时间：2023-05-30 09:38:47
开篇：写作不仅是一种记录，更是一种创造，它让我们能够捕捉那些稍纵即逝的灵感，将它们永久地定格在纸上。下面是小编精心整理的12篇诊断试剂，希望这些内容能成为您创作过程中的良师益友，陪伴您不断探索和进步。
作为专业名词，“体外诊断试剂”可能有很多人都不能准确说出它的定义，但是，如果说到献血时需要做的各项检查，包括艾滋病、乙肝检测等，或许大家就不会陌生了。北京万泰生物药业股份有限公司（以下简称万泰药业）就是这样一家从事体外诊断试剂和基因工程疫苗研发、生产和销售的创新型企业。
“体外免疫诊断试剂是用于疾病诊断检查的一类医学试剂，这类试剂主要通过血液等作为检查对象，检测其中的病毒或抗体，以作为诊断疾病的一种手段”。据万泰药业总经理邱子欣介绍，通过21年的不懈努力，万泰药业从设立之初的小规模实验室已经发展到年销售额超过4亿元的生物制药高新技术企业，并成为国内最大的输血安全诊断产品提供商和亚太地区最大的艾滋病诊断试剂生产基地。
立足，源于把握市场需求
据统计，自2003年起，万泰药业的艾滋病诊断试剂已连续9年全国市场占有率第一，拥有超过30%的市场份额。
他们的艾滋病第三代诊断试剂在2001年获国家科技进步二等奖，同时被列为年度国家重点新产品和北京市重大科技成果转化项目；也是中国性病艾滋病防治协会唯一推荐使用产品，卫生部艾滋病哨点监测指定使用试剂。
如今在艾滋病诊断试剂上风光无限的万泰药业，其实也是从“苦日子”里熬出来的。
上世纪90年代中期，万泰药业正处于起步阶段，尽管在1995年，他们就做出了国内第一个艾滋病的检测试剂盒，但日子依然过得紧巴巴。
与此同时，我国第三代艾滋病诊断试剂依赖进口，国产试剂还停留在第二代的水平。艾滋病抗体试剂研发升级的关键原料艾滋病重组抗原，长期以来完全依赖进口，导致我国艾滋病诊断试剂在灵敏度和特异度方面始终与国际主流试剂有相当大的差距。
伴随着国家对艾滋病诊断愈加重视，尤其是1995年开始，国家要求献血时必须对捐献者做艾滋病检测，艾滋病诊断试剂的市场需求被打开。
国内艾滋病诊断试剂在技术上升级换代的迫切需求和应用市场的巨大机遇都为国内企业留下了广阔的发展空间。谁能抢占先机，谁就有可能在激烈的市场竞争中脱颖而出。
“我们很幸运，企业的发展正好与国家相关产业发展同步”，邱子欣嘴里说的“幸运”，换句话讲，就是机会只眷顾有准备的人。
1999年，万泰药业和厦门大学科研人员共同研制出国内唯一一个能完全满足艾滋病毒抗体诊断试剂盒生产要求的艾滋病毒重组抗原，填补了国内的空白。
此后，双方研制出了国内第一个第三代艾滋病毒抗体诊断试剂盒，质量与国际一流产品水平一致，与国产第二代产品相比，在灵敏度和特异性上实现了质的飞跃，结束了外国公司对国内市场的垄断。同时，万泰药业将科研成果迅速转让给占我国艾滋病诊断试剂市场75%以上的10余个主要诊断试剂厂商和临床单位，使国产艾滋病毒诊断试剂盒在2001年实现全面更新换代。
但是在征服艾滋病的道路上没有止境，万泰药业于2008年推出国内首家上市的国产HIV第四代诊断试剂，进一步提升了我国的艾滋病诊断能力，使国产试剂达到国际领先水平。在2011年度全国艾滋病抗体诊断试剂临床质量评估工作中，万泰药业的艾滋病抗原抗体诊断试剂敏感性、特异性、功效率均为100%；产品性能均位居同类参评试剂榜首。
在艾滋病感染监测领域，由于我国现有的各种艾滋病诊断试剂均针对血液标本，需要进行侵袭性采样，难以满足人群监测的需求，这也是目前我国艾滋病报告感染人数远远低于实际感染人数的主要原因之一，而对各种高危人群以及正常人群进行艾滋病感染的密切监测和进行自愿咨询检测已成为我国艾滋病防治的最重要工作之一。
2009年春天，全球“甲流”爆发，我国科研人员立即研发“甲流”的快速检测试剂，当时主要是对患者的鼻腔分泌物和咽拭子进行快速检测。
用相同的原理，可不可以将这一技术应用于艾滋病的快速检验？正是这份灵感，才有了2011年万泰药业的艾滋病唾液检测试剂。
人体感染艾滋病后，一般需要一段时间才会产生抗体，1～2个月左右血液中才可检测到，这段时间就叫窗口期，但窗口期同样具有传染性。艾滋病的窗口期漏检是一个全球性难题，万泰药业的唾液检测试剂的横空出世有效缩短了窗口期的漏检时间。
这种艾滋病唾液检测试剂，由于采用先进的免疫渗滤法，操作简便、无痛，30分钟内即可观察检测结果，不会对受试者造成针刺损伤，不容易发生职业暴露，大大提高了样品的易获得性和使用的方便性，同时极大降低被检测者和医护人员受感染的风险。
2012年，万泰又推出了国内首个RIBA法的的艾滋病确证试剂，缩短了确证试验的窗口期，性能达到国外试剂的先进水平。
过硬的产品质量和优质的售后服务树立了万泰公司良好的品牌形象，赢得了客户的广泛认可。目前，以艾滋病诊断试剂为龙头，万泰药业的丙肝、戊肝等多种体外免疫诊断试剂都相继占据了国内行业的领先地位，公司的销售额从1997年的不足100万元，发展到2011年销售额3.4亿元。“2012年，我们的销售额有望达到4.5亿元，最近10余年，公司年平均复合增长率超过25%。”说到此处，邱子欣脸上满是欢喜。
创新，就要先人一步
除了艾滋病诊断试剂的系列产品外，万泰药业在戊肝病毒诊断试剂、戊型肝炎疫苗和宫颈癌疫苗等多个国家一类创新药物上取得了重大突破和丰硕的成果。
在外行看来，不论是早期的艾滋病诊断试剂，还是如今的戊肝疫苗，万泰药业的产品研发路线似乎总是剑走偏锋，在寻找冷门。
“这可能是一种误解，其实在国内的免疫诊断领域，我们很多产品也属于大众产品。比如丙肝病毒诊断试剂、乙肝病毒全套诊断试剂、甲型流感、EV71型手足口病等用于血站和医院临床的酶免及金标法快速诊断试剂，以及临床生化系列诊断试剂，都是比较领先的。”邱子欣认为，之所以有所谓的“冷门”，并不是他们刻意去寻求的研究突破点，而是万泰人在免疫诊断领域多年的深入研究后，发现了一些与其已有研究相关但尚未开展起来的领域。而他们凭借深厚的研发功底，较早地在这些陌生领域中取得骄人成绩，让别人有了这样的错觉。
“万泰药业一贯的发展，告诉我们，只有先在某一领域做‘深’，才能有日后做‘宽’产品线的基础，才能爆冷。所以，我们并不是只做冷门，但做冷门的东西，有可能做到世界第一的。”尽管不认同“万泰药业=冷门专业户”的看法，但是在邱子欣的眼中，创新确实需要先人一步，在别人还没有注意时，就要做起来。而万泰药业研发的全球首个戊肝疫苗恰恰印证了这个观点。
2012年1月11日，由厦门大学和万泰药业联合研制的“重组戊型肝炎疫苗（大肠埃希菌）”已获得国家一类新药证书和生产文号，成为世界上第一个用于预防戊型肝炎的疫苗。重组戊肝疫苗是迄今唯一使用大肠杆菌表达系统研制的病毒疫苗，它的成功研制扭转了国际医药界中“原核系统不能用于病毒疫苗研制”的传统认识。
戊肝是由戊肝病毒感染所致的急性病毒性肝炎。
一般而言，由病毒引起的肝炎目前可分为甲型、乙型、丙型、丁型和戊型5种。其中，戊肝发现最晚，在1989年之前，它一直被称作非甲非乙型肝炎。
戊肝病毒是人类了解最少，也是最复杂的致病病毒之一。在目前已经发现的至少4种基因型戊肝病毒中，1型和2型主要感染人类，3型和4型则是人畜共患病毒。
“到目前为止，公众对戊肝了解不多，事实上，戊肝流行率低于甲肝，但危害性更大，以猪作为主要宿主的戊肝病毒，与人们日常生活联系紧密。其死亡率约为1%～3%，孕妇病死率可高达20%，目前尚无有效治疗手段，而疫苗是预防戊肝的最有效手段。”据邱子欣介绍，早在14年前，万泰药业就在对其他肝炎的研究中，对戊型肝炎有了初步了解，并意识到了它的危害性。
从1998年起，每年万泰药业把诊断产品的部分利润投入戊肝疫苗的研发，经过14年艰辛研发，累计投入资金5亿元，凭着锲而不舍的精神取得了疫苗的研发成功。
“我们的戊肝疫苗采用的是基因工程技术。”邱子欣告诉记者，与传统灭活疫苗和减毒活疫苗比较，基因工程疫苗的研发不依赖于病原体的培养，因此对于大量尚未建立成熟体外培养技术的病原体也能进行疫苗的研制。在生产过程中，基因工程疫苗完全不涉及病原体，消除了由于病原体灭活不彻底或减毒不完全导致的安全性问题。不仅如此，基因工程疫苗的研发还可通过精心设计的纯化过程实现对生产过程中伴随的各类杂质的高效清除和残余成分的高度可控，降低了由于杂质导致的各类接种副反应的风险，提高了疫苗的安全性和耐受性，同时还能提高不同疫苗生产批次间的均一性。
万泰药业的戊肝疫苗是国内少有的具有原始创新型的新型疫苗，它的成功让很多疫苗企业看到了自主创新模式的希望，无疑将会给中国疫苗市场带来巨大震动。
业内人士表示，戊肝疫苗的成功上市能为中国企业摆脱现有仿制模式的助推器，增强中国市场的信心，加大自主创新投入，投身于更多创新型疫苗的研发中。这对加快我国疫苗行业转型，促进疫苗产业总体水平的提高十分有利。
近年来我国戊肝发病率逐年上升，已在成人急性肝炎中位居首位。卫生部网站的数据显示，2011年戊肝发病人数已和甲肝非常接近，但死亡人数远远超过甲肝。这种戊肝疫苗的成功上市必将成为人们的健康福音。
实力，来自科企长期互信
作为国家生物高技术产业化示范工程基地，近年来万泰药业的高速成长不是偶然的。
可以说，万泰药业对科研攻关的高度重视和对技术研发的长期投入为其持续发展不竭的能量与动力，形成了基于基础研究与产业化实践的自主创新模式。其中，万泰药业和厦门大学10多年的持续合作，为万泰药业平添了强大的技术后盾。
如前述的艾滋病抗原及诊断试剂、戊肝疫苗和重组人瘤病毒疫苗（预防宫颈癌和尖锐湿疣）等重大医药领域产品及项目，都是在双方同心协力下结出的硕果。
1993年，来北京办事的邱子欣结识了在京进修的厦门大学教授夏宁邵。当时，对艾滋病诊断研究抱有同样兴趣的两人，可能不曾想到，以后两人的合作会一直延续至今，并从个人的志同道合转变为两个单位的密切合作。
1997年，当邱子欣来到万泰药业后，将已经找到艾滋病抗原的夏宁邵实验室，推荐给公司，双方志趣相投，一拍即合。
“都是穷出身，底子都很薄，我没有多少钱给你，你的东西一开始也不见得多好。怎么办呢？大家不断磨合，越磨越好。就我们的经验而言，产学研合作中，最好不要给对方提太多的要求，关键是足够的信任，才能使合作持续下去。”邱子欣半开玩笑地道出了合作初期双方的境遇。
万泰药业2001年加盟养生堂有限公司，成为养生堂涉足制药领域的重要支柱。养生堂公司也进一步加大了对夏宁邵实验室的投入，万泰药业与厦门大学之间就形成了一个产研转化链条。
“自1997年到2007年，公司的销售收入增长了71倍。厦大与万泰合作的实验室也成长为国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心。目前，中心年科研经费达到3000万元，科研人员队伍也壮大到180多人。万泰与厦大堪称产学研成功合作的典范。”邱子欣称，现在的研究机构很多，研究成果也很多，但怎样把成果转化为市场所接受的产品，万泰有自己的独到之处。
邱子欣说：“双方已经有了良性的互动。现在的合作并不是说谁给谁投资，而是互相离不开了。他的东西没有我来做产业化，他不放心。没有他的技术，我也没有好产品。所以变成一种互相需求。我们所有合作，都不存在技术买断的形式。我们都很反对买断，因为产品的改进是无止境的，在合作过程中谁也离不开谁。项目技术过来之后，在市场销售过程中还需要改进，这时候双方还是离不开。”
好的产品赢得市场，但利益如何分配呢？这样的问题，往往在实际操作中困扰着科企合作的稳定关系。同样的问题，在邱子欣看来，产学研合作很大的一个问题就是双方没有信任。“我一旦给你东西了，你就把我甩掉了，甩掉了我的好处就不够多了，企业外的科研机构很担心这个。而企业担心的是，我花一大笔钱去买，这个东西是不是足够有价值？我们跟厦大合作为什么能够成功呢？大家把这些抛开，一起来耐心地做产品。”
正如邱子欣所说，除了充分相信对方，在医药产业中搞产学研结合，需要足够的坚韧。众所周知，药品从研发到生产的周期比较长，不像IT、房地产那么快，而且审批非常慢。夸张的说，合作双方对项目的进展可能会看不到头，难免会互相埋怨，情绪会慢慢出来，所以倒过来讲还是信任。“如果要投（资）医药或生物技术项目，就要有足够的耐心，否则你就去投房地产、投IT。”
据了解，多年的合作，万泰药业和厦门大学在成果转化方面已经有了相当丰富的经验，万泰药业专门配备了100多位科研人员与该实验室对接，专门研究成果的转化问题。“即便这样，人手仍然紧张。”邱子欣表示。
关键词：统计方法；定性分析；定量分析
Study on Statistical Methods of in Vitro Diagnostic Reagents
LI Xiao-jiang
（Review and Certification Center，Guangdong food and Drug Administration，Guangzhou 510080，Guangdong，China）
Abstract：This paper just focuses on the statistical methods used in the clinical test of in vitro diagnostic reagents. It discusses of qualitative methods and quantitative methods according to the use of conditions， limits and acceptance criteria. The qualitative methods include Four grid， Kappa and Chi-square test. The quantitative methods include the linear correlation， regression analysis，bias estimate， Bland -Altman method.
Key words：Statistical methods；Qualitative methods；Qualitative methods
临床试验是二三类体外诊断试剂除校准质控品外申请注册上市必不可少的环节，通常评估考核试剂和对比试剂或金标准方法的可比性。临床试验结果统计方法种类繁多，每种方法有一定的使用条件和局限性，在设计临床试验方案的时候，如果没有充分考虑到试验的各种因素，容易造成统计方法的选择不合适而得出错误的试验结果或者是分析不全面不充分，直接影响考核试剂的评估。因此，统计方法的选择至关重要。笔者作为体外诊断试剂产品注册技术审评员，根据多年的技术审评经验，将从定性和定量两个方面对体外诊断试剂临床试验中常用的统计方法的使用条件、限制和接受准则进行探讨。
1 定性分析
定性分析包括与金标准比对和与对比试剂比对。通常用四格表进行统计。
与金标准比较通常用敏感度（真阳性率）和特异度（真阴性率）来表示两种方法的符合性：敏感度=a/（a+c）；特异度=d/（b+d）；总符合率=（a+d）/（a+b+c+d）。而与对比试剂比较通常用阴阳性符合率来表示：阴性符合率=a/（a+c）；阳性符合率=d/（b+d）； 总符合率=（a+d）/（a+b+c+d）。虽然两种比对方法的四格表形式是一样的，但表示的意义不同。阴性符合率不等于敏感度，阳性符合率不等于特异度，两者不能混用，因为对比试剂准确度不一定100%。
定性分析除了进行四格表统计符合性之外还需进行统计学检验（可使用SPSS统计软件），通常使用Kappa检验或配对χ2检验。
Kappa是作为评价判断的一致性程度的重要指标，取值在0～1之间。Kappa≥0.75，表示两者结果的一致性较好，0.4≤Kappa
2 定量分析
2.1相关性分析 在进行相关性分析之前需进行离群值检验，离群值的个数一般不得超过2.5%，即在100个样本的临床试验中，不得出现3个离群值。如出现3个或3个以上离群值，应寻找原因，如仅仅是样本问题，则更换这些样本；如找不到原因，又影响"等效"的分析时，停止试验并通知试验申请者。
相关性分析通常用散点图来辅助分析。首先以考核试剂每次测定值（作Y轴）与相对应的对比试剂每次测定值（作X轴）作散点图；目测线性，找出线性范围，删去非线性段，如线性范围宽还可以增加分段统计。如线性范围太短，则停止评价。对线性段作相关分析，根据EP9-A2要求相关系数r>0.975[1]（或r2≥0.95），如r
2.2回归分析 回归分析比较常用的方法是直线回归分析，Deming回归和Passing-Bablok回归。三种方程的基本形式都一致，为Y=bX+a，但回归系数b的估计方法不同。传统的直线回归分析前提条件是正态分布；对照试剂应是金标准或近似（较好的），无明显的系统误差和随机误差。若两种试剂都存在误差，则不能满足最小二乘法估计的条件，可考虑Deming回归。该法考虑了两试剂的随机误差，且假定两种试剂的标准差比值恒定。Deming法适用于两个试剂的测量误差有着独立的、均数为0的正态分布，误差的方差为成比例的（在数据范围内，方差并不必须恒定的）。如异常值较多，可选用Passing-Bablok法。即任取两点确定直线，屡次反复，得到多条直线并计算斜率，而后对多个斜率值取中位数并调整。该法假定两器械随机误差遵循同一种分布，标准差比值恒定。线性回归斜率b一般推荐在0.9～1.1之间可接受。
2.3偏倚估计 按下列方程式计算平均偏倚B及试验系统与对照系统测定值差值的标准差SD。
将医学决定水平预期偏倚的可信区间与允许误差的限值相比较（允许误差推荐为小于或等于1/2CLIA88或者室间质评可接受范围）。预期偏倚可信区间小于规定的允许误差的限值，试验系统可被接受；预期偏倚可信区间大于规定的允许误差的限值， 试验系统不被接受。
2.4 Bland-Altman法 Bland-Altman法是1986年Bland和Altman提出的，并发表在Lancet杂志上[2]。该方法的基本思想是利用两组数据的均值和差值，分别以均值为横轴，差值为纵轴做散点图，计算差值的均值（d）以及差值的95%分布范围（即为一致性界限，LoA，d±1.96Sd，其中Sd为差值的标准差），认为95%的差值应位于该一致性界限范围内。分析散点的分布与一致性界限的位置关系，并且与临床上可接受的界限值相比，如果一致性界限在临床上可接受，则认为两种方法之间的一致性较好，可以互换。检测项目不同，方法学不同，临床上可接受的界限值不同，界限值还与临床预期用途有关，可参考室间质评的相关要求。当样本量较小时，由于抽样误差的影响，有时不一定满足95%的差值落在LoA范围内，这时，可以考虑LoA的可信区间（LoA CI）。计算LoA CI所对应的标准误一般为1SE（d）=Sd/，一致性界限的上、下限的标准误近似等于1.71SE（d）[3]。在临床试验统计分析中，除了用两种试剂的结果的差值反映一致性外，还可以用两种测量结果之间的比值（或差值与均值的百分比）进行Bland-Altman分析。由于检测结果的差值或比值都与两种试剂的测量值都有关，因此横坐标应为两者的均值，而不是对比试剂的测量值。
在应用Bland-Altman分析时，需要注意一定的应用条件[4]，均值和差值应相互独立，即两种试剂的测量结果应具有方差齐性，差值应服从正态分布，在测量范围内的差值不随着测量结果变化的扩大而变化。假如不满足条件，如Bland-Altman图呈喇叭状，建议通过对数转换达到要求，也可以通过对用比值来进行分析。
一致性分析时，一般不建议用配对t检验来评估两个试剂的检测结果的一致性。配对t检验的本质是对"差异"的检验，而非对"一致"的检验[4]。因为配对t检验主要是比较均数的差异，只能反映总体均数可能相同，却不能反映数据的一致性，即对系统误差敏感，却无法检出随机误差。
3 结语
体外诊断试剂临床试验应根据预期用途来选择是用定量还是定量的分析方法。但在实际的临床试验过程中，由于很多因素的影响，会出现一些不符的结果，需要查找原因，在定量分析的时候可以辅助定性分析，在定性分析的时候也可以辅助定量分析。不管是定性还是定量，统计分析方法有多种，一定要清楚每种方法使用的前提条件，否则不满足使用条件得出的结果可能没有实际意义。由于每种分析方法都有一定的局限性，可以多种分析方法联合分析，往往更全面更可靠。如在定量分析的时候，可以线性相关分析、回归分析与Bland-Altman法结合起来分析。
参考文献：
[1]NCCLS.Method comparison and bias estimation using patient samples[S].EP9-A2.Wayne，Pennsylvania：2002.
[2]萨建，定量测量结果的一致性评价及Bland_Altman法的应用[J].中国卫生统计，2011，28（4）：409-411.
关键词：ELISA法检测抗体；第四代HIV诊断试剂；灵敏性；特异性
中图分类号：R818.052 文献标识码：C 文章编号：1005-0515（2013）10-056-01
引言
目前国内有很多HIV 抗体诊断试剂种类，大部分临床科室都采用第三代诊断试剂，即目前国内流行的ELISA法检测抗体。迄今已开发研制的第四代HIV诊断试剂，它采用抗原抗体联合检测。本血站使用第三代诊断试剂盒和第四代诊断试剂盒对献血者的血液进行检测， 并对两种试剂盒的诊断效果进行对比。
1材料的选取
材料全部取自于本血站2013年1月1日到2013年4月30日的献血者，共5800份，由卫生部临检中心给出5份HIV室间质评献血者的血清以及由康彻思坦有限公司提供的室内质控血清。
2 试剂
第三代与第四代HIV诊断试剂盒分别购于英科新创试剂股份有限公司和北京万泰生物药业有限公司，均被中国药品生物制品检定所批批检定合格， 在有效期内使用，符合国家质量标准。
3方法
严格按照国家标准和试剂盒说明书，对所有血清标本同时使用第三代与第四代HIV诊断试剂进行检测， 并将初次检测为反应性的标本进行双孔复查， 任一种试剂检测结果为反应性及两种试剂为反应性的标本送湖南省疾病预防控制中心性病艾滋病检测中心确认。室间质评标本与质控血清和样本一同进行检测。
4 统计学处理
采用spss6.0统计软件进行统计学处理，两组结果的比较采用χ2 检验。
5 结果
对5800份标本采用两种试剂进行检测， 第三代HIV诊断试剂检测出7例是阳性，但用第四代试剂检测出18 例是阳性的， 其中有3例标本两种试剂均为阳性最后确认阳性， 有1例标本第四代试剂检测为阳性， 但第三代试剂检测为阴性， 最后确认为疑是阳性，电泳条带为P24抗原。
从表1 可以看出，在特异性方面，第四代试剂稍逊于第三代试剂， 这与文献报道一致。另外还有1例经第四代HIV诊断试剂检测为有反应性， 但第三代试剂检测为阴性， 经P24抗原检测为阳性， 经NAT检测为阳性， 说明此标本为窗口期样本。
从表2 看， 两种诊断试剂平行检测室间质评血清， 结果全部达标， 但对于比较弱的阳性标本， 第四代试剂反应性更灵敏些， 即第四代试剂敏感性较强。
讨论
自从1981 年，人们首次发现艾滋病，研究人员从艾滋病患者体内成功分离出其病原体，并发展了血清学抗体检测、唾液检测和尿液测检等常规使用的标准诊断项目。血清学抗体检测从20世纪上叶就得到长足的发展，到现在已经有四代试剂。第一代试剂然敏感性、特异性均较低，它采用病毒裂解抗原包被的ELISA 间接法，。第二代试剂是运用DNA 重组和多肽合成技术，避免细胞培养蛋白导致的非特异性反应，是一种重组抗原的HIV 抗体初筛试剂。1986 年， 在西非的艾滋病病人标本中又分离出另外一种被称为HIV-2的HIV。HIV-2阳性标本用HIV-1筛查试剂抗体检测常常出现漏检的。在1992 年2 月14 日，第一个HIV-1/ HIV-2抗体ELISA 试剂被FDA批准了。1994年发展了起来的第三代H IV 抗体筛查试剂提高试剂的检测敏感性，它是用双抗原夹心法， 以特异性的H IV 抗原作为酶标记物，而不是抗人IgG，这种试剂不需要将标本过度稀释来保证反应的特异性就可以检测包括IgA、I gM、IgG等不同的HIV 抗体亚类。国际上出现的第4 代HIV检测试剂， 它可同时检测HIV-1/ HIV-2两种抗体和p24 抗原， 又称为HIV 抗原/抗体诊断试剂，较第三代试剂每个测试的费用相似， 但敏感性高， 窗口期缩短。这种试剂能够检测早期的血清阳转， 缩短了检测的窗口期， 进一步提高了输血的安全性。
我国国产三代的ELISA试剂和四代HIV检测试剂起步较晚， 但是近年来随着我国科技的迅速发展。到1994 年， 卫生部检定并批准了国产二代HIV-1/ HIV-2 抗体酶标诊断试剂盒。目前国内主要流行的第三代试剂，但是有很多厂家已经推出自己研制的第四代试剂。从1998 年起，根据卫生部要求， 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心国家艾滋病参比实验室对国内的HIV诊断试剂进行临床质量评估， 为国内的HIV诊断试剂用户提供质量信息，诊断试剂进行了连续8年的试剂考评， 得出国产HIV抗体诊断试剂质量的总体水平在逐年提高的结论； 特别是从2000年开始， 国产HIV 诊断试剂从第二代ELISA 间接法筛查试剂提升到第三代双抗原夹心法筛查试剂， 敏感性和特异性已接近国外同类产品水平。目前第四代试剂可同时检测血清中HIV的p24 抗原和抗体。
结论
当今血液安全的最大隐患是HIV窗口期感染。研究表明， 使用第四代HIV试剂可使窗口期可缩短4到5天。同时第四代试剂在检测低滴度的血清标本时其反应性更强，意味着有更高的灵敏度，可以有效的避免漏检， 从而及时筛查出可疑的HIV感染者。但是第四代试剂特异性低于第三代试剂， 使得检测结果出现很多的假阳性，从而增加了工作的复杂性，可对于血液安全却是非常重要的。
参考文献
[1] 王梓，张立红.第四代与第三代HIV诊断试剂检测结果比较[J].中国误诊学杂志，2011，11（3）：577.
[2] 陈豪.预防窗口期献血者导致输血传播人类免疫缺陷病毒的方法[J].检验医学与临床，2013，10（7）：873-874.
[3] 许文燕，邱茂锋，佐合拉・吐尔地，邢，蒋岩. 第四代HIV抗原抗体酶联检测试剂缩短HIV检测窗口期的研究[J]. 中华检验医学杂志. 2007（03）
[关键词] 荧光原位杂交；产前诊断；染色体非整倍体
[中图分类号] R714.53 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2017）10-242-04
Comparative study on application of two fluorescence in situ hybridization （FISH） kits for inspecting amniotic fluid chromosomes
LIU Keling1 JIA Bei2
1.Department of Obstetrics Baoan District People's Hospital，Shenzhen 518101，China；2.Department of Obstetrics，Nanfang Hospital，Southern Medical University，Guangzhou 510512，China
[Abstract] Objective Two fluorescence in situ hybridization （FISH） kits were utilized to inspectamniotic fluid chromosomes，to compare the both kits in clinical application. Methods Two fluorescence in situ hybridization （FISH） kits from Beijing GPmedical and Abbott were utilized to inspect 30 samples of amniotic fluid chromosomes.Their differences in respect of signal intensityand hybridizing were compared. Results All samples of the 30 cases were successfully detected by the both FISH kits.The hybridizing ratethere was no significant difference （P>0.05）.Vysis kits 21/13 chromosome fluorescent hybridization signal was stronger than the GP kits’.The GP kits 18 chromosomes signal was clear and not easy to fuse. Conclusion the FISH kits from the Beijing GPmedical and Abbott Vysis can make the same prenatal diagnosis for the chromosome abnormality.
[Key words] Fluorescence in situ hybridization；Prenatal dignosis；Chromosomal aneuploid
晒庠位原位杂交技术（FISH）基于分子细胞遗传学发展的学科，始于1998年，至今在临床研究中广泛应用，在产前诊断领域更是不断完善和推广[1-3]。由于商业试剂盒应用方便、高效、稳定且专业化，临床上更青睐采用FISH商业试剂盒进行产前诊断[4]，如美国雅培Vysis公司（美国），其试剂以极高的灵敏度及可重复性在临床应用中极受欢迎。目前我国金菩嘉公司（中国）自行研发成功FISH商业试剂盒可满足产前诊断系列使用。本课题通过雅培Vysis公司和金菩嘉公司分别研制的FISH试剂盒进行临床应用比较，以便国产FISH商业试剂盒的优化，增强市场竞争力。
1 资料与方法
1.1 一般资料
随机选取2009年3～10月在南方医院行产前诊断的高危孕妇30例，年龄18～44岁，平均（30.4±5.3）岁。孕周17～37周，平均（23.1±4.4）周。产前诊断指征包括：（1）孕妇年龄≥35岁10例；（2）母血清唐氏筛查高风险15例；（3）超声筛查异常，指羊水过多、心室强光点、腹部双泡征、双侧脉络丛多回声区等共3例；（4）多项指征，符合前面任意两项或两项以上者1例；（5）IVF-ET术后且极度焦虑孕妇1例。所有孕妇均签署产前诊断知情同意书。选择这30例的液氮冻存的未培养的羊水标本，结合其核型分析进行两种FISH诊断试剂（金菩嘉及雅培Vysis）的检测。
1.2 主要试剂及仪器
1.2.1 试剂盒 采用美国 VysisFISH检测试剂盒及北京金普嘉公司FISH试剂盒。
1.2.2 仪器 采用OLYMPUS公司（BX-51）的荧光显微镜、OLYMPUS公司的显微照相机、Thermobrite原位杂交仪及VideoTest公司的FISH2.0分析软件。
[关键词] 抗体检测 胶体金 ELISA
随着养殖业的持续发展及动物防疫工作的进一步深化，对动物进行免疫接种已成为预防和控制动物疫病的重要手段。口蹄疫、猪瘟和蓝耳病是国家要求强制免疫的重大动物疫病，其抗体监测关系免疫效果的考核、合理免疫程序的建立，也是评估疫苗质量、对重大动物疫情预警能力的的可靠依据。
县级以上兽医实验室目前开展抗体监测主要使用ELISA试剂盒，其昂贵、费时和要求专业仪器和专业人员的特点，使之不适合基层推广使用。近年来，随着一系列胶体金检测产品在动物疫病检测领域的推广运用，以其操作简单、价格低廉、现场即时检测等特点，迅速获得了基层兽医站和养殖户的认可。为了解这项新技术的检测准确性和可靠性，我们用胶体金和ELISA两种试剂盒检测猪血清中的抗体水平，其结果对比如下。
一、材料与方法
1.被检血清
从全市5个规模养猪场采集并分离猪血清共27份，-20℃保存备用。
2.诊断试剂
口蹄疫合成肽ELISA试剂盒为上海优耐特生物医药有限公司生产，批号：201012004；猪瘟抗体ELISA试剂盒为北京爱德士元亨生物科技有限公司生产，批号：43220-X681；猪蓝耳病抗体ELISA试剂为北京爱德士元亨生物科技有限公司生产，批号： 40959-X061。
胶体金快速诊断试剂盒为苏州艾瑞德生物医药有限公司生产，猪口蹄疫抗体快速检测试剂盒批号：CFC005A；猪瘟抗体快速检测试剂盒批号：CFC002A；猪繁殖与呼吸综合症抗体快速检测试剂盒批号：CFC001A。
3.检测方法
3.1酶联免疫吸附试验（ELISA）严格按照说明书进行操作，以测得样品OD值大于临界值为阳性，否则为阴性。
3.2胶体金快速诊断法严格按照说明书进行操作，以检测线和对照线同时出现紫红色线为阳性，只有对照线出现紫红色线为阴性。
二、检测结果
表1 两种方法检测血清抗体结果
两种方法的检测结果经x2检验，有显著差异。
表2 样品结果分布图
三、结果分析
1.由表1可知，分别用2中诊断试剂盒测定27份血样抗体，ELISA测得的口蹄疫和蓝耳病抗体的合格率明显高于胶体金 ，而测得猪瘟抗体的合格率略低于胶体金。从两种方法的检测结果的符合率来看，猪瘟最高，为74%，口蹄疫次之，为41%，蓝耳病检测符合率只有26%。两种检测方法的结果出现了明显分离，因此，两种检测方法不具有平行相关性。
2.由表2可知，对样本个体而言，既有ELISA检测合格而胶体金不合格的样本，又有胶体金检测合格而ELISA检测不合格的样本。因此，不能以此判断两种检测方法的敏感性高低。
四、讨论
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2009.20.046
我国结核病疫情:我国属于全球结核病高负担国家之一,结核病的患病人数在世界各国中居于第2位。疫情严峻的原因与临床诊断技术和新药研制滞后、防治不力、结核杆菌与人类免疫缺陷病毒(HIV)双重感染以及耐药结核病人数的急剧增加等有关。目前诊断肺结核的主要方法是痰涂片染色镜检,结合X线胸片检查,继以结核分枝杆菌培养确认。但是,涂片检查敏感性差,分离培养结核杆菌时间过长,X线检查又往往缺乏特异性,用于基因诊断技术的PCR尚处于发展阶段。因此,建立敏感、特异、快速、低成本的快速检测方法十分重要。现对结核病的快速诊断技术概况加以综述。
结明实验:结明实验(MycoDot)是国内外使用较早、较普遍的结核抗体快速检测试验,即将脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)作为抗原固定于在电泳梳上,再将此附有抗原的电泳梳置于稀释的血清或全血中浸泡,标本中如有LAM抗体,则与梳上LAM抗原相结合,浸入显色液后,抗体金颗粒便会特异性地聚集在抗原抗体复合物上,在梳上附着抗原处形成红色圆形斑点,即为阳性。结核菌细胞壁成分中含有阿拉伯甘露糖,因此只有当患者患活动性结核病时,才会有阳性反应。健康人、既往感染者(结素试验阳性)以及卡介苗接种者都显示为阴性。在入组3个国家1602例患者的临床试验中,结明试验的总敏感性为70.2%,特异性为95.1%。在这一方法中,标本采集方便,方法简单、快速、可靠,可用肉眼判断实验结果,无需特殊实验仪器,便于基层医院推广。
结核病诊断试剂盒:结核病诊断试剂盒(FD)采用结核分枝杆菌的特异性抗原――脂阿拉伯甘露糖(LAM)为固相抗原,并以金溶胶为标记。其原理是将结核杆菌的特异性抗原LAM固定在特制载体上,当被检血清或全血中含有结核杆菌的特异性抗体(LAM-IgG)时,便与载体上的抗原结合为抗原复合物,这种复合物可与标记有“双抗”的金溶胶试剂发生作用,形成紫红色斑点。因此,试验结果呈紫红色斑点者为阳性,无紫红色斑点者为阴性。既往研究表明,FD检测阳性率为80%,特异性为94%,检测结果不受卡介苗接种的影响。FD检测简便、快速,且不需要专门技术和特殊设备,是用于结核病的诊断和鉴别诊断的一项辅助诊断方法,适用于在基层医疗单位推广使用。
斑点金标免疫渗滤法:斑点金标免疫渗滤法(DIGFA)是将固相人型结核分支杆菌蛋白衍生物(PPD)纯化抗原包被在斑点反应板上,其与体液中的抗结核分支杆菌抗体(PPD-IgG)形成复合物,胶体金标记抗人IgG或海藻硫酸多糖(SPA)与复合物结合,形成肉眼可见的红色斑点。既往研究表明,斑点金标免疫渗滤法检测各类血清678份,敏感性为76.8%,特异性为91.5%。但受结核菌或其他分枝杆菌感染及卡介苗接种等影响,也可出现交叉反应。这种方法具有简便、快速,结果易于判读,无需特殊仪器,能进行单个标本的测定,受检患者可及时得到结果等特点,适用于基层医院诊断结核菌感染和进行流行病学调查。
结核杆菌抗体胶体金法诊断试剂盒:结核杆菌抗体胶体金法诊断(TB-DOT)试剂盒是用现代生物技术提纯结核分枝杆菌特异性外膜抗原,应用斑点金免疫渗滤试验(DIGFA)原理,并用定量标准色谱卡技术制作的TB-DOT试剂盒,用于活动性肺内外结核病IgG、IgM、IgA的检测。研究显示的灵敏性和特异性分别为85.5%和93.6%,与国内学者报道灵敏性73.8%、特异性94.1%基本一致,因此,TB-DOT试剂盒是一种灵敏性和特异性较高的试剂盒。
免疫胶体金标记技术:免疫胶体金标记技术(ICS)具有快速、简便、准确的特点,有助于提高诊断,适用于活动性结核病的诊断。这种方法可用于涂片培养阴性但有临床症状的患者,鉴别肺癌与其他肺部疾患,或动态观察结核病化疗效果。但是,目前该方法检测成本较高,尚难用于结核病初筛及在基层医疗单位普及应用。
关键词：干扰素体外释放酶联免疫法；结核潜伏感染调查者；诊断分析
当前，我国大约130万人为结核病调查者，位居世界第2位。人体感染结核分枝杆菌后，病菌会潜伏在人体中。当人体免疫力降低时，则会导致结核分枝杆菌大量增殖，引发疾病。临床上对于这种疾病的检测主要以的γ-干扰素检测试剂盒（体外释放酶联免疫法）（简称WT试剂）检测为主。为了探讨干扰素体外释放酶联免疫法（TB-IGRA）在结核潜伏感染中的诊断分析。
1资料与方法
1.1一般资料 对接收调查的140例健康者资料进行分析，调查中，有15例男性，65例女性，健康者年龄在39～84岁，他们的平均年龄为（49.4±1.3）岁。两组调查者年龄、入院时间等资料经分析指标间没有统计学意义（P>0.05）。
1.2方法 调查中，对调查者进行体检，必要时对调查者进行辅助检查，如调查者的结核功能、体温等。首先，在对这些健康者检查过程中，使用美国BD公司肝素锂抗凝采血管抽取超过55 mL静脉血，然后将抽取的样本颠倒混匀3次以上，每种培养管分装1 mL，分装前需要颠倒混匀3次以上并立刻于37℃培养箱中静置培养（22±2）h。然后将样本培养（22±2）h后取出，并进行离心，收集上清液。最后使用双抗体夹心法定量检测上清液中IFN-γ的含量，并根据结果判定是否为结核分枝杆菌感染阳性。
QFT试剂新鲜全血标本采集，利用抽取的3种不同的采血管，按照灰盖（本底对照培养管）、红盖（结核特异性抗原测试培养管）、紫盖（非特异刺激原阳性对照培养管）的顺序分别采集1 mL静脉血，并立即颠倒混匀3次以上，使抗凝剂充分溶解。新鲜全血经刺激培养（22±2）h后，3离心10 min（000～5000 rpm），取上清放于新的EP管中。
PPD检测：医护人员在健康者前臂皮内注射标准PPD 0.1 mL。待72 h后，观察调查者的反应结果，并详细记录硬结平均直径（mm）。PPD
1.3统计学处理方法 实验中，对健康者检查过程中搜集和记录的数据利用SPSS13软件进行处理和分析，然后医护人员再对这些数据采用t方法进行检验，实验结果采用χ2表示。
2结果
实验中，WT试剂阳性率（25.7%）高于其他两种方法；在密切接触者中，QF试剂检出率较WT试剂高（67.8%）。由此可以看出，TB-IGRA阳性率高于PPD皮试，见表1。
两种试剂阳性符合率为81.3%[26/（26+6+0）×100%]，阴性符合率为88.9%[104/（104+13+0）×100%]，总符合率为86.7%[26+104+0）/（32+117+1）×100%]。WT试剂与QFT试剂配对分析结果无统计学差异，P>0.05，见表2。
3讨论
目前，国内对于结核潜伏感染调查者的诊断主要是根据结核菌素皮试的结果判定的，普遍认为PPD强阳性或在短期内阴性转为阳性者即为结核菌潜伏感染者。但是，P这种方法却不能区分BCG接种产生的免疫应答反应与潜伏感染产生的应答反应。肖松生等人曾经提出：利用ELISPOT法能够有效地诊断出结核潜伏感染调查者，并且这种方法目前已经被广泛使用。
首先，在检测健康人群中，WT和QFT试剂IGRA阳性率高于PPD皮试法。其阳性率分别为25.7%，21.4%和14.3%。而在密接者中，三种方法的阳性率分别为46.4%，67.8%和39.3%。由于调查范围属于体外免疫科的实验室，实验室中存放了大量的痰标本，在平时的工作中不可避免的会接触结核杆菌。即使这样，实验结果还表明，IGRA和PPD两种测试对结核潜伏感染都有用处。其次PPD结果与IGRA结果之间有相关性，当PPD检测结果为3+～4+，WT试剂阳性率60%（12/20）。PPD检测结果为阴性时，WT阳性率为18.2%（2/11）。相关研究显示，筛查结核潜伏感染可用先PPD，后IGRA的两步策略，但IGRA须在PPD检测之后的3 d内进行。
此次调查中，二者检测时的原理一样，但是两种试剂结果还是有差别。实验中，总体人群中阳性率WT试剂高于QFT试剂，在密接者中QFT试剂高于WT试剂。但总的来说，WT试剂与QFT试剂符合率良好达86.7%。QFT试剂已被国外验证在诊断结核感染及结核病方面的特异性和敏感性都很好，在本实验中选用QFT作为对照，比较其与WT试剂的差异（P>0.05）。
综述，干扰素体外释放酶联免疫法（TB-IGRA）在结核潜伏感染中检测效果较好，诊断价值要比PPD皮试高，值得推广使用[1-5]。
参考文献：
[1]肖松生，杨倩婷，蔡雄茂，等.外周血IFN-γ的检测在结核分枝杆菌潜伏感染诊断中的价值[J].临床肺科杂志，2008，（10）.
[2]李晓非，赵勤，汪亚玲，等.两种结核分枝杆菌相关γ-干扰素定量检测试剂盒检测结核分枝杆菌感染结果比较研究[J].中国防痨杂志，2011，（05）.
[3]张晶，陈心春，彭鑫，等.菌阳肺结核调查者抗结核治疗初期特异性干扰素-γ的变化[J].临床肺科杂志，2010，（09）.
[关键词] 结核分枝杆菌；基因芯片；结核病诊断
[中图分类号] R378.91+1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）01（b）-0123-03
国内每年有将近13万人因结核病死亡[1]，且有将近12万新发耐多药结核病患者，未来数年内可能出现耐药菌为主的流行态势[2]。目前，结核病诊断的标准方法主要包括分枝杆菌分离培养、抗酸菌痰涂片镜检、菌种鉴定和药敏试验等，但是其普遍存在特异性差、灵敏度低或需时长的缺点[3]，本院引进国内最新的结核诊断技术——晶芯结核分枝杆菌生物芯片诊断系统，是近年发展起来的进行大规模遗传多态性检测的新方法[4]，其应用于临床诊断结核病，提高了时效性，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
本院2013年3月1日～2013年9月30日接受诊治的结核病临床疑似病例共685例，其中男性363例，女性322例；年龄9～76岁，平均（34.51±2.28）岁；其中临床诊断结核病病例681例，包括185例痰结核菌培养阴性肺结核，157例痰结核菌培养阳性肺结核，193例结核性脑膜炎，95例结核性胸膜炎，51例骨结核。非结核分枝杆菌病4例。
1.2 试剂与仪器
Extractor 36核酸提取仪、BioMixerⅡ芯片杂交仪、Slider Washer芯片洗干仪、LuxScan 10 K-B芯片扫描仪、晶芯分枝杆菌菌种鉴定试剂盒、晶芯结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒，均购自博奥生物有限公司。
1.3 方法
1.3.1 标本的处理 以痰样本为例（其余样本同痰样本处理方法）：①向痰液中加入等体积10%NaOH，涡旋振荡，充分液化均匀，也可37℃液化30 min后再振荡；②取1 ml液化后的痰液转入1.5 ml Eppendorf管中，12 000 r/min，5 min，弃去上清；③加入1 ml生理盐水，涡旋振荡后12 000 r/min，5 min，弃去上清。
1.3.2 核酸提取 ①向处理好的标本管内加入80 μl核酸提取液，用加样器混匀后转入核酸提取管内；②用核酸快速提取仪振荡10 min，然后95℃水浴5 min。
1.3.3 PCR扩增 ①从B试剂盒取出PCR扩增试剂，自然解冻后轻摇，迅速离心后分装18 μl至八联排管中，加上盖，标上编号；②加入2 μl样本核酸溶液，用加样器吸打混匀；③上机扩增。
1.3.4 芯片杂交 ①将PCR产物置PCR仪扩增95℃变性5 min，随后立即放入冰水混合物中，骤冷冰浴3 min；②取9 μl杂交缓冲液至八联排管中，再按样品顺序加6 μl PCR产物；③准备杂交盒，将14 μl杂交混合物加入芯片点阵中，完成后且金属封条密封杂交盒；④放入杂交仪内50℃杂交2 h；⑤将芯片洗干，甩水。
1.3.5 芯片扫描结果判读 开启扫描仪，预热激光10 min，输入芯片编号，样本信息，选择样本，开始扫描，并判读结果。
2 结果
2.1 结核分枝杆菌基因芯片检测对结核病的诊断结果
本组结核菌基因检测685例临床疑似病例中，阳性患者135例，阳性率为19.7%，通过基因芯片检测结果显示，结核患者131例，非结核患者4例，阳性率为19.1%。
2.2 结核分枝杆菌基因芯片法耐药基因变异的检测结果
随机选取68例阳性患者进行耐药基因检测，通过基因芯片检测结果显示，12例患者发生基因突变，总突变率为17.6%；其中11例患者为利福平和异烟肼双重基因突变，双重基因突变率为16.2%，另1例只发生利福平基因突变；耐多药率为16.2%。利福平总突变率为17.6%，其中9例为531（C-T）位点突变，3例为526（C-T）位点突变；异烟肼总突变率为16.2%，其中7例患者为katG 315（G-C）位点突变，3例为inhA-15（C-T）位点突变，1例为katG 315（G-A）位点突变。
3 讨论
结核病严重危害人民群众的身心健康，已经成为全球共同关注的重大社会问题和公共卫生问题[5]。目前，结核病诊断的主要方法包括分枝杆菌分离培养、抗酸菌痰涂片镜检、菌种鉴定和药敏试验等，存在极易漏检、敏感性低或时效性差的问题，培养法需要4周左右才能获得结果，而药敏试验法则需要8周，耐药性不能尽早检出结果，不仅会严重延误诊断，更会引起临床治疗推迟，甚至导致治疗失败[6]，同时，也助长了耐药结核分枝杆菌的传播及流行，可能造成出现耐多药结核，从而加剧了预防和控制结核病的艰巨性，因此，临床上能够找到快速诊断结核感染和耐药结核病的新型诊断工具对结核预防控制的有效性有重大意义[7]。目前，基因芯片技术已经被应用于临床，其具有特异性强、灵敏度高、快速检测和高通量的特点，为有效预防和控制结核病提供了一个新的快速、高效、实用的分子诊断平台[8]，同时为结核病的筛查、合理用药和疫情监控提供了准确且高效的应用指导。
本院采用晶芯结核分枝杆菌生物芯片诊断系统诊断结核病，是博奥生物与结核病国家参比实验室经过对分枝杆菌菌种快速鉴定和结核耐药快速检测开展的合作研究，研制的分枝杆菌菌种鉴定试剂盒和结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒，是国内最新的结核诊断技术。与传统的检测方法相比，基因芯片法具有检测时间短和通量高的特点[9]。分枝杆菌菌种鉴定试剂盒能够快速检测结核等17种临床上多见的分枝杆菌，结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒能够快速检测利福平和异烟肼的耐药性，同时可将6～8周的常规检测时间缩减到6 h[10]，这两款试剂盒能够成功应用于临床实践，明显缩短了复杂疑难疾病的确诊时间，同时对结核耐药做到早期筛选，并可指导患者合理用药。
晶芯结核分枝杆菌的菌种鉴定和耐药基因检测采用的是DNA微阵列芯片技术，可通过对常见临床样本中的分枝杆菌核酸进行检测，快速获取临床常见致病分枝杆菌的准确种属信息。该产品主要用于结核病和非结核分枝杆菌病的辅助诊断，也可用于流行病学调查等领域，具有灵敏、准确、快捷、先进、高效的特点。
综上所述，采用晶芯结核分枝杆菌生物芯片诊断系统用于临床诊断结核病及其耐药性，能够缩短诊断时间，提高临床时效性，得到了良好的社会效益，值得推广应用。
[参考文献]
[1] 谢士达，刘永成，张凤池，等.基因芯片技术快速检测结核分枝杆菌异烟肼、利福平耐药性[J].临床肺科杂志， 2008，13（2）：147-149.
[2] 国务院办公厅.全国结核病防治规划（2011-2015年）[Z].2011-11-17.
[3] 王峰，桂静，赵广录，等.基因芯片检测结核分枝杆菌利福平异烟肼耐药性的应用评价[J].中华检验医学杂志， 2012，35（12）：1125-1129.
[4] 万逢洁，何敏，张志勇.结核菌耐药基因突变及检测方法的研究进展[J].现代预防医学，2003，30（3）：406-408.
[5] 戎奇吉，吕火祥，孙爱华.基因芯片快速检测结核分枝杆菌katG基因突变及其与异烟肼耐药相关性[J].中国共患病学报，2011，27（3）：233-237，253.
[6] 李卫彬，李新旭，张彤群，等.基因芯片检测技术检测结核分枝杆菌异烟肼和利福平耐药的实际应用效果评价[J].中华临床医师杂志（电子版），2012，6（16）：4666-4670.
[7] 白广红，李耀军.结核生物蛋白芯片技术在结核病临床诊断中的价值探讨[J].国际检验医学杂志，2011，32 （5）：597-599.
[8] 李锋，李凫坚，陈园园，等.应用DNA芯片法检测耐多药结核分枝杆菌的研究[J].医学研究杂志，2011，40（1）：115-117.
[9] 欧维正，骆科文，王燕，等.基因芯片和比例法药物敏感性试验检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性的比较研究[J].检验医学，2013，28（5）：404-407.
【关键词】 腺苷脱氨酶； 临床应用； 灵敏度 ；预后
腺苷脱氨酶（ADA）广泛分布于人体各组织中， 以胸腺、脾和其他淋巴组织中含量最高， 肝、肺、肾和骨胳肌等处含量较低。血液中ADA主要存在于红细胞、粒细胞和淋巴细胞， 其活性约为血清的40～70倍， T淋巴细胞比B淋巴细胞该酶活性更高。ADA较谷丙转氨酶（ALT）、谷氨酰转肽酶（GGT）更能反映急性肝损伤， 并有助于探测AH的残留病变和肝脏病进展。ALT恢复正常而ADA持续升高者， 常易复发或易迁延为慢性肝炎。故ADA活性测定可作为慢性肝病的筛选指标[1]。因此， 作者ADA联合检测试剂盒（自动生化型）， 进行临床验证和评价， 报告如下。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 收集正常人群、未经治疗的肝炎患者和各类非肝炎性（慢性）疾病患者的血清各300例以上。正常人群为健康体检人群标本， 采用当天生化检测的血清标本， 当天采集， 当天测定完毕；各类非肝炎性（慢性）疾病患者为门诊患者， 除外诊断明确的肝炎患者， 标本采用当天随机门诊抽血的生化血清标本， 当天测定完毕；肝炎患者标本， 为住院患者确认中已明确诊断肝炎， 且未经治疗的患者， 留取当天分离血清样品， -20℃冰箱保存， 约2周内测定。
1. 2 方法 ADA试剂盒由上海执诚生物技术有限公司提供， 实验在Olympus AU640自动生化分析仪上进行。自动化分析基本参数：Sample volume 15.0 μl；R1 volume 75 μl； R2 volume 75 μl；Wavelength pri：570 nm； method：rate；Reaction slope （+）；Measuring point： First（20）；Last（25）；Calibration Type（2AB）；Standard：C1 100 U/ml；C2 64 U/ml.
2 结果
根据检测试剂盒提供的结果判读说明， ADA结果≥18 U/ml判为阳性。观察健康体检人群、门诊患者群体和肝炎患者ADA的阳性检出率， 检测结果与统计分析见表1， 2。
通过观察正常人群、未经治疗的肝炎患者和各类非肝炎性（慢性）疾病患者的血清ADA量值变化和阳性率显示：健康体检人群组ADA检出的特异性为98.9%， 假阳性率为0.85%；肝炎患者组ADA检出的阳性率为74.23%， 假阴性率为25.77%；随机门诊患者组（排除诊断明确的肝炎患者， 可能存在急性炎症和未明确诊断的肝炎患者）ADA检出的阳性率为7.65%；对肝脏疾病的分类统计中显示：其检出的阳性率最高为肝硬化>酒精性肝病>肝癌>先天性肝病。
3 讨论
腺苷脱氨酶是一类非特异性的物质， 它并不能作为肝炎的诊断指标， 而更多的应该作为肝炎的观测指标。ADA是反映肝损伤敏感指标， 可作为肝功能常规项目之一， 肝实质损害时， 血清ADA活力升高。血清中ADA主要来源于肝脏， 因为它是肝细胞的胞浆酶， 所以任何原因造成的肝细胞损伤， 其肝细胞膜的通透性就会增强， 致使血清中的ADA酶的活性升高， 故该酶可以作为反映肝实质损伤的指标[2]。
3. 1 判断急性肝损伤及残存病变研究表明， 在急性肝炎时血清ADA活性增高， 其阳性率高于ALT和γ-谷氨酰转肽酶（γ2GT）。而且由于ADA恢复正常较迟， 较ALT、γ2GT更能正确反映急性肝实质损害， 并有助于探测急性肝炎的残存病变。但重症肝炎发生酶胆分离时， 尽管ALT不高， 而ADA常明显升高。急性肝炎后期ADA升高率高于ALT， 其恢复正常时间也较后者迟， 并与组织学恢复一致。ALT恢复正常而ADA持续升高者， 常易复发或易迁延为慢性肝炎。
3. 2 协助诊断慢性肝病在反映慢性肝损伤时ADA较ALT为优[3]。许多研究中都发现， 慢性活动性肝炎（CAH）、肝硬化患者血清中ADA值显著升高， 且较持久， 因而可判断慢性肝病的程度[4]。另外， 慢性活动性肝炎ADA活性明显高于慢性迁延性肝炎（CPH）， 因此， 检测ADA有助于CAH和CPH的鉴别诊断。
3. 3 有助于肝纤维化的诊断ADA活性差异与肝细胞损害关系不大， 与肝纤维化程度相关。肝纤维化程度增加， ADA活性增加。
本次临床验证所用的试剂盒是自动生化型， 优势力之处主要是：样品用量省， 可以在自动生化仪上编程测定， 提高了分析精密度。
临床症状和影像学检查是肝炎诊断的重要依据， 但当肝炎缺乏特殊的症侯群， 早期更无症状。各种影像学所能显示的各不相同， 所以要实现早期诊断实际上是十分困难的。作者强调诊断应从形态推进到物质， 坚信物质先于形态的观点， 才能在诊断上有所突破 。ADA在各种肝炎早期即可升高已确实无疑。但在病程中各期的变化情况可能与疾病种类有关， 尚需累积资料。
参考文献
[1] 熊立凡.临床检验基础.北京：人民卫生出版社， 2004：213-315.
[2] 徐克诚， 孟宪镛.临床肝胆病学.天津：天津科技出版社， 1987：282-283.
[3] 李延伟， 赵洪涛， 品晓霞， 等.血清腺苷脱氨酶测定对肝脏疾病的诊断价值.实用内科杂志， 1990， 10（4）：206.
【摘要】目的 探讨D一二聚体(D―D)测定在急性下肢深静脉血栓形成(DVT)诊断中的临床价值。方法 运用超声检查对94例下肢各深静脉血栓情况，并测定每一位患者血中D―D值，总结D―D值在急性下肢深静脉血栓形成诊断中的价值。结果 急性DVT患者血中D―D值明显升高。结论D―D可作为急性DVT诊断、预测及预后判断方法之一。
【关键词】 D一二聚体；静脉血栓形成
下肢深静脉血栓形成(DVT)起病急，病情重，易并发肺动脉栓塞(PE)，常可危及生命。D二聚体(D―dimer，D―D)是经凝血酶及冈子Ⅷ作用的交联纤维蛋白经纤溶酶降解后产生的终末产物，是反映体内凝血和纤溶的理想分子标志物之一。D―D对静脉血栓栓塞诊断的敏感性可达94％～99％［1］，在排除DVT和PE中，D―D的检测已获得了广泛的应用，其阴性结果对于排除VTE具有很高的价值。然而国内对D―D在DVT中的应用罕见报道，对急性DVT的诊断尚未见报道。本文通过应用乳胶凝集法检测DVT病程中D--D的变化，探讨其临床应用价值。
1临床资料
1．1病例来源
排除由于风湿、类风湿疾病或细菌性心内膜炎所致D-D升高的患者，94例均是2006年1月一2010年12月在江苏省中西医结合医院外科与脉管科住院患者，并经超声检查确诊为急性下肢深静脉血栓形成患者。男48例，女46例；年龄28～92(平均59．27±1 2．36)岁。病程1 2h至7d。发病在左下肢55例(58.51％ )，右下肢26例(27.66％ )，双下肢13例(13.83％ )。单发36例（38.29%），多发58例(61.71%)。并与50例正常对照，比较血栓形成组患者血中D-D测值变化。
1．2诊断依据诊断均符合以下条件：(1)发病急骤，患肢胀痛或剧痛，股三角区或小腿有明显压痛；(2)患肢广泛性肿胀；(3)患肢皮肤呈暗红色，温度升高；(4)患肢广泛性浅静脉怒张；(5)排除急性动脉栓塞、急性淋巴管炎、丹毒、原发性盆腔肿瘤、小腿损伤性血肿、小腿纤维组织炎等疾病；(6)结合彩超符合急性DVT诊断者。
1．3仪器与方法
1．3．1仪器及试剂 肢体检查采用彩色B超(美国产Agilent一4500型全数字化彩超，线阵变频探头8-1 2 MHz)；试剂用澳大利亚AGEN生物医学试剂公司生产的DIMERTEST 乳胶试剂盒(试剂号BD145A)。
1．3．2检测方法操作方法严格按试剂盒要求进行。
1．4统计学处理
实验数据均以x2 检验处理，应用SPSS1 0．0 ForWindows统计软件与Excel工作表。
2结果
94例急性下肢深静脉血栓形成患者血中D-D测值水平较正常对照组明显升高，差异有显著性意义（见下表）。
组别 不同D-D浓度的病例数（mg/L）
1.0 合计阳性率%
血栓组4 6 84 9495.74
正常组 50 0 0500
注：P
3讨论
D-D含量的变化可作为体内高凝状态和纤溶亢进的分子标志物之一 ［2］。D-D可用免疫学原理检测。DimerTestTM是利用针对D．dimer的高度特异性单克隆抗体DD．36B／22包被乳胶颗粒，经过乳胶凝集现象表现出来，从而产生阳性结果。其方法简便、快速(约4 min)、费用低、重复性好，无需特殊制备血浆，适于急症或基层医院需要。本组结果显示：DVT急性期内为新鲜血栓形成继发性纤溶亢进,其D-D值明显升高，这与有关文献［3］报道一致。表明血栓在机化同时纤溶持续存在，且血液高凝，新鲜血栓可能继续生成。临床上，对高度怀疑DVT，而症状和体征不明显者，可以应用D-D 进行确诊或排除。D-D可作为急性DVT诊断、预测、及预后判断方法之一，可为DVT临床研究、诊断等提供客观依据。
参考文献
［1］ RIGHINI M，PERRIERA，DE MOERLOOSE P，et a1．D―dimer forvenous thromboembolism diagnosis：20 years later［J］．J ThrombHaemost，2008，6(7)：1059―1071．
［2］ Greensberg CS， Dcvinc DV ， Mc Grac KM ，et a Z． Measuro―ment of plasmafibrin D・・dimer levels with the use or a mono-clonal antibody coupled Latex bleeding［J］．Am J Clin Pathol，1 9 8 7，87(1)：94 ―96．
［3］Shitrit D ，Heyd J，Raveh D ，et a Z． Diagnostic value of the D ―dimer test in deep vein thrombosis： improved results by anew assay method and by using discriminate levels［J］．Thmmb Res，200 1，1 02(2)：1 2 5― 1 3 1．
【关键词】血清;结核病;结核抗体
近年来随着流动人口的不断增多和爱滋病在全球大规模流行,在世界范围内结核病卷土重来,已成为人类头等传染病。检验结核抗体是结核病诊断和鉴别诊断的重要辅助方法。为了评估结核抗体快速诊断试剂盒对结核病诊断的价值,我们作了结核抗体试剂与细菌学的符合情况对比。
1.材料与方法
1.1 检测试剂。结核抗体试剂(TB-DOT)为上海奥普公司提供的澳大利亚B&J Life Science Laboratory Company产品,抗原为纯化的结核杆菌特异性外膜抗原,利用斑点免疫金渗滤试验(DIGFA)的原理。血清结核抗体检测标本量为40 ul。按试剂说明书操作:1.在检测板的反应孔中间加入2滴封闭液,等待薄膜吸入。2.取40 ul新鲜的血清标本加入反应孔中间,等待薄膜吸入。3.在反应孔中间加入6滴洗涤液,等待薄膜吸入。4.在反应孔中间加入2滴金标液,等待薄膜吸入。5. 在反应孔中间加入6滴洗涤液,等待薄膜吸入,目测结果。结核菌直接涂片为痰液直接涂片,自然干燥后“金胺O”染色,用荧光显微镜检查。结核菌培养法用改良罗氏培养基进行37℃培养8周,观察结果或用BECTEC MGIT-960仪器快培6周,观察结果。
1.2 检测对象。结核病组304例,男186例,女118例,年龄15-82岁,均来自本院,是根据X线、B超、病史诊断的肺结核住院患者;肺部其他疾病组100例均来自本院,其中肺部肿瘤71例,其他疾病(包括肺炎、支扩、慢阻肺等)29例;对照组为100例正常献血员。
2.结果
三类疾病组测定结果(见表1)
三类方法测定肺结核组结果分析见表2)
3.讨论
多年来诊断结核病的主要方法仍是痰涂片染色镜检结合X线胸片检查以及细菌培养等。尤其是细菌学的检查一直作为肺结核诊断的金标准,其中涂片法特异性高,但敏感性差,分离培养结核分枝杆菌由于结核菌自身生长的速度缓慢,病人少痰、无痰、留取痰液方法不当等多种原因,使痰结核菌的阳性率很难进一步提高[1],使一部分痰菌阴性的肺结核诊断较为困难。
表1说明:肺结核患者的血清用TB-DOT检测的结核抗体阳性率为74.0%,而在肺部肿瘤组阳性率仅为8.4%,肺部其他疾病组阳性率仅为10.3%0在肺结核组中,血清结核抗体的敏感性为74.0%;在肺部肿瘤组中血清结核抗体的特异性为91.6%,在肺部其他疾病组中血清结核抗体的特异性为89.7%、在对照组中血清结核抗体的特异性为91.0%,这四组结果之间有显著差异性。说明了结核抗体的检测可作为肺结核和其他肺部疾病的重要鉴别指标之一。本文使用的结核抗体试剂盒是以结核分枝杆菌阿拉伯糖甘露糖脂(LAM)为抗原,用葡萄糖A蛋白胶体金缀合物作标记物,检测血清中相应的结核抗体,方法简便、快速,敏感性高,试剂盒中所用抗原的特异性是测试结果好坏的决定性因素[2]。
肺结核的实验室诊断方法众多,各自的敏感性和特异性也相差较大。因此选用合理的检测方法相当重要[3]。本文进行了血清结核抗体、痰液直接涂片找抗酸杆菌和结核菌培养三种方法的比较。表2说明:在179例痰菌阳性患者,三种测定方法均为阳性116例(84.6%),阴性63(35.2%)为一种或两种方法阳性而其他方法阴性;在125例痰菌阴性患者中TB-Ab阳性数为75例(60.0%);在30例涂片(+)培养(-)和12例涂片(-)培养(+)中TB-Ab阳性率分别为83.3%和75.0%;而在137例涂片培养均(+)的患者中TB-Ab阳性数116(84.6%)。上述三种方法单一检测时均存在一定数量的漏检率,而二种方法联合检测时阳性率可达75.0% ― 83.3%,三种方法联合检测时阳性率可达84.6%,说明了应用二种或二种以上方法联合检测能显著提高痰菌阴性肺结核的阳性检出率[4]。
涂阴肺结核的诊断是临床上常遇到的问题。当病人肺部出现异常阴影怀疑肺结核,而痰涂片镜检抗酸杆菌阴性时,除多次查痰以及等待痰结核菌培养结果外,为了肺癌及其他肺部疾病的鉴别,有时需进行纤维支气管镜检查及肺活检,以获得病原学及病理学证据。因此,血清学诊断可为涂阴肺结核的诊断提供有益的参考资料[5]。表3说明:血清结核抗体对痰菌阳性肺结核的敏感性为83.8%,特异性为91.0%,阳性预期值为94.3%,阴性预期值为75.8%。血清结核抗体对痰菌阴性肺结核的敏感性为60.0%,特异性为91.0%,阳性预期值为89.3%,阴性预期值为64.5%。本文中125例痰菌阴性的肺结核患者中血清结核抗体阳性的为75例,阳性率可达60%。说明了在这些病人的鉴别诊断中结核抗体起着举足轻重的作用。本法操作简单,结果直观,无论单一或批量样品均可随时检测,其次金标记物较稳定,冻干后可在室温下长期保存,反应快速,诊断率高,特别适合结核分枝杆菌阴性及肺外结核的诊断,是一种辅助临床诊断结核病的实用有效的免疫学方法之一,值得推广应用。但不令人满意的是无论肺部其他疾病组还是肺部肿瘤组,假阳性率分别为10.3%和8.4%,是否与直接检测未被稀释的血清,易于引起非特异性吸附有关,值得进一步研究。
参考文献
[1] 高梦秋田苗不同结核分枝杆菌抗原对结核病的诊断价值.中华结核和呼吸杂志,1999,22(10):613-614.
[2] 鲁启超,董云秋,徐茹,等.血清抗结核分支杆菌抗体对结核病的诊断价值.中华结核和呼吸杂志,1998,21:82-84.
[3] 秦光祖阎萍三指标联合检测对痰涂片阴性痰结核诊断价值探讨.中国防痨杂志,1997,(2):94-96.
[4] 靳安佳李来娣胡忠义三指标联合检测对活动性肺结核诊断价值探讨,1999,(2):142.
资料与方法
研究对象：3246份标本均来自本市2011年1月～2011年12月的性病监测人群。
试剂：ELISA试剂盒，TRUST试剂盒，TPPA试剂盒。所有试剂均在有效期内。
主要检测仪器：TP-ELISA法使用的洗板机；酶标仪。
方法：采用ELISA及TRUST两种方法同时对性病监测人群标本进行梅毒螺旋体血清学检测，两种方法有一种为阳性的标本采用梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)法确证。检测过程严格按照试剂盒说明书进行操作。
结果
TP-ELISA法和TRUST法的检测结果：3246份标本经TP-ELISA(198份阳性，阳性率6.1%)和TRUST法(169份阳性，阳性率5.2%)筛查，221份(TP-ELISA和TRUST法检测有一种为阳性即认定为筛查阳性)筛查结果为阳性，见表1。
两种梅毒血清学实验结果比较：221份筛查结果为阳性的标本经TPPA法确证，其中阳性197份，阴性24份。以TPPA法为标准，对TP-ELISA法和TRUST法筛选的阳性血清进行分析。197例确证(TPPA法)阳性标本经TP-ELISA法检测196例结果为阳性，敏感性99.5%；TP-ELISA法检出的198例阳性标本中2例经TPPA法确证为阴性，特异性92.3%。197例确证(TPPA法)阳性标本经TRUST法检测148例结果为阳性，敏感性80.1%；TRUST法检出的169例阳性标本中21例经TPPA法确证为阴性，特异性47.3%。TP-ELISA法和TRUST法两种方法同为阳性的146例标本，经确证均为阳性。见表2。
经TPPA法确证为梅毒阳性的病例中有3例经调查无梅毒临床症状，无不洁性生活史和既往史，排除梅毒诊断，已经确诊为其他疾病。
讨论
TP-ELISA法是通过基因工程途径生产重组TP蛋白酶多肽作为抗原，检TP重组抗原包被在微孔测定板上，测定患者的特异性TP抗体。该方法稳定性好，操作规范，能检出梅毒特异性IgM、IgG。结果判断客观，容易实现自动化和标准化测量。本次试验出现2例假阳性和1例假阴性，可能与梅毒螺旋体抗原纯化不够和基因位点不同有关。虽然可以通过TPPA法排除部分的假阳性，但TP-ELISA法和TPPA法均存在假阳性的问题［1］。
TRUST法检测的是非特异性抗心磷脂抗体，感染发病过程中，一般在硬下疳出现4周之后才能检出。梅毒在治疗过程中，此类抗体滴度逐渐下降，治愈后转阴。该方法特异性较低，可发生技术性假阳性和生物学假阳性。本次调查结果与资料报道一致。因此在临床诊断中对于老年人及炎症等患者，往往可以通过TRUST检测滴度小于1:8来排除梅毒诊断。而癌症及肿瘤患者由于存在高低度的特点，易引起误诊。
综上所述，梅毒血清学试验虽然对梅毒的诊断有很大价值，但也存在一定的假阳性和假阴性。梅毒的血清学诊断程序应该为首先排除原发病，再同时进行TRUST法和TP-ELISA法检测。如两种方法均为阳性可进行抗梅毒治疗；如TP-ELISA法阳性而TRUST法阴性，可进行随访，还要结合病史、体检结果及其他检验结果进行综合分析后作出诊断，以免发生误诊。
