相色谱技术本身还具有一定的局限性。首先，样品的易挥发性限制了高效液相色谱技术的使用范围，在离子型化合物、热不稳定化合物的分离分析工作中，高效液相色谱技术并不适用。此外，有些样品不容易汽化，沸点低，溶质在固定相的传质速度慢，使用高效液相色谱技术达不到理想的效果。相关工作人员在进行分离分析实验之前，需要根据实验对象的生物活性、费电、热稳定等性能有一个清楚的认识，并判断使用高效液相色谱技术能否获得理想的应用效果。[2]
（二）分离效能高
分离效能高是高效液相色谱技术重要的应用特点，在应用过程中，该技术能够根据溶质中的分析原理与气象色谱法差距，对热稳定性不足、高分子物质进行有效的分析及分类。尤其使用液相色谱的填充柱的分离效能，远远高于气象谱柱的理论大板数。这是因为液相色谱的的分离更加简单，相比气象色谱，液相色谱的分配很少受到分离过程中额外要素的影响，因此液相色谱分离的收益要远远大于气象色谱的分离收益。
（三）选择性好
选择性如何，是评价一个分离分析技术的重要指标。液相色谱中有很多种柱填料，能够控制和改善分离过程中选择性，因此高效液相色谱技术具有较好的选择性，流动相在分离的过程中会对载气产生影响，不仅可以分析不同类型的有机化合物，还能分析在性质上极为相似的同分异构体。
（四）分析速度快
高效液相色谱技术的分析速度很快，这得益于高压输液泵的使用，不仅加快流动相的流速，还能增加固定相的效能，使分析时间大大缩短，尤其在低温的环境下，会在一定程度上增加分子间的色谱分离效率，从而加快分子的分析速度，通常来说完成一个无机化合物的分析仅需要几分钟。[3]
三、高效液相色谱技术在水质检测中的应用
（一）水中农药的分离分析
农药的使用，能够在一定程度上增加农作物的产量，但也会造成环境污染。近年来，许多农民为了增加农作物的产量，过量的使用农药，不仅没有提高农作物的产量，还造成了大范围的水污染，影响到周边的生态环境。过度的使用农药，无法有效的提高产量，因为过量的农药不会被农作物吸收，反而会残留在农作物上，或者被水溶解。因此相关研究人员非常重视农药成分的分析，这不仅关乎农作物的产量，还与环境问题息息相关。相比传统的分离分析技术，高效液相色谱技术具有较为突出的科学性，能够准确的反映出水中的农药残留物的含量、毒性，因此被广泛的应用于水中农药的检测工作。此外，使用高效液相色谱技术，还能在不挥发物质、热稳定不足的物质以及强极性物质检测中发挥出巨大的作用，可以通过固相萃取、液相色谱不连用在线技术检测出富集土壤、蔬菜以及水中的残留农药，可以说高效液相色谱技术在水中农药的检测中具有广阔的应用空间，相关工作人员可以对高效液相色谱技术进行深入研究，应用于杀虫剂的分离、萃取，农药的检测等商用价值较高的领域。[4]
（二）水中酚类化合物分析
大部分工厂在生产的过程中都会排放污染物，尤其在石油化工、造纸厂、炼焦等领域，在生产过程中产生的污水量很大，远远超过了周边生态环境可承受的容量，这在一定程度上造成了水源的污染。酚类化合物是工厂生产过程中排放的主要污染物，如果用常规的水处理技术，很难获得满意的净水效果。如果长时间引用这种含有酚类化合物的水源，会影响人的身体健康，甚至会出现头昏脑涨、出疹等症状。然而路酚类化合物也拥有巨大的利用价值，可以提取用于消毒剂、杀虫剂的制作。在水中酚类化合物的分析中，使用气象色谱、液相色谱法以及分光度法都能取得良好的效果，这就需要相关工作人员针对水中的卤代酚物质分布情况、含量进行研究，并使用合适的分离分析方法进行操作。相比液相色谱法，气相色谱法的适用性较弱。
（三）水中多环芳烃的检测分析
水中多环芳烃化合物具有挥发性，在不完全燃烧条件下，有的有机物质会产生碳氢化合物，这种致癌物质在全球范围分布十分广泛，因此加强水中多环芳烃物质的检测，也是水质检测的重要部分，水中多环芳烃化合物的特点在于不容易汽化，可以借助荧光检测仪等仪器，减少光信号的干扰，从而使反相色谱柱的分离效果更加理想。[5]
结语：
综上所述，高效液相色谱技术是一种灵敏度高、准确性高、分离高效能的分析方法，适用于水中农药，多环芳烃物质、酚类化合物检测当中，并发挥着重要的作用。
参考文献：
[1]刘红卫.高效液相色谱技术在食品安全分析中的应用研究及《出口中国苦水玫瑰油检验规程》标准的制订[D].兰州大学，2007.
[2]王传蓉.高效液相色谱技术在饲料分析中的应用[A].中国奶业协会.第四届中国奶业大论文集[C].中国奶业协会：，2013：2.
[3]张婉，王覃，周悦，杜宁，李津廷，张经华.超高效液相色谱技术在食品安全检测中的应用[J].现代科学仪器，2010，04：119-122.
[关键词]高效液相色谱 石油化工 分离 应用
中图分类号：O657.72 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）18-0363-01
由于高效液相色谱 （ HPLC ）的分离能力具备高效、迅速、高灵敏检测的优势，因此受到各领域的青睐，在生物医药、石油化工、食品、环保以及检疫等等不同领域上均得到广泛推广和应用，跃居成为当今其中一个最受欢迎的分析技术。色谱甚至贯穿了石油化工的整个生产流程，从石油开采、炼制、成品、质量检测监控，成为不可替代的技术。本文将简要论述高效液相色谱在石油炼制和石油化工产品分析中的应用。
一、高效液相色谱在石油炼制中的应用
原油是石油化工企业进行化工生产所必需的原料，它的族组成与加工工艺的方式有着紧密的关联。原油的简单族组成是通过将其组分分离进行分析，主要为饱和烃、芳烃、胶质和沥青质四种，而较重的原油组成也相对复杂。传统方式是通过常规四组分法对原油中沥青和重质油族组成进行分析，但类似这种传统的柱色谱法，除了分析流程长之外，还要耗费许多溶剂和吸附剂。
HPLC初始是借助于硅/矾土柱来对轻质石油组分进行分离，通过不断发展后开始通过键合相 HPLC柱来对重质石油组分进行分离。相比ASTM 方法来说，此法在分析速度上具有明显的优势，并且重复性好，自动控制较为容易、稳定。而我国石油化工行业也早已引入了HPLC技术来进行原油组分分析，并出台了相应的石油天然气行业标准。
随着国家的不断发展，石油资源的开发进程也越发深入，使油品陷入不断重质化、劣质化的趋势，给催化裂化工艺带来了巨大的挑战，重质油组分的分析也成为了控制流化催化裂化和加氢工艺条件的基础，此时，HPLC技术开始得到认可与推广。
一方面，清除沥青质是色谱柱进行分离前的重要步骤，因为沥青质会对饱和烃洗提过程中的吸附和沉淀对定性定量结果产生较大的干扰。另一方面，HPLC解决了上述挑战性难题，其切换反冲阀反冲技术在氰基柱上使原油中的重质组分分析得到了实现，特别是胶质含量的分析，借助比较法对使用极性和非极性不同溶剂反冲洗实验研究来确定极性溶剂测定的结果较为准确。此外，成跃祖等人还对化学键合相高效液相色谱和反冲技术分析原油烃族组成的色谱条件相结合进行研究，对四种国产原油进行了烃族组成分析。
而后，俞鹏程等相关研究人员进行了典型分子的测定校正因子和切片进行分类后，成果的实现了用 HPLC技术来进行含有渣油的催化裂化原料油中的芳烃类别的监测，并得出了最为理想的催化裂化原料油为饱和烃、一环芳烃以及二环芳烃。在这之后，国外研究人员对HPLC法进行了进一步的优化，并对示差折光、紫外检测器进行了结合，借助质谱来进行数据的比较，最后得出了饱和组分的含量会随着馏分的变重而逐渐减少，而芳烃组分的含量则会随着馏分变重而逐渐提升，并得出了在利用紫外检测来进行单环芳烃的测定时，最理想的波长是210 nm。
HPLC技术除了可以使用在原料油的族组成分析上外，还可以运用在沸点和分子量分布的测定上。如果将HPLC的模拟蒸馏与ELSD法进行结合，则可以进行重油中的从中到高沸点馏分的测定，而且这样的方法可以直接进行不可蒸馏组分的测定，省去了内标的需要，并且该方法与GC模拟蒸馏测定的结果是完全相符的。在HPLC的测定方法中，以正构烷烃为标准物来建立的重质馏分油的分子量分布校正曲线，并进行面积归一化，则可以清楚的知道实际油样中每个分子量分布范围的百分比。不仅如此，HPLC技术还是石油炼制过程中分析抽提溶剂质量的一种较为理想的选择。
二、高效液相色谱技术在石油化工产品分析中的应用
（1）高效液相色谱技术在汽油产品分析中的应用
在汽油产品分析中，GC的使用非常广泛，特别是在烃族组成和单环芳烃的检查分析中，使用的频率更高，在这一点上，HPLC同样有着一定的效果。在进行汽油中芳烃的测定是，HPLC技术的使用不仅有着更高的效率，而且操作简单，同时还可以清楚的知道C6到C10芳烃的含量以及部分异构体的含量。如果利用硅胶柱串联氨基柱来作为固定相，正己烷作为流动相，再利用示差折光检测器来进行石脑油中烷烃、芳烃的含量测定，不仅可以有的提高测定的准确性，还可以简化测定过程，同时情况下只需9分钟就可以完成一次测定，这样的HPLC测定方法比GC法有着明显的优势，所以在进行较重油品中的芳香烃类化合物测定时，HPLC技术同样也是一个非常理想的方法。
（2）高效液相色谱技术在油中的应用
高效液相色谱技术在油、柴油中也有着非常不错的效果。目前，HPLC除了应用在石油产品的烃族组成分析外，在石油化工产品添加剂中也同样运用到了HPLC法。在油的使用过程中，经常会出现氧化、缩聚等情况，导致油的质量变差，如果在其中适当的加入抗氧化剂则可以有效的防止油氧化反应的发生，使其抗氧化性得到更换的提高能。而在油抗氧剂的制备过程中，HPLC则是一种必不可少的方法。
（3）高效液相色谱技术在聚合物中的应用
除了上述中高效液相色谱技术的运用外，在许多的塑料、橡胶等聚合物的生产过程中也普遍的使用到了HPLC技术。在聚合物的生产过程中，都需加入相应的添加剂，例如：抗氧化剂、热稳定剂、光稳定剂、染色剂等。而HPLC在添加剂的分离、分析中，可以在不破坏分析物的结构的基础上进行，相对于GC有更更明显的优势，灵活性更大。除此之外，运用反相 HPLC进行PVC塑料中光稳定剂的提取与分离检测同样有着效果高、结果准确的效果。
三、结论
综上所述，在石油化工企业生产过程中，高效液相色谱（HPLC）已经成为其不可替代的技术之一，尤其是HPLC在复杂原油、重质油等石油化工产品组分的分离、分析上的突出贡献，能够使样品结构、性质不受破坏的同时，还能将样品进行无损回收，完全将传统的 LC法整体比下去，达到高效迅速分离分析的目的， 体现出其巨大的应用价值。将HPLC技术与其他先进的检测技术、多维分析模式进行适当的结合应用，还能够大大提升HPLC定性、定量的准确率，将实现其在石油化工领域中应用逐渐趋向最大化。
参考文献：
[1] 李锋林.高效液相色谱技术在石油化工行业的应用[J].广州化工，2015（12）.
关键词：绿原酸；高效液相制备色谱；纯化流速；梯度；洗脱
现目前，我国的在杜仲叶片上所进行的绿原酸分离研究工作，还由于多个方面原因的影响，导致其分离研究的试验还仅仅只是停留在一个试验性的阶段。目前应用较为普遍的技术便是直接利用硅胶、多级萃取等措施，最后利用重结晶的方式，才能够从萃取物中获得少量的纯化绿原酸，其大型的绿原酸制备技术研究一直没有得到进展。但我国从杜仲叶中发现了大量的绿原酸，其含量几乎能够和金银花媲美，并且该类药物的价格低廉。下文主要是使用现代化的新型设备来对杜仲叶之中所存在的绿原酸进行了分离纯化试验。
1 实验
1.1仪器与试剂
1.1.1仪器
实验仪器为：HGS型制备液相色谱仪改性C18填料HGS型紫外检测仪六通进样阀TL-ó型流量调节仪MN型记录仪。Biotronik液相色谱分析仪BT8200UV检测器BT8100高压泵Dynamic混合器C-R6A数据处理仪冷冻干燥机旋转蒸发仪Explorer电子天平756MC-Vis分光光度计KQ-100E超声波发生器。
1.1.2试剂
实验试剂为：甲醇，分析纯，有机酸A，B，C和D，分析纯有机酸E，分析纯绿原酸标准样品水。
1.2色谱条件
1.2.1制备色谱条件
ODS色谱柱流动相为醇B-水-酸流速梯度洗脱检测波长为254nm进样量为10mL。
1.2.2分析色谱条件
色谱条件为：YWG-C18色谱柱流动相为乙腈-水-乙酸流速为1mL/min柱温为25e衰减为3纸速为3mm/min测定波长为326nm进样体积为6LL。
1.3绿原酸的色谱制备
称取适量杜仲叶提取物，加入制备色谱流动相，于超声波中溶解15min，配制成一定浓度的制备样品溶液。
制备条件如下：以15%的有机酸B为流动相，加入0.1%的有机酸E，采用先为28mL/min，后为45mL/min的流速梯度进行洗脱，对CGA进行色谱分离制备。根据紫外检测器的实时监测及显色反应的结果，收集各组分。可见，其分离效果良好。当进样量为2500mg时，测定不同切割位置对所得组分中CGA含量的影响。在CGA峰两侧做切线，两切线与基线相交得一区间a，在此区间接取CGA组分，平行制备5次，CGA的回收率为83.8%，相对标准偏差为3.1%。在18～22min接取的为AU组分，而在28～45min接取的为FL组分。
1.4组分纯度测定
将所收集的相应组分置于旋转蒸发仪中减压回收溶剂，将所得浓缩液置于真空冷冻干燥机中干燥，得到白色晶体。分别称取5m品，用少量分析色谱流动相溶解，并定容到25mL。用0.45Lm微孔滤膜过滤，按照分析色谱条件进样，采用外标法测定CGA产品的纯度，结果见表1。
由表1可见，得到的绿原酸产品纯度很高，完全可用作生化试剂标准品，满足新药研发的需要。
2 结果与讨论
在对杜仲叶进行绿原酸提取分离的过程中，其中对于分离纯化带来较大影响因素的一个原因就是杜仲黄酮、桃叶珊瑚甙这两种物质。在实际进行分离的过程中，由于其中所存在的绿原酸以及黄酮两个部分自身都是数据多酚类的物质，这两者之间所存在的性质以及结构性极为近似，使用以往传统的溶剂萃取技术，根本无法切实有效的得到具有较高纯度的绿原酸。那么，就必须要从以下几个角度来进行入手，最大限度的使得制备工艺能够得到相应的提升。
2.1流动相体积分数的优化
在制备色谱之中，能够明显的发现，其中的流动相体积分数与分离纯化的效果这一方面有着极大的影响。如果说不在其中添加入适量的有机酸，也不使用与其完全相同体积的分数来对有机酸B进行是绿原酸的等度洗脱处理。那么，就能够发现，体积较低的分数有机酸B自身在投入到CGA之中进行洗脱所展现出来的效果较差，并且在这一处理过程中所需要耗费的时间过长，不仅会造成大量流动相的消耗，还会导致分离不完全的情况出现；并且，即便是使用高体积、洗脱能力较强的有机酸B，在流速数值较大的情况下，其分离的效果也同样交叉。无法切实有效的将杜仲叶之中所存在的AU以及CGA进行分离，尤其是FL与CGA之间的分离效果完全无法满足实际需要。所以，在经过大量的试验测算之后，最后之间将15%的有机酸B，来当做是分离纯化过程中的流动相。
2.2流动相中有机酸的作用及用量
大量的实验结果证明，在进行分离纯化的过程中，其制备色谱之上所呈现出来的AU至少要比CGA先出峰，但是这一过程中的分离并不完全，这直接导致是FL与CGA之间所呈现出来的色谱峰重叠现象极为严重。所以，从分子结构方面来对其中的CGA进行分析，发现CGA分子之中含有一个羧基，而在AU、黄酮这两个部分的之中却没有包含任何的羧基。要在C18柱上有效地分离绿原酸、黄酮与桃叶珊瑚甙，必须在调节流动相中有机酸B的体积分数的同时向流动相中加入有机酸E。有机酸E的加入可抑制绿原酸的离解，延长其保留时间，使得各成分彻底分离。
2.3讨论
绿原酸（CGA）和杜仲黄酮（FL）都是杜仲叶中含量较高的活性成分，它们结构和性质相近，用一般柱色谱难以分离完全。显色法包括黄酮-铝盐显色法和桃叶珊瑚甙的艾氏试剂显色法。黄酮和绿原酸都能与铝盐作用，前者在碱性条件下呈黄色，而后者则呈紫红色，有明显的颜色差异。桃叶珊瑚甙的显色反应具有较高的选择性，对桃叶珊瑚甙显蓝色，而与杜仲中的其他2种主要的环烯醚萜类化合物京尼平甙酸、京尼平甙不发生显色反应，与CGA和FL也不发生颜色反应。因此，在实验过程中，采用这2种简单易行的方法进行跟踪检测，效果良好。
3 结论
综上所述，在使用制备型高效液相色谱法来对绿原酸进行分离纯化的过程中，应当使用反相高效液相制备系统来进行实际操作，通过乙醇、水、低量的翔酸作为相应的流动相，来进行CGA的制备。而在进行分离的过程中，其中所存在的主要干扰成分则应当是使用极为灵敏的显色法来对黄酮以及桃叶珊瑚甙进行跟踪性的检测。同时，还应当在这一过程中直接和高效液相色谱仪相结合，以此来获得纯度达到98.61%的是CGA制品。同时，还可以利用速度梯度的洗脱方式，来使得分离度程度跟高，不仅节约了分离的时间，还减少了试剂在这一过程中的消耗量。
参考文献
[1]赵晖.杜仲叶药理作用研究（Ⅰ）——抗衰老作用[J].国外医学（中医中药分册）.2000（03）
【关键词】五种皮质激素；高效液相色谱；含量测定
【中图分类号】R927.1 【文献标识码】A 文章编号：1004-7484（2012）-04-0610-01
醋酸肤轻松、醋酸去炎松、醋酸氟氢可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松五种皮质激素软膏为治疗皮肤病的常用药。国内一般采用紫外－可见分光光度法分别测定吸光度，因为有基质干扰，含量偏高，且操作复杂，测定结果重现性差。其他方法收载的醋酸肤轻松软膏含量测定方法均不够理想，本人经过试验，采用高效液相色谱法较好，做了回收率试验，确立样品的含量测定。
1.仪器、试剂及样品
岛津UV-2100型高效液相色谱仪，紫外检测器，检测波长：240nm，柱温：30℃；填料用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Diamonsil C185u200×4.6mm柱；甲醇、乙醚为色谱纯规格；醋酸肤轻松、醋酸去炎松、醋酸氟氢可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松五种皮质激素对照品及内标物醋酸地塞米松、炔诺酮均符合规定，内标物甲基素及黄体酮为中国药品生物制品检定所提供的标准品；供试品均为市售品。
2.分析条件确定
2.1 取醋酸肤轻松、醋酸去炎松、醋酸氟氢可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松五种皮质激素的甲醇溶液（浓度为50ug／ml），进样量为10ul，流速为1.0ml／min，以不同比例的甲醇－水为流动相，考察各自的保留时间，计算容量因子（K）。
通过实验结果，表明分离醋酸肤轻松、醋酸去炎松和醋酸氟氢可的松这三种皮质激素它们适宜的甲醇浓度为60～70%，而分离丙酸倍氯美松及氯氟舒松这两种皮质激素它们适宜的甲醇浓度为75%左右为好，这样它们的容量因子均能在2～8之间。
2.2 有文献报导在反相HPLC分离甾体激素时，在流动相中加少量乙醚作为有机改性剂，可提高化合物的分离灵敏度。实验证明在流动相中加少量乙醚能使醋酸肤轻松、醋酸去炎松及内标物的保留时间提前，峰形尖锐并提高了分离度。
2.3 峰面积与浓度的线性关。精密称取醋酸肤轻松、醋酸去炎松、醋酸氟氢可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松这五种皮质激素的对照品与内标物适量，用甲醇制备对照品溶液、内标溶液与测定溶液，按选定的色谱条件进样10ul，从所得的色谱图，以被测皮质激素对内标物的峰面积比为纵坐标，以相应的浓度为横坐标作校正曲线图谱，均得到能过零点的直线，其数据经直线回归，线性关系及精度较好。
2.3.1 对照品溶液的制备。精密称取醋酸肤轻松、醋酸去炎松、醋酸氟氢可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松对照品25mg，置200ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。
2.3.2 内标溶液的制备。精密称取内标物炔诺酮10mg、醋酸地塞米松30mg、甲基素12.5mg、黄体酮15mg各置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。
2.3.3 测定溶液。精密量取5种对照品溶液各1ml、2ml、3ml、4ml、5ml分别置10ml量瓶中，各分别加内标溶液1ml（醋酸肤轻松、醋酸去炎松加炔诺酮内标溶液，醋酸氟氢可的松加醋酸地塞米松内标溶液，丙酸倍氯美松加甲基素内标溶液，氯氟舒松加黄体酮内标溶液）加甲醇稀释至刻度。
3.回收率测定
称取按处方制得的空白基质5g，精密加对照品溶液10ml，搅匀，加甲醇适量，置80℃水浴中加热2分钟，使软膏熔融，精密加内标溶液5ml，放冷至室温后，用甲醇稀释使成50ml，摇匀，置冰浴中冷却2小时，取出后迅速滤过，量取续滤液20ul，注入液相色谱仪，记录色谱图。按内标法以峰面积计算，色谱条件同上面所述。根据以上同体积对照品溶液在相同色谱条件下测得的校正因子计算回收率。5种对照品所得回收率分别为101.8%、100.4%、99.89%、101.0%、99.82%。
4.重复性试验
取市售各种软膏，精密称取约相当于皮质激系1.25mg，置50ml量瓶中，加甲醇约30ml，置80℃水浴中加热2分钟，操作及色谱条件同上。平行操作5份样品，RSD值为1.2%。
5.样品的含量测定
样品操作及测定方法同重复性试验，另按照提取法测定样品。其结果分别为：醋酸肤轻松：HPLC法：95.37%，提取法101.65%；醋酸去炎松：HPLC法：96.00%，提取法97.10%；醋酸氟氢可的松：HPLC法：99.68%，提取法100.60%；丙酸倍氯美松：HPLC法：98.02%，提取法100.50%；氯氟舒松：HPLC法：98.25%，提取法99.92%。
6.结果与讨论
本文采用高效液相色谱法测定醋酸肤轻松、醋酸去炎松、醋酸氟氢可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松五种皮质激素软膏的含量，经反复试验，本法与提取法所得结果基本一致，且操作简单，所用试剂方便易得，应用HPLC法可有效分离这五种成分，所以认为此法较好。
参考文献
［1］ 《药物分析杂志》，1982.
关键词：高效液相色谱法 兰索拉唑 含量测定
中图分类号：O657 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2015）02（b）-0000-00
兰索拉唑为苯并咪唑衍生物，为继奥美拉唑之后的新一代的质子泵抑制剂，能有效地抑制胃酸分泌，治疗胃酸相关性疾病。国外大量临床应用证明，兰索拉唑对消化性溃疡有很好的疗效，由血液吸收入壁细胞后作用于壁细胞质子泵即抑制H+/K+-ATP酶的活性，从而持续抑制胃酸分泌。
兰索拉唑不耐酸，目前比较普遍给药方式为口服的兰索拉唑肠溶片和肠溶胶囊，起效较慢，而改变给药途径为静脉给药的注射用兰索拉唑提高了兰索拉唑的生物利用度，缩短了起效时间。为保证产品质量，我们拟用高效液相色谱法对其含量测定方法进行研究。
1 仪器与试药
Agilent 1260高效液相色谱仪；AlltimaTM C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；MS105型精密电子天平（梅特勒）；兰索拉唑对照品（批号：100709-201304，含量为99.8%，中国食品药品检定研究院）；注射用兰索拉唑（30mg，以C16H14F3N3O2S计，自制）；甲醇、三乙胺、磷酸均为色谱纯，水为注射用水。
2 含量测定方法
2.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，AlltimaTM C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水-三乙胺-磷酸（600：400：5：1.5）[用磷酸溶液（110）调节PH值至7.3]，检测波长为284nm；流速为1.0ml/min；柱温30℃；进样量20μl。调节流动相比例使兰索拉唑峰的保留时间约为16分钟。
2.2 测定法
精密称定样品，约含兰索拉唑15mg，置100ml容量瓶中，加0.1mol/L氢氧化钠溶液5ml与甲醇-水（60：40）溶液适量，超声使溶解，用甲醇-水（60：40）溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取兰索拉唑对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。
3 方法学试验
3.1 准确度试验
按照制剂处方，分别称取18mg、15mg、12mg的兰索拉唑对照品各3份，分别加入处方量的辅料于同一100ml容量瓶中，加0.1mol/L氢氧化钠溶液5ml与甲醇-水（60：40）溶液适量，超声使溶解，用甲醇-水（60：40）溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，续滤液分别作为测定浓度120%、100%、80%的供试品溶液，按外标法以峰面积计算测得量和回收率，试验结果见表1。
表1 准确度试验结果
加入量（mg）
测得量（mg）
加样回收率（%）
平均回收率（%）
RSD（%）
18.01
18.07
100.33
100.08
0.42
18.03
17.99
99.78
18.10
18.08
99.89
15.02
15.01
99.93
15.04
15.06
100.13
15.08
15.16
100.53
12.02
12.12
100.83
12.01
11.95
99.50
12.05
12.03
99.83
结果表明：含量测定平均回收率为100.08%，RSD为0.42%，准确度试验符合测定要求。
3.2 线性范围试验
储备液的制备：称取兰索拉唑对照品15mg，置50ml容量瓶中，加0.1mol/L氢氧化钠溶液5ml与甲醇-水（60：40）溶液适量，超声使溶解，用甲醇-水（60：40）溶液稀释至刻度，作为储备液。
精密量取上述溶液3ml、4ml、5ml、6ml、7ml，分别置10ml容量瓶中，加甲醇水（60：40）溶液稀释至刻度，作为线性试验溶液。分别精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以兰索拉唑浓度与相应峰面积计算线性回归方程，y=13263x-368.8，相关系数r=0.9994。结果表明，兰索拉唑浓度在0.09mg/ml～0.21mg/ml范围内，具有良好的线性关系。
3.3 重复性试验
取供试品，照含量测定项下方法试验，重复测定6次，计算其平均值。
结果表明：6次测定的平均含量为标示量的101.98%，RSD为0.21%，平行性好，重复性试验符合测定要求。
3.4 溶液稳定性试验
取供试品，照含量测定项下方法试验，每隔1小时测定一次，共测定5次，计算其平均值。
结果表明：兰索拉唑平均含量为标示量的101.44%，RSD为0.36%，供试品溶液在室温条件下5小时内稳定。
3.5 进样精密度试验
取供试品溶液，精密量取20μl，注入液相色谱仪，连续进样6次。
结果表明：兰索拉唑平均峰面积为11891.5，RSD为0.56%，该方法进样精密度良好。
3.6 中间精密度试验
取供试品，照含量测定项下方法试验，变动因素为不同日期，不同人员。计算其平均值。
结果表明：兰索拉唑平均含量为标示量的101.48%，RSD为0.41%，该测定方法中间精密度良好。
4 样品含量测定
取三批供试品，照含量测定方法分别进行测定。结果表明：三批供试品含量均为98.0%～102.0%之间。
5 讨论
建立的高效液相色谱法通过准确度试验、线性范围试验、重复性试验、溶液稳定性试验、进样精密度试验及中间精密度试验等方法学试验，表明该含量测定方法具有准确、可靠、灵敏度高等特点，可有效控制注射用兰索拉唑的含量。
参考文献
[1]兰索拉唑质量标准 中国药典2010年版第一增补本 281.
【Abstractobjective】TosetupamethodforqualitycontrolofFuyankangtablets.METHOD：HPLCmethodwasdevelopedtoquantitativedetermination.TheseparationwasperformedonAgilentTechnologiesZORBAXExtend-C184.6×250mm,5μm.Themobilephasewasacetonitrile-methanol-phosphatebuffer(pH=6.8)(16：16：68).Theflowratewas1.0ml·min-1.TheUVdetectionwavelengthwas220nm.Thecolumntemperaturewas30℃.RESULTS：ThelinearrangeofMatrineandOxgmatrinewereat0.02～0.40mg·ml-1(r=0.9995)and0.01～0.20mg·ml-1(r=0.9997)respectively,theaveragerecoveries(n=6)were98.2%and97.6%withRSD1.4%and2.2%.CONCLUSIONThemethodissimpleandaccurate,itcanbeusedforqualitycontrolofKangfulingcapsules.
【Keywords】HPLC；Kangfulingcapsules；Matrine；Oxgmatrine；Determination
康妇灵胶囊为《国家药品监督管理局标准（试行）》收载的品种，由苦参、杠板归、黄柏、益母草、鸡血藤、红花龙胆、土茯苓、当归等8种中药组成。具有清热燥湿、活血化瘀、调经止带的功效，为妇科常用中药[1]。苦参含有苦参碱、氧化苦参碱等成分，我们采用高效液相色谱法测定制剂中苦参碱、氧化苦参碱的含量，该项方法操作简便、快速、准确可靠，可用于康妇灵胶囊的质量控制论文。
1仪器与试药
1.1仪器LC-2010A高效液相色谱仪，CLASS-VP色谱工作站。
1.2试药苦参碱对照品（批号：100078-200414），氧化苦参碱对照品（批号：110780-200004），由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用；康妇灵胶囊为市售样品（贵州和仁堂药业有限公司，规格：0.4g·粒－1，批号：20061108，20061202，20061216）。乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱：AgilentTechnologiesZORBAXExtend-C184.6×250mm，5μm，流动相：乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液（PH6.8）（16:16:68），检测波长：220nm，流速：1.0ml/min，柱温：30℃。
2.2溶液配制
2.2.1对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时以上的苦参碱对照品和氧化苦参碱对照品各适量，分别加甲醇制成每1ml各含0.4mg的对照品贮备液；再精密量取苦参碱对照品贮备液和氧化苦参碱对照品贮备液各适量，加甲醇制成每1ml含苦参碱0.2mg、氧化苦参碱0.1mg的混合溶液，作为对照品溶液。
2.2.2样品溶液的制备取康妇灵胶囊10粒内容物，研细，取约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨溶液2ml使湿润，再加三氯甲烷（CHCl3）30ml，超声处理（功率250W，频率33KH2）20分钟，滤过，取滤液，再用三氯甲烷洗涤残渣、容器及滤器4次，每次5ml，滤过，滤液合并，置水浴上蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.3阴性对照溶液的制备取除苦参以外的处方中其余药材的十分之一量，按法制成片，再按样品制备方法，制成阴性对照溶液。
2.3专属性试验
分别精密吸取样品溶液、阴性对照溶液及对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图（图1）。由图1可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间（1氧化苦参碱：6.866min；2苦参碱：15.422min）的色谱峰，阴性试验无干扰，证明本法可行。
2.4线性范围考察
精密吸取对照品贮备液各适量，分别加甲醇配成浓度分别为苦参碱：0.02、0.05、0.10、0.20、0.30、0.40mg·ml－1，氧化苦参碱：0.01、0.03、0.05、0.10、0.15、0.20mg·ml－1的溶液，摇匀，滤过，精密吸取续滤液各10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积（A）为纵坐标，其浓度（C）为横坐标，线性回归，苦参碱回归方程为：A=4.34×105C＋3.87×102，r=0.9995；氧化苦参碱回归方程为：A=1.21×104C＋8.07×102，r=0.9997。结果表明，苦参碱在0.02～0.04mg·ml－1范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系；氧化苦参碱在0.01～0.20mg·ml－1范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系。
2.5精密度
取样品（贵州和仁堂药业有限公司，批号：20061108）按“2.2样品溶液的制备”方法制备样品溶液，重复进样5次，进样量10μl，在上述色谱条件下求得苦参碱峰面积RSD为0.9%，氧化苦参碱峰面积RSD为1.2%，表明精密度较好。
2.6稳定性试验
取样品（贵州和仁堂药业有限公司，批号：20061108）溶液，在0、2、4、8、24h分别进行测定。结果表明样品溶液在24h内基本稳定，苦参碱峰面积
的RSD为1.1%，氧化苦参碱峰面积的RSD为0.8%。
2.7重复性试验
取样品（批号：20061108）共6份，分别按“2.2样品溶液的制备”方法制备样品溶液，进行测定，求得苦参碱含量的RSD为0.7%，氧化苦参碱含量的RSD为1.6%，表明重复性较好。
2.8加样回收率试验
精密称取已知含量的样品（贵州和仁堂药业有限公司，批号：20061108，苦参碱含量3.01mg·g－1，氧化苦参碱含量2.42mg·g－1，平均装量0.3916g·粒－1）适量，共6份，分别置具塞锥形瓶中，分别精密加入苦参碱对照品溶液（0.2001mg·ml－1）、氧化苦参碱对照品贮备液（0.1000mg·ml－1）各适量，挥去甲醇，按“2.2样品溶液的制备“方法操作，得回收率试验溶液，依法测定，结果见表1。
2.9样品含量测定
分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定三批样品中苦参碱、氧化苦参碱峰面积，按外标法计算其含量（n=5），结果见表2。根据三批样品所测结果，暂定每粒康妇灵胶囊的苦参碱含量质控定量限为1.8mg，氧化苦参碱含量质控定量限为0.5mg。表1苦参碱、氧化苦参碱加样回收率试验表2三批样品含量测定结果
3讨论
3.1流动相的选择笔者选择了三种流动相：①乙腈-0.1%磷酸溶液（20:80）（三乙胺调节PH值至8.0）[2]；②乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液（PH6.8）-三乙胺（18:18:70:0.1）[2]；③乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液（PH6.8）（16:16:68）。经多次测试结果表明，前两种流动相所得峰形较宽，含杂质多，而采用③乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液（PH6.8）为流动相所得样品峰形好，干扰成分少，故选此做为含量测定的流动相。
3.2溶剂的确定笔者比较了用甲醇溶解供试品及用流动相溶解供试品，结果以甲醇为溶剂分离效果好，且保留时间短。
3.3通过对3批样品中苦参碱、氧化苦参碱的测定，结果表明苦参碱最高含量为1.38mg·粒－1，最低为1.18mg·粒－1；氧化苦参碱最高含量为1.08mg·粒－1，最低为0.94mg·粒－1。综合考虑确定限量，每粒含苦参碱不得低于1.8mg，含氧化苦参碱不得低于0.5mg。
本方法结果准确，方法简便，重现性及回收率均理想，可以有效地控制产品质量。
【参考文献】
【关键词】 氟喹诺酮；四环素；磺胺；固相萃取；高效液相色谱串联质谱；土壤
simultaneous extraction and determination of eighteen fluoroquinolone，tetracycline and sulfonamide antibiotics from soils using solid-phase extraction and liquid chromatography-tandem mass spectrometry
ma li-li，guo chang-sheng，hu wei，sha jian，zhu xing-wang，ruan yue-fei，wang yu-qiu* (key laboratory of pollution processes and environmental criteria of ministry of education，college of environmental science and engineering，nankai university，tianjin 300071)abstract an analytical method was developed for the simultaneous extraction and determination of eighteen fluoroquinolones (fqs)，tetracyclines (tcs) and sulfonamides (sas) antibiotics from soils using solid phase extraction and liquid chromatography tandem mass spectrometry.soil sample was firstly extracted by phosphate buffer at ph 3 in combination with 50% of organic modifier acetonitrile，then purified and concentrated by sax and hlb column.qualitative and quantitative analysis were carried out for the analyte under the mrm mode after the chromatography separation on kromasil c18 (250 mm×4.6 mm，5 μm) column.the range of recoveries (in percent) for fqs，tcs，sas，in the soil matrix was 67.20%-88.98%，62.23%-85.36%，55.76%-97.37% with 1.1%-17.2% of relative standard deviation respectively in two different concentrations.the limits of quantification (loq，s/n=3) were 3.36-8.88 μg/kg，0.56-0.91 μg/kg and 0.07-1.85 μg/kg for fqs，tcs and sas，respectively.this method was successfully used to detect 18 antibiotics in 6 soil samples with different land types in tianjin.results showed some of the antibiotics in the arable soil were detected，with concentrations of 1.72-119.57 μg/kg.
keywords fluoroquinolones；tetracyclines；sulfonamides；solid phase extraction；high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry；soil
1 引言
抗生素广泛应用于人类及动物疾病的防治。133229.COm据报道，进入动物体内的抗生素有相当一部分随粪、尿等排泄物排出[1]，而粪便、尿液又作为有机肥大量施用于农田，造成抗生素在土壤中不断累积。部分进入污水处理厂的抗生素并不能完全被去除[2~5]，它们又随着终水排放进入环境中。当受污染的水体用于灌溉时，抗生素又从水相转移到土壤相。目前，有关环境中抗生素的分析检测方法的报道较多[6~8]，但同步提取、同时检测土壤基质中多类目标抗生素的高通量快速分析方法尚不完善[9~12]。本实验通过优化前处理及检测条件，建立了同步提取、同时测定土壤中氟喹诺酮、磺胺和四环素类18种抗生素药物的高压液相色谱-串联质谱分析方法，在30 min内完成了18种抗生素的快速分离检测。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂
waters 2695液相色谱仪、quattro microtm api质谱联用仪器、masslynx 4.0工作站(美国waters公司)；十二孔固相萃取装置(美国supelco公司)；氮吹仪(organomation associate)；强阴离子交换柱(sax) sep-pak qmp (3 ml/500 mg，waters公司)；oasis hlb固相萃取柱(6 ml/500 mg， waters公司)；hypersep retain pep 固相萃取柱(6 ml/500 mg，thermo公司)；hypersep c18固相萃取柱(6 ml/500 mg， thermo公司)；proelut c18固相萃取柱(6 ml/500 mg，dikma公司)。
甲醇和乙腈(色谱纯，dikma公司)；超纯水(电阻率≥18.2 mω·cm)；氧氟沙星(dr.ehrenstorfer gmbh 公司)；诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、四环素、金霉素、土霉素、磺胺醋酰、磺胺氯哒嗪、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲基异唑、磺胺噻唑、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺吡啶、磺胺二甲基异唑(sigma公司)。其它试剂均为分析纯。
2.2 标准溶液及缓冲液的配制
称取适量四环素类与磺胺类标准品，用甲醇配制成1000 mg/l的标准储备液，称取适量氟喹诺酮类标准品，用甲醇配制成100 mg/l的标准储备液，保存在-20 ℃冰箱中。使用时，以甲醇稀释至所需浓度。配制edta-mcilvaine缓冲液（ph=4）及磷酸盐缓冲液（ph=3）。
2.3 样品前处理
土样采自天津市饮用水源地周边林地0~20 cm的表层土壤(经检测未含目标物)。自然风干后，过0．30 mm孔径筛，称取2 g放入锥形瓶中，加入适量混合标准溶液后，于室温下暗处放置24 h。
取2 g土样，加0.4 g乙二胺四乙酸二钠及v(磷酸盐缓冲液)∶v(乙腈)=1∶1 (ph=3)的混合液10 ml，振荡20 min， 超声提取10 min，离心并收集上层提取液。反复提取3次后，合并提取液并稀释至400 ml。spe固相萃取柱(sax-hlb串联)预先采用6 ml甲醇、6 ml超纯水、6 ml缓冲液依次淋洗活化。开启真空泵，控制流速约为3~5 ml/min将提取液上柱。过柱完成后，用6 ml超纯水冲洗串联柱，继续抽真空10 min以除去柱中残留水分，拆下sax小柱，将hlb柱于n2保护下干燥10 min。最后，以6 ml甲醇淋洗，收集洗脱液并在室温下用n2吹扫至近干，用甲醇定容至1 ml，待测。
2.4 色谱-质谱条件
kromasil c18色谱柱 (250 mm×4.6 mm， 5 μm)；流动相为乙腈(a)和0.1%甲酸溶液(b)，柱温25 ℃，流速0.4 ml/min；梯度洗脱程序：0~10 min，15%~30% a；10~16 min，30%~50% a；16~22 min， 50%~55% a；22~29 min，55% a；29~30 min，55%~15% a；30~32 min，15% a。进样量20 μl。
电喷雾离子源；正离子扫描；雾化气、脱溶剂气、锥孔气为氮气，碰撞气为氩气；源温度和脱溶剂气温度分别为90和350 ℃；脱溶剂流速和锥孔气流速分别为500和70 l/h；毛细管电压为4 kv。检测方式为mrm模式。锥孔电压、碰撞能及18种抗生素其它质谱条件见表1。
3 结果与讨论
3.1 质谱条件的优化
质谱的锥孔电压、碰撞能对18种抗生素裂解有重要影响。采用流动注射分析法(fia)对目标物单独进样，毛细管电压恒定4 kv，调整锥孔电压，将18种抗生素标准溶液进行全扫描得到最大响应值的母离子， 在ms/ms模式下，调整碰撞能找到该母离子对应的子离子，以mrm模式进行分析（表1）。
表1 多反应监测模式下18种抗生素的质谱分析参数（略）
table 1 ms parameters for 18 antibiotics analysis in mrm transition
3.2 固相萃取柱的选择与串联
土壤中大量天然有机质对hplc检测影响很大。在反相萃取柱前，串联sax柱去除酸性提取液中以阴离子形式存在的腐殖酸类有机质。本实验比较了4种反相萃取柱（proelut c18，hypersep c18， hypersep pep，oasis hlb）对18种抗生素的提取效率。取1 mg/l混合标准溶液400 μl，以400 ml超纯水稀释，作为待测物。由图1可见，proelut c18柱能富集提取出氟喹诺酮类物质，但对磺胺类物质的回收率极低；hypersep c18对磺胺类物质的回收率高于proelut c18， 却不能富集提取出氟喹诺酮类物质。同是硅胶键合c18柱，不同生产商的柱子的回收率存在差异。hypersep pep的吸附剂是一种苯乙烯二乙烯基聚合物，经过键合碳酰胺使它对极性和非极性分析物均有保留，克服了传统的硅胶柱容易干柱的缺点。oasis hlb的吸附剂是由亲脂性二乙烯苯和亲水性n-乙烯基吡咯烷酮两种单体按一定比例聚合成的大孔共聚物，具有较高的吸附容量。与硅胶相比，oasis吸附剂的表面积增大2~3倍，容量因子提高。总体上，以聚合物为填料的柱子回收率高于硅胶键合c18柱。对于氟喹诺酮类和四环素类物质oasis hlb回收率明显好于hypersep pep柱，同时提取三类抗生素时oasis hlb的效果更好。
图1 4种固相萃取柱的提取效率（略）
fig.1 extraction efficiency of 4 kinds of spe columns on antibiotics
1． proelut c18；2． hypersep c18；3． hypersep pep；4． oasis hlb.
3.3 样品提取液的选择
综合考虑所检测的18种抗生素的pka[10]，参考美国epa推荐方法及相关文献[13~17]，以edta-mcilvaine (ph=4)、含50%甲醇的edta-mcilvaine (ph=4)、加入na2edta的含2%甲酸-乙腈(ph=2.5)、加入na2edta的含50%乙腈的磷酸缓冲液(ph=3)为提取液，提取200 μg/kg的加标土样，含甲醇、乙腈的提取液用超纯水稀释至400 ml后过柱。如图2所示，以edta-mcilvaine (ph=4)提取时，除土霉素外，各物质回收率都小于50%。提取液中加入有机溶剂后提取效率明显改善，使用含50%甲醇的edta-mcilvaine(ph=4)溶液提取时，磺胺类和四环素类的回收率大于50%，多数在70%~90 %之间，但是对氟喹诺酮类的提取效率非常低。含2%甲酸的乙腈溶液对三类抗生素的提取回收率在0~60%之间，且不能有效提取氟喹诺酮类物质。含50%乙腈的磷酸盐缓冲液(ph=3)溶液可以实现3类抗生素物质的同时提取，18种抗生素中回收率在56%~89%之间。
图2 不同提取液对土壤中抗生素的提取效果（略）
fig.2 efficiency of different extractions on antibiotics in soil
1． edta-mcilvaine (ph=4)；2． 含甲醇的edta-mcilvaine (mcilvaine buffer with meoh，1∶1，v/v，ph=4)；3． 含甲酸的乙腈(formic acid in acn， 1∶50，v/v，ph=2.5)；4． 50%乙腈的磷酸盐缓冲液(potassium phosphate buffer with with acn，1∶1，v/v，ph=3)。
3.4 稀释条件对回收率的影响
提取液中含有大量极性有机溶剂，直接进行spe净化，目标抗生素可能会被有机溶剂带出而无法保留在spe柱上，可通过旋转蒸发或用相对弱极性溶剂稀释后降低有机溶剂的浓度提高回收率。文献[17]指出，含50%乙腈的磷酸盐缓冲液(ph=3)用量为15 ml时，稀释至50和100 ml目标物的流失仍然很大。本实验将30 ml含50%乙腈的磷酸盐缓冲液(ph=3)的土壤提取液用超纯水稀释至400 ml后过spe柱，由图3可见， 稀释后的回收率明显提高。
图3 稀释条件对土壤中抗生素提取影响（略）
fig.3 efficiency of dilution on antibiotics in soil
1． 稀释(diluted)；2． 不稀释(undiluted).
3.5 线性范围和检出限
空白土样按照2.3节方法处理后，取适量混合标准溶液定容至1 ml，分别配制成相当于原空白土样中含5，50，100，200，500和1000 μg/kg目标物质的系列混合标准溶液，18种抗生素浓度和峰面积的线性关系很好，相关系数r＞0.99。
3.6 方法的回收率
采用饮用水源地周边不含目标抗生素的土样添加混合标准溶液，在添加水平为200和50 μg/kg时进行回收率实验，结果表明，两个浓度下的平均回收率(n=3)为55.8%~97.4%（表2）。
表2 土壤中18种抗生素的检出限及回收率(n=3) （略）
table 2 detection limits and recovery (n=3) of 18 antibiotics in soil
3.7 土壤环境样品的测定
在天津市饮用水源地周边，天津市北塘排污河及大沽排污河灌溉区各采集2个土样，按本方法检测。饮用水源地周边林地土样中未检出目标物。北塘排污河灌溉地有一个土样检出enr和sia，浓度分别为52.09和2.49 μg/kg，两个土样均检出ofl，浓度分别为23.11和19.23 μg/kg，未检出四环素类物质。大沽排污河灌溉地的一个土样中4种氟喹诺酮类浓度为28.42~119.57 μg/kg，otc和ctc浓度分别为15.61和11.65 μg/kg，7种磺胺类浓度为3.00~8.54 μg/kg。另一土样中ofl和enr浓度分别为15.61和11.65 μg/kg，otc、tc和ctc浓度分别为37.90，45.90和21.89 μg/kg，sia浓度为1.72 μg/kg。可见两个污灌区不同程度受到抗生素污染。
实验结果表明，本方法灵敏度高、检出限低且稳定性好，可以应用于土壤中抗生素含量的分析检测。
【参考文献】
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【关键词】： 胆碱 L-肉碱 乙酰基-L-肉碱 牛磺酸 人乳
【正文快照】：
1引言胆碱是哺乳动物生长过程中不可缺少的一种水溶性维生素,它在生物体内具有不可替代的基本功能。当体内胆碱不足时,表现为生长受阻、营养不良、繁殖力差和脂肪肝等[1]。牛磺酸是一种氨基磺酸,牛磺酸除了能促进大脑的正常发育外,还能增强机体的免疫力。如果牛磺酸不足,就会
【相似文献】
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2 姜北,张晓云,卢泽勤;牛磺酸的合成方法[J];广西化工;1998年02期
3 崔建兰,吕月仙;牛磺酸的研究进展[J];华北工学院学报;1998年01期
4 龚丽芬,黄慰生,谢晓兰,郑志福,胡东红;文蛤中牛磺酸的提取(Ⅰ)[J];精细化工;2003年07期
5 詹豪强;乙醇胺法化学合成牛磺酸[J];化学世界;1996年09期
6 金凤明,李桂贞,施超欧;复合氨基酸中牛磺酸的高效液相色谱分析[J];石油化工高等学校学报;2000年03期
7 李秀花,邱服斌,肖荣,杨燕;紫外分光光度法测定动物脑组织中牛磺酸含量[J];山西医药杂志;2001年03期
8 郭升平;;柱前衍生化反相HPLC法测定几种营养口服液中的牛磺酸[J];福建分析测试;1996年04期
瘦肉精是指能够促进瘦肉生长的一类药物的统称，主要包括：盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等肾上腺素受体激动剂。猪摄入瘦肉精后能加速生长、降低脂肪沉积、提高瘦肉率、提高饲料报酬，但猪食用瘦肉精后会在组织内形成残留，人类食用后直接危害人体健康。2002年农业部、卫生部和国家药品监督管理局联合发文，将盐酸克伦特罗和莱克多巴胺一同列入《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》（中华人民共和国农业部公告 第176号）。
2008年以来，国内就多次发生由于猪肉中高浓度的瘦肉精导致的中毒事件。莱克多巴胺过量摄取会引起神经兴奋，出现肌肉振颤、心慌、头疼、恶心、呕吐、甚至心脏骤停致昏迷死亡等症状，特别对心律失常、高血压、青光眼、糖尿病和甲状腺机能亢进等患者有极大危害。所以对猪肉中的莱克多巴胺含量进行检测很有必要。
1.试验部分
1.1主要仪器与试剂
1.1.1仪器
Agilent 6460高效液相色谱质谱联用仪
J2Scientific Preplinc AS4全自动固相萃取仪
1.1.2试剂
莱克多巴胺，纯度97.0%
乙酸铵（0.2mol/L）：称取7.7g乙酸铵，加水溶解并稀释至500mL，用乙酸调pH至5.2
β-葡萄糖醛苷酸酶/芳基硫酸酯酶
高氯酸（0.1mol/L）：称取14.35g 70%高氯酸，加水稀释至1000mL
氢氧化钠溶液（10mol/L）：称取400g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1000mL
甲酸水溶液：2%
甲醇-0.1%甲酸溶液（10：90）
1.2仪器工作条件
1.2.1色谱条件
色谱柱：Agilent SB-C18 50mm×2.1mm×1.8?m 流速：0.4ml/min
柱温：40℃ 进样体积：2?l 流动相：A0.1%甲酸水 B 0.1%甲酸乙腈
梯度 时间（min） %A %B
0 92 8
1 92 8
5 60 40
8 92 8
1.2.2质谱条件
干燥气温度：350℃ 干燥气流速：5L/min 雾化气压力：45psi
鞘气温度：400℃ 鞘气流速：12L/min
待测物 MRM通道（m/z） Fragmentor（V） Collision Energy（V）
莱克多巴胺 320.2>164.0 90 15
莱克多巴胺 320.2>107.1 90 25
1.3试验方法
1.3.1工作曲线
准确移取莱克多巴胺标准工作液，用流动相稀释成浓度分别为2，4，8，16，40?g/L的莱克多巴胺标准溶液，供高效液相色谱质谱分析。以莱克多巴胺为横坐标，离子峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。
1.3.2样品的预处理
准确称取2.00g测试样品于50ml离心管中，加入0.2mol/L乙酸铵溶液（pH=5.2）8.0ml，再加入β-葡萄糖醛苷酸酶/芳基硫酸酯酶40?l，涡旋混匀，于37℃下避光水浴振荡16h酶解后放置至室温，10000r/min高速离心10min，倾出上清液于另一50ml离心管内，加入0.1mol/L高氯酸溶液5ml，涡旋混匀，用高氯酸调pH至1.0，10000r/min高速离心10min后，将上清液转移至另一50ml离心管内。用10mol/L氢氧化钠溶液调pH至9.5，加入乙酸乙酯15ml，涡旋混匀，并振荡10min，5000r/min离心5min，取出上层有机相至另一50ml离心管内。再在下层水相中加入叔丁基甲醚10ml，涡旋混匀，并振荡10min，5000r/min离心5min，合并有机相，50℃下氮气吹干，用2%甲酸水溶液5ml溶解，经全自动固相萃取仪萃取、净化，最后用甲醇-0.1%甲酸溶液（10：90）0.2ml溶解，供高效液相色谱质谱联用仪测定。
1.3.3测定
将仪器调至最佳测定条件，设定标准系列各点浓度及试样质量、定容体积、稀释倍数。待仪器稳定后依次测定标准空白溶液、标准系列、样品空白溶液、样品溶液。
2.结论
采用高效液相色谱质谱法建立了猪肉中的莱克多巴胺含量的检测方法。样品中残留药物经酶解后，再高速离心去蛋白，用乙酸乙酯和叔丁基甲醚提取，固相萃取、净化，经Agilent SB-C色谱柱分离，梯度洗脱，外标法定量。经实际样品检测的试验，该方法稳定、准确，适合于肉制品中莱克多巴胺的日常检测。
（作者单位：马鞍山市产品质量监督检验所）
