时间：2023-05-30 10:43:24
开篇：写作不仅是一种记录，更是一种创造，它让我们能够捕捉那些稍纵即逝的灵感，将它们永久地定格在纸上。下面是小编精心整理的12篇木瓜蛋白酶，希望这些内容能成为您创作过程中的良师益友，陪伴您不断探索和进步。
【摘要】
目的 制备一种可溶性固定化木瓜蛋白酶并对其部分酶学性质进行研究。方法 将木瓜蛋白酶偶联在亲水性高分子聚合物羧甲基纤维素醋酸琥珀酸酯（AS-L）上制备得到水溶性固定化木瓜蛋白酶。在相同的条件下测定游离的木瓜蛋白酶和水溶性固定化木瓜蛋白酶的活力，得到两种状态的酶的最适作用pH值和最适作用温度，再于它们各自的最适条件下测定活力，得到各自的Km值；在相同的条件下测定两种状态的酶的热稳定性、酸碱稳定性、低温稳定性和回收稳定性。结果 游离木瓜蛋白酶和可溶性固定化木瓜蛋白酶的最适作用pH值分别为6.0和5.0，最适作用温度分别为60℃和70℃，Km值分别为2.53、3.07mg·ml-1；可溶性固定化木瓜蛋白酶在60℃条件下，保温12h，仍有62%的活性；在4℃条件下，30d后活性保留达90%以上；在pH6.0时稳定性最好，在pH4.0～7.0范围内也比较稳定（相对活性＞80%）。结论 可溶性固定化木瓜蛋白酶能够在pH5.5以上的溶液中完全溶解，最适作用pH值范围变窄，最适作用温度和Km值升高；热稳定性和酸碱稳定性均明显增强。
【关键词】 可溶性固定化酶；木瓜蛋白酶；酶学性质
Abstract：Objective To prepare a soluble immobilized papain and determine its enzymatic properties.Methods The soluble immobilized papain was obtained by conjugating the papain with the hydrophilic high molecular polymer carboxylmethylcellulose acetic succinate.Under the same condition，the activities of immobilized and soluble papains were determined to conclude their optimum pH and temperature，then under these respective optimum conditions，their activities were determined to conclude their Km value.At the same time，the thermodynamic stability，the acid-base stability，the low temperature stability and the operational stability were respectively detected.Results The optimun pH values of soluble and immobilized papain were 6.0 and 5.0.Their optimum temperature were 60℃ and 70℃.Their Km values were 2.53 and 3.07mg·ml-1.Under 60℃，after 12 hours the relative activity of immobilized papain was 62%.Under 4℃，after 30 days the relative activity was still over 90%.Under the pH 6.0，after 72 hours the activity of immobilized papain didn't decrease，and betweeen pH 4.0 and 7.0 its stability was high(relative activity was over 80%).Conclusion Soluble immobilized papain can fully solubilize above the pH 5.5.The optimum pH range of papain was narrow，and its optimum temperature and Km value were all higher than before.Its thermodynamtic stability and the acid-base stability were also strengthened.
Key words：Soluble immobilized enzyme;papain;enzymatic property
木瓜蛋白酶［EC3.4.22.2］是一种重要的生化试剂。木瓜蛋白酶具有稳定性好、水解催化活性高等特点，使其在食品、医药、纺织等工业生产中有着广泛的用途。近年来关于固定化木瓜蛋白酶的报道较多，但是研究主要集中在制备不溶性的固定化酶［1，2，3］。传统方法制备得到的不溶性固定化酶具有稳定性好和回收方便等优点，但是在面对难溶性底物和高粘度底物溶液时，应用却大大受限，催化效率低下。为此，本文将木瓜蛋白酶通过共价键固定在亲水性高分子载体AS－L上，制备得到了可以溶解于反应体系的可溶性固定化木瓜蛋白酶，通过游离酶和固定化酶若干性质的比较，为可溶性固定化木瓜蛋白酶在医药生产中的应用建立了技术基础。
1 材料与方法成
1.1 材料
木瓜蛋白酶（Sigama公司），羧甲基纤维素醋酸琥珀酸酯（AS-L，日本信越株式会社），1－乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳二亚胺（EDC，上海东风生物技术有限公司），牛血清白蛋白（成都科龙化工试剂厂），考马氏亮兰G250（上海东风生化试剂公司），壳聚糖（上海伯奥生物科技有限公司，脱乙酰度≥90％）。其余试剂均为分析纯。
1.2 方法
1.2.1 蛋白质含量测定 参考文献方法［4］，采用Bradford法。
1.2.2 木瓜蛋白酶活力测定 参考文献方法［5］，1个酶活力单位（U）定义为40℃时，单位时间内水解1mg牛血清白蛋白所需要的酶量。
1.2.3 可溶性固定化酶（SIP）的制备 参考文献方法［6］，在磁力搅拌下向20ml木瓜蛋白酶溶液（500μg/ml，pH6.0～6.5）中滴加入一定量的10％EDC溶液和AS-L溶液，10℃～15℃温度下反应一段时间后，调节溶液pH4.0左右，离心收集沉淀，用柠檬酸钠缓冲液（0.02M，pH4.0）洗涤后，离心收集沉淀。沉淀溶于PBS缓冲液（0.02M，pH6.0），定容至100ml即得SIP溶液。
1.2.4 可溶性固定化木瓜蛋白酶（SIP）的酸碱溶解性 调节SIP溶液pH，3000rpm离心后收集上清液，测定其溶液280nm处吸光度值，计算其相对溶解度。
1.2.5 可溶性固定化木瓜蛋白酶（SIP）的催化特性1.2.5.1 最适作用pH值 分别取一定量游离木瓜蛋白酶溶液（100μg/ml，pH6.0）和SIP溶液，加入到5.0ml pH为5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0等6种不同pH的缓冲溶液（0.2M）中，40℃测定其活力，计算游离木瓜蛋白酶和SIP在各种pH条件下的相对活力。
1.2.5.2 最适作用温度 分别取一定量上述两种酶液，在30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃温度下，测定其活力，计算两者在各个温度下的相对活力。
1.2.5.3 Km值 取上述两种酶液，在最适反应条件下，测定不同浓度的酶活力，可溶性胰蛋白酶的测定条件相同，作双倒数图，计算Km值。
1.2.6 可溶性固定化木瓜蛋白酶（SIP）的稳定性
1.2.6.1 热稳定性 取上述两种酶液，在PBS缓冲液中，60℃下分别保温1h、2h、4h、6h、8h、12h、，测定各个时间段的酶活性，以0h的酶活性为100%，计算各个时间段的相对活性。
1.2.6.2 酸碱稳定性 称取一定量木瓜蛋白酶和SIP，置于不同的pH的缓冲液（4.0～9.0）中，4℃下保存72h，测定各个pH下的酶活性，以保存前pH6.0酶溶液的酶活性为100%，计算各个pH下酶的相对活性。
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1.2.6.3 低温稳定性 将上述SIP酶液置于4℃的冰箱中储存，分别于0d、5d、15d、20d、25d、30d测定其活性，以0d的酶活性为100%，计算不同时间的相对酶活性。
1.2.6.4 操作稳定性 将SIP溶液按1.4进行10次沉淀、溶解的回收操作，测定每次SIP溶解后的溶液总酶活力。分别以固定化操作前总酶活力为100％，计算每次的酶活力回收率。
2 结果
2.1 可溶性固定化木瓜蛋白酶（SIP）的酸碱溶解性
如图1，结果表明SIP在pH5.0以上能够完全溶解，在pH4.0左右基本不能溶解。利用此性质，可以使SIP在最适反应pH条件下处于溶解状态，使整个反应体系为均相，能够大大提高催化反应效率。同时利用调节pH的方式能够方便的对其进行回收。
2.2 可溶性固定化木瓜蛋白酶（SIP）的催化特性
2.2.1 最适作用pH值 结果见图2，游离木瓜蛋白酶的最适作用pH为6.0，而可溶性固定化木瓜蛋白酶则是pH5.0。且从图上可以看出，pH偏酸时，可溶性固定化酶的活力明显要高于游离酶。这主要是因为木瓜蛋白酶受到固定化载体AS－L上大量负电荷的影响，使得酶反应的表现pH向酸性方向移动，使得可溶性固定化木瓜蛋白酶在低pH下表现出较强的催化活性。
2.2.2 最适作用温度 结果见图3，游离木瓜蛋白酶的最适作用温度为60℃，而可溶性固定化木瓜蛋白酶则是70℃。且从图上可以看出，温度超过最适作用温度时，可溶性固定化木瓜蛋白酶活力降低速度明显要低于游离酶，这主要是大分子载体的保护作用。
2.2.3 Km值 结果见图4，可溶性固定化木瓜蛋白酶的Km值为3.07mg/ml，而游离酶则为2.53mg/ml。两者很接近，显示可溶性固定化木瓜蛋白酶的催化作用较难溶性固定化酶更加接近游离酶。
2.3 可溶性固定化木瓜蛋白酶（SIP）的稳定性
2.3.1 热稳定性 结果见图5，可知可溶性固定化木瓜蛋白酶的热稳定性要优于游离酶，60℃保温12h后仍然有62％的活性。
2.3.2 酸碱稳定性 结果见图6，可知可溶性固定化木瓜蛋白酶的酸碱稳定性优于游离酶。它与传统难溶性固定化酶的不同在于，两者变化曲线类似，均在pH6.0处最为稳定，这可能是因为两者溶解于缓冲液中，酶分子能够充分接触缓冲液使得两者的变化曲线类似，但是由于载体大分子的保护作用，可溶性固定化木瓜蛋白酶对pH变化的适应性较强，在pH4.0～7.0范围内较为稳定。
2.3.3 低温稳定性 结果见图7，可溶性固定化木瓜蛋白酶有较好的低温稳定性。30d活性保留95％。
2.3.4 回收稳定性 结果见图8，可溶性固定化木瓜蛋白酶有着较好的操作稳定性。在制备后第1次回收（即第2次离心－溶解）时，活力会显著下降，这可能是因为一些游离酶没有通过共价键与载体相连，而是吸附或者包裹在载体中了，沉淀－溶解操作时脱离载体进入上清液的原因。
3 讨论
在反应中使用游离酶导致产品易污染且酶难以重复使用，因而发展了固定化酶技术。传统的固定化酶是将游离酶通过物理或化学方法固定在难溶性载体上制得。这种固定化酶几乎不溶于反应体系，在工业上，能实现酶的反复利用和酶、原料、产物三者间的有效分离，从而简化分离工艺及设备，缩短生产周期，降低生产成本。但是同时由于其不溶于反应体系，使得酶催化反应仅限于固定化酶与底物溶液的接触面上，形成非均相反应，导致固定化酶的催化效率远远低于游离酶。现在有报道提出了柔性固定化酶和定向固定化的概念［3，7］，能够提高难溶性固定化酶制备时的活力回收和催化活性，但是面对难溶性底物或者底物溶液粘度等情况时，难溶性的固定化酶应用依然受到极大限制。
在催化效率方面，本研究制备得到的可溶性固定化酶接近于游离酶。因其能够在反应体系最适pH下处于溶解状态，使得整个反应体系处于均相体系，酶与底物接触几率较固液两相反应体系大大提高。同时由于处于液体溶解状态，载体上的酶可以自由旋转，活性中心能够充分暴露，也增加了酶的催化效率。因此，可溶性固定化酶的催化效率优于传统的难溶性固定化酶。
在稳定性方面，本研究制备得到的可溶性固定化酶接近于难溶性固定化酶。因为酶与大分子载体相连后，处于大分子载体的屏蔽保护下，其稳定性较游离酶仍然大大提高了。在回收操作方面，可溶性固定化木瓜蛋白酶能够通过调节溶液pH而回收，一般的水解产物小分子不会因此沉淀，因此其回收操作也较为方便。
总的来说，可溶性固定化木瓜蛋白酶兼具游离木瓜蛋白酶高催化活性和难溶性固定化酶高稳定及便于回收的特点，在工业应用上有着广阔的前景。
参考文献
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［5］周慧，鲁治斌，齐杰，等.蛋白水解酶活力测定新方法［J］.生物化学杂志.1994，10(5):630-632.
［6］蒋中华，张津辉.生物分子固定化技术及应用（M）.北京：化学工业出版社，1998.
关键词 鱼鳞；明胶；酶解产物；生物活性
中图分类号 TS20 文献标识码 A 文章编号 1673-9671-(2012)062-0228-01
鱼鳞是有鳞鱼加工的主要副产品之一，占鱼体重量的1%-5%。目前对鱼鳞的开发利用主要有以下几个方面：提取鱼鳞胶，作为食品、化妆品等原材料，具有抗氧化和降低血压、降低血液总胆固醇、抗衰老等功效；制备鱼鳞水解液，除水解出大量的氨基酸外还会产生具有特定功能的肽；提取鱼银，作为一种昂贵的生物试剂，用于珍珠装饰业和油漆制造业；低值淡水鱼的鱼鳞可用来开发鱼鳞凉粉、鱼鳞冻膏、干制鱼鳞等食品，制作成各种工艺品；提取卵磷脂；提取鸟嘌呤，用于治疗白血病。
1 材料与仪器
1.1 实验材料
冷冻罗非鱼鱼鳞；木瓜蛋白酶、胰蛋白酶；胃蛋白酶；酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶。
1.2 实验仪器
真空泵、旋转蒸发器；紫外可见分光光度计；冷冻干燥机；氨基酸自动分析仪；精密增力电动搅拌器
2 实验方法
2.1 鱼鳞明胶提取
鱼鳞50.00 g按照设定的提取时间、温度、液料比提取，经铁筛过滤，滤液用105℃干燥，得到明胶。
2.2 明胶酶解产物活性研究
2.2.1 明胶的酶解
不同蛋白酶对同一底物的水解效果不同，本实验选用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶分别对明胶进行水解。
2.2.2 抗氧化活性的测定
1）羟自由基清除作用。试管中依此加入硫酸亚铁1mL，水杨酸-乙醇1 mL，样品1 mL，H2O2 1 mL，将混合液在37℃水浴锅中反应30 min，取出后用分光光度计在510 nm波长下测定吸光值。
计算公式为：清除率I（%）=[1-（As-Ao）/Ac ]×100
2）DPPH自由基清除力。试管中加入4 mL样品，1 mLDPPH-乙醇溶液，充分震荡后暗室反应30min，用分光光度计在517 nm波长下测定吸光值。（不加样品加蒸馏水为空白对照，以100 μg/ml的VC作阳性对照）
计算公式为：DPPH自由基清除率I（%）=（Ac-As）/Ac×100
2.2.3 血管紧张素I转换酶抑制活性测定
取5ul样品加入15 ul的ACE酶（37℃ 5 min）后，加入25 ulHHL（三肽马尿酰-组氨酸-亮氨酸）（37℃ 25 min），再加入0.1%三氟乙酸（TFA）10 ul于16500×g的速度4℃离心20 min后，取上清液在228 nm处紫外光检测条件下检测马尿酸的峰面积。（以缓冲液替代样品作为空白对照）
计算公式为：抑制率I（%）=（Ac- As）/Ac×100%
2.2.4 α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定
抑制剂活力测定：根据Tremblay等的方法测定AG的活性，即以pNPG为底物，0.5 mol/L碳酸钠溶液为终止液。在37℃，pH6.8的条件下反应，用酶标仪在405 nm波长处比色测定。
计算公式为：抑制率I（%）=1-[（As- AB）/Ac×100%]
3 结果与讨论
3.1 抗氧化活性的测定
3.1.1 羟自由基清除作用
六种蛋白酶水解液中，胰蛋白酶水解液和碱性蛋白酶水解液的羟自由基清除力较强分别为76.7%和76.0%，甚至高于VC的65.6%；其次为中性蛋白酶水解液、酸性蛋白酶水解液和胃蛋白酶水解液；而木瓜蛋白酶水解液清除率仅为6.8%。
3.1.2 DPPH自由基清除力
六种蛋白酶水解液中，碱性蛋白酶水解液的DPPH自由基清除力最强为42.2%，低于阳性对照VC的47.7%，其次为胃蛋白酶水解液30.8%和酸性蛋白酶水解液25.6%，再次为胰蛋白酶水解液16.3%和木瓜蛋白酶水解液10.9。中性蛋白酶对DPPH自由基没有清除能力。
3.2 血管紧张素I转换酶抑制活性测定
六种蛋白酶水解液中，酸性蛋白酶水解液的ACE抑制率最高为71.7%，其次为木瓜蛋白酶水解液68.9%和碱性蛋白酶水解液68.7%，再次为胰蛋白酶水解液63.9%和中性蛋白酶水解液61.5%，ACE抑制率最低的是胃蛋白酶水解液仅为0.78%。
3.3 α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定
六种蛋白酶水解液对AG活性有截然不同的作用。酸性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶对AG有抑制作用，其中胃蛋白酶水解液的抑制率为67.10%，对AG的抑制作用最强。而中性蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶明胶水解液对AG没有抑制作用。
4 结论
六种不同的酶（酸性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶）水解鱼鳞明胶，对其生物活性进行比较。其中胰蛋白酶水解液和碱性蛋白酶水解液的羟自由基清除力较强分别为76.7%和76.0%，高于VC的65.6%；碱性蛋白酶水解液的DPPH自由基清除力最强42.4%，但不及VC；六种蛋白酶水解液中酸性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶对AG活性有抑制作用，其中胃蛋白酶水解液的抑制作用最强为67.10%；六种酶水解液均有ACE抑制作用，酸性蛋白酶水解液的ACE抑制率最高71.7%。
参考文献
[1]钟朝辉,李春美,梁晋鄂等.鱼鳞胶原蛋白提取工艺的优化[J].食品科学,2006,27(07):162-166.
[2]刘庆慧,王彩理,刘丛力.鱼鳞胶原蛋白研究[J].海洋水产研究,2000.
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[3]张俊杰,曾庆孝.鱼鳞的开发利用前景[J].中国水产,2004,5:74-75.
[4]吴继魁,张俊玲.草鱼鱼鳞中提取卵磷脂的最佳工艺[J].上海水产大学学报2005,14(4):428-431.
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（来源：文章屋网 ）
1 材料与方法
1.1主要材料及试剂
贻贝购自浙江省舟山市南珍市场;胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、碳酸钠及氢氧化钠等购自北京亚太恒信生物科技有限公司。
1.2主要仪器
德国Sart0rius AG公司BSAl24S型电子天平;上海博迅实业有限公司医疗设备厂SSW型微电脑电热恒温槽;上海标本模型厂DS-l型高速组织捣碎机;日本HITACHI公司CFl6RXII高速冷冻离心机;上海洪纪仪器设备有限公司ATN-300自动凯氏定氮仪以及索氏脂肪抽提器、电热恒温鼓风干燥箱、马福炉、坩埚等。
1.3实验方法
酶活力测定F0lin酚法;
总氮量测定凯氏定氮法测定;
水解度用凯氏定氮法测定上清液和酶解液中蛋白质的含量,水解度公式为:水解度(%):上清液中蛋白质含量/酶解液中蛋白质总量×100%;蛋白质回收率(%)=酶解液中的蛋白质含量/贻贝中蛋白质总量×100。
脂肪测定索氏提取法;
水分测定常压干燥法;
灰分的测定灼烧称重法;
2 工艺流程
贻贝肉匀浆加酶水解灭酶脱苦脱腥抽滤水解液调等电点离心干燥。
3 工艺关键控制点
3.1选酶 确定所使用的酶及该酶进行水解试验最适用酶量、pH、时间、温度条件。
3.2灭酶 90℃条件下水浴加热15min,使灭活酶的同时起到一定的杀菌效果。
3.3脱苦脱腥 用硅藻土对滤液脱色除臭,抽滤得滤液。
3.4调配水解液 用酸滴定水解液,达到等电点时,蛋白质呈絮状沉淀析出。
3.5离心取蛋白 10000r/min离心15min后去除上清液,得到贻贝蛋白质。
3.6干燥制粉 真空冷冻干燥得到蛋白粉成品。
4 结果与讨论
4.1原料一般营养成分分析
贻贝贝肉一般营养成分分析结果见表1。原料水分含量最高,达80.47%;灰分含量最底1.16%。根据对贻贝成分分析,对其加工利用时,主要考虑蛋白质的利用率。鉴于贻贝蛋白质含量为12.11%,可以利用其加工成蛋白粉。在加工蛋白粉时,选择合适的酶进行水解液的制备是关键,从而在一定程度上可以提高经济效益。
4.2酶种选择
称取贻贝肉63克,放于锥形瓶中加入水126mL,使肉:水=1:2,摇匀加盐酸或氢氧化钠溶液调pH值。选择木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶作为水解用酶。分别在各种酶在合适条件下对原料分别进行水解,以水解度和蛋白质回收率作为评价指标,水解效果见表2。并进行感官评价见表3。
由表2可知,对于同一种蛋白质,采用不同的蛋白酶,由于酶本身的特性不同,酶水解的位点也不尽相同,使得水解效果不一。由试验知道,随着时间的变化,蛋白质水解度不断增加,到达一定时间后增加缓慢,且苦腥味加重。比较可知,中性蛋白酶的水解效果相对较为理想,胃蛋白酶与木瓜蛋白酶水解效果都不佳。同时,中性蛋白酶由微生物发酵制得,价格相对比较便宜。则选择中性蛋白酶水解贻贝较为合适。
由表2可知,木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶在酶解适宜条件下进行水解试验时,中性蛋白酶在其最佳酶解条件下水解效果最好。因此,选择中性蛋白酶作为实验用酶。
4.3中性蛋白酶适宜条件的确定
4.3.1水解时间的选择
采用中性蛋白酶在酶解初期的l h内,酶解反应速率最大,水解率达到26%左右,之后水解率不断增加,3 h后,水解效果增加不明显,反映基本达到平衡。为了获得较好的水解效果,但同时也考虑到水解时间,本试验选择水解时间为4h,见图1。
4.3.2温度的选择
在E/S=4000 U/g,pH=7,固液比为1:2,温度为40、50、55℃时进行酶解(图2)。由图2可看出,反应在第4h后,最终水解度开始随温度的升高而增大。而55%条件下,最终水解度反而随温度升高而减小。因此,中性蛋白酶的酶解适宜温度在50%为宜。
4.3.3pH的选择
在E/S=4000 U/g,固液比为1:2,温度为50℃的条件下,分别将pH值调整为6.5、7.0、7.5时,水解度也不同(图3)。图3表明,当pH降低时,水解效果不佳,水解率较低。而pH=7.5时,酶水解速率最大,可见中性蛋白酶水解翡翠贻贝的最适pH=7.5。
4.3.4酶用量的确定
中性蛋白酶是一种内切蛋白酶,作用的位点有一定的选择性。在pH=7.5,固液比为1:2,温度为50~C条件下,酶使用量不同,水解结果有所差别(图4)。由图4可看出,酶用量增加能提高水解度,其中加酶在5000U/g时所达到的最终水解效果和6000U/g的最终水解度接近。查阅资料后,此结果可解释为,酶用量在5000U/g以下时,酶解后期,底物能与酶结合的位点偏少,出现水解率随酶用量增加而水解效果不佳的现象。本着成本因素的考虑,选择4000U/g较为合适。
4.3.5固液比的确定
在E/S=4000 U/g,温度为50℃,pH=7.5的条件下进行不同加水量的选择,其水解效果不同(图5)。由图5可知,随着固液比比值增大,水解度也增大。从实验结果角度出发,采用固液比为1:2。
4.4贻贝蛋白粉的制备
脱苦脱腥后的贻贝蛋白水解液经真空冷冻干燥,得到淡黄色粉末状成品,无不良气味。
5 结束语
翡翠贻贝味道鲜美、营养丰富,是一种集营养、保健、防病于一体的食品。贻贝蛋白质含量高,含有人体所需的8种必需氨基酸,脂肪含量低,但必需脂肪酸和多不饱和脂肪酸系列的EPA和DHA的含量甚高。此外,还含有大量的维生素和人体所必需的锰、锌、硒、钻和碘等多种微量元素。贻贝肉风味独特,牛磺酸的含量丰富,具有特殊的类似于蚝的香味。是一种绿色、安全的海洋水产品。
经测定其中粗蛋白质含量为12.11%,水分含量为80.47%,粗脂肪含量为1.34%.粗灰分含量为l_16%。同时,实验利用酶法水解贻贝制蛋白粉工艺,得到了中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶水解贻贝制蛋白粉。其各自最佳实验条件分别为:温度50'E、55℃、37℃,pH为7.5、7.0和2.0,固液比1:2,酶浓度为0.2%。三种酶经实验比较得,中性酶水解效果最佳,水解时间4 h,蛋白质回收率95.47%,水解度49.93%。其水解工艺条件为:固液比1:2,温度50℃,为pH=7.5,水解时间4 h。木瓜蛋白酶水解效果较差。
本试验制得的水解液,因是不完全水解,故水解液中存在着较多的游离氨基和蛋白质。因此,水解液可能比贻贝肉更容易被人体消化吸收。可以用来作为其他食品的辅料,提高营养价值。如将水解液加入面粉中制作海鲜挂面,可以提高挂面的营养价值和经济价值。同时可干燥成为高消化率的贻贝粉,还可以在水解液中加入一些调味料和香料(如葱、蒜、姜、辣椒等),经干燥后制作方便食品(如快食面)的海鲜调味料。本实验为了更好的提高贻贝的经济效益,进一步有效的合理利用贻贝提供了一条新的思路。
1、健脾消食。木瓜中的木瓜蛋白酶，可将脂肪分解为脂肪酸；现代医学发现，木瓜中含有一种酵素，能消化蛋白质，有利于人体对食物进行消化和吸收，故有健脾消食之功效。
2、抗疫杀虫。番木瓜碱和木瓜蛋白酶具有抗结核杆菌及寄生虫如绦虫、蛔虫、鞭虫、阿米巴原虫等作用，故可用于杀虫抗痨。
3、通乳抗癌。木瓜中的凝乳酶有通乳作用，番木瓜碱具有抗淋巴性白血病之功效，故可用于通乳及治疗淋巴性白血病。补充营养，提高抗病能力。木瓜中含有大量水分、碳水化合物、蛋白质、脂肪、多种维生素及多种人体必需的氨基酸，可有效补充人体的养分，增强机体的抗病能力。
4、抗痉挛。木瓜果肉中含有的番木瓜碱具有缓解痉挛疼痛的作用，对腓肠肌痉挛有明显的治疗作用。此外，木瓜还是不可多得的美容圣品。饮品中的木瓜炖雪耳、木瓜牛奶，因为含有大量的维生素A、维生素C及纤维质，所以是润肤、美颜、通便的美容圣品。
5、丰胸。还可以刺激乳腺分泌乳汁，增加母亲授乳的分量。民间有一催乳秘方，就是将木瓜、猪脚或草鱼一同熬汤，效果相当好。此外，“青木瓜排骨煲”、“木瓜炖雪蛤”也是广为人知的催乳妙方。
（来源：文章屋网 ）
王璐31岁
皮肤类型:混合性
皮肤问题:肌肤暗沉,没有光泽,角质层较厚
饮食偏好:偏辣的食物
喜好护肤品牌:玉兰油、雅姿
皮肤诉求:希望改善肤色
体验者自述
疲劳、睡眠不足、情绪低落……我的肌肤变得又黄又暗,没有丝毫光泽。从美容顾问那里了解到,引起肌肤暗沉的原因有很多,最大的“元凶”是睡眠不足,夜间睡眠时皮肤细胞更新最活跃,新的细胞会生长,老化的角质细胞会脱落。睡眠不足时,新陈代谢会减慢,造成老化角质层堆积,肌肤会失去透明感,显得泛灰晦暗。此外,压力过大、吸烟、洁面不彻底以及紫外线照射过多、黑色素积聚等原因,也都会使肌肤失去剔透感而变得暗沉。
以前我常常将肌肤暗沉与肌肤偏黑的概念混淆,用了很多增白产品,效果并不理想。现在终于明白了,改变肌肤暗沉最要紧的方法是促进皮肤表层角质代谢,及时给皮肤补充水分,让肌肤重新变得白里透红。下面就是美容顾问推荐的“木瓜酸奶面膜”,我试过后感觉有比较明显的效果。
准备
木瓜1/4个(约60克)、酸奶5茶匙(约25克)、果汁机、茶匙、面膜纸、小碗、面膜刷
步骤
第一步:从超市或市场买来250克左右的木瓜。注意,最好选青木瓜,如果购买不方便,成熟的木瓜也可以,不过,最好不要选橙黄色的熟木瓜。青木瓜的皮呈青色,瓤为乳白色,有少许珍珠状白色籽。熟木瓜的皮为青黄色或橙黄色,放置室温下青色会转为橙黄色并伴有斑点出现,瓤为浅至深橙色,籽为黑色。
第二步:将木瓜对剖成两半,用匙挖掉木瓜籽。
第三步:将木瓜去皮,每次取1/4,切成2厘米见方的小块,剩余的用保鲜袋装好,放入冰箱冷藏室。
第四步:将木瓜块放入果汁机打碎。操作前可根据需要放入适量清水。
第五步:将搅拌成泥状的木瓜倒入面膜碗。
第六步:加入5茶匙的酸奶一起搅拌均匀,最好用原味酸奶。
第七步:按照常规洁面方式做完脸部清洁后,将该面膜敷在脸上,避开嘴唇、眼睛周围,也可以先在这些部位放置湿棉片。然后用面膜纸覆盖在上面,用手轻按,使之服帖。刚敷在脸上时,会有微微的刺痛感,但一般1分钟后刺痛感即会消失,如果刺痛感比较明显,应立即用清水将面膜洗净。
第八步:10分钟后用清水洗去。轻轻拍上爽肤水即可。
体验者感受
敷完以后脸上稍有一点涩涩的感觉,但会觉得皮肤很清凉、紧致,泛油光及肤色晦暗的现象也会有所改善。这款面膜比较适合在早上使用,在夏季操作时,还可以先用保鲜膜把制作好的面膜封起来,放在冰箱的冷藏室中10至20分钟,再拿来敷脸时会觉得更加清爽,让皮肤更紧实。
敷面膜时,最好用束发带将头发向上束起来,尽量将整个面部露出,但应将耳朵包进束发带,在脖子上围一条毛巾,身体仰靠在沙发上,让脸部保持上仰的姿势。这样才不至于被流下来的面膜弄得狼狈不堪。
木瓜分为两大类，一类属蔷薇科植物，包括皱皮木瓜、光皮木瓜和毛木瓜，主要为药用，以安徽宣城产者质量最佳，称为宣木瓜；另一类为番木瓜科植物番木瓜，多作为热带水果食用，亦可入药。
木瓜，性温，味酸，入肝、脾两经，具有平肝和胃、去湿舒筋的功效。《本草正》载：“木瓜，用此者用其酸敛，酸能走筋，敛能固脱，得木味之正，故尤专入肝益筋走血。疗腰膝无力，脚气，引经所不可缺，气滞能和，气脱能固。以能平胃，故除呕逆、霍乱转筋，降痰，去湿，行水。以其酸收，故可敛肺禁痢，止烦满，止渴。”《本草新编》载：“木瓜，但可臣、佐、使，而不可以为君，乃入肝益筋之品，养血卫脚之味，最宜与参、术同施，归、熟（地）并用。”现代药理研究表明，木瓜含有皂苷、木瓜酵素、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、维生素C、黄酮类和鞣质等成分，有较好的保肝作用，可防止肝细胞肿胀，气球样变，并促进肝细胞修复，显著降低血清丙氨酸转氨酶水平；所含的木瓜酵素能清心润肺，还可以帮助消化、治胃病；对志贺痢疾杆菌、大肠杆菌、肠炎杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌等病菌有明显的抑菌作用；它独有的木瓜碱具有抗肿瘤的功效，尤其对淋巴性白血病具有较好的抗癌活性。近年报道，从未成熟的木瓜果实中提炼纯天然的生物酶制品――木瓜蛋白酶，可用于癌症放化疗的辅助治疗；从木瓜蛋白酶粗品中分离纯化出一种木瓜凝乳蛋白酶，具有凝乳和水解蛋白的能力，在治疗骨质增生、腰椎间盘突出症等方面有较好的疗效，同时可作为肿瘤的辅助治疗药物，在血型鉴定、细胞分离等方面有着非常重要的用途。
常用验方：
吐泻转筋木瓜30克，吴茱萸15克，小茴香0.3克，炙甘草3克，共为细末，取12克备用；生姜3片，紫苏叶3克，加水同煎，去渣取汁后饭前送服12克药末。
风湿腰膝疼痛取木瓜1个，在顶部横切一刀作为盖，掏净瓤子，填入吴茱萸30克，盖上盖，用牙签固定，上屉蒸熟，取出加青盐15克，共研匀为丸，如梧桐子大，每服40丸，食前温黄酒送服。
湿脚气、上攻心胸及壅闷痰逆木瓜、陈皮、人参各30克，桂心、丁香各15克，槟榔60克，共为细末，炼蜜为丸如梧桐子大，每服30丸，生姜煎汤送服。
脐下绞痛木瓜15克，桑叶6克，大枣3枚，水煎顿服。
荨麻疹木瓜18克，水煎分2次服，每日1剂。
外用：
脚气木瓜，明矾各适量，水煎，趁热熏洗。
脚筋挛痛木瓜适量切碎，加水酒各半，煮烂捣如泥，趁热贴于患处。
食疗作用：
湿痹引起的肢体拘挛疼痛
木瓜15克，苡仁30克，加水煮至苡仁烂熟时，加白糖1匙调食。
水肿及小便不利木瓜10克，西瓜翠衣、丝瓜各15克，姜皮5克，水煎服。
番木瓜作为水果食用，营养十分丰富，素有“百益果王”之称，所含的木瓜蛋白酶，可将脂肪分解为脂肪酸；含有的酵素，能消化蛋白质，有利于人体对食物的消化和吸收，故有健脾消食之功；所含的番木瓜碱具有缓解痉挛疼痛的作用，对腓肠肌痉挛有明显的治疗功效。研究还发现，番木瓜还有通乳、防治便秘、促进新陈代谢、美容护肤养颜的效果。一般人群均可食用，尤其适宜慢性萎缩性胃炎患者、缺奶的产妇、风湿筋骨痛、跌打扭挫伤、消化不良及肥胖者食用。它既可生食，又可作为药膳的上好食材，烹饪出多款美味佳肴。
药膳方：
气喘性咳嗽熟木瓜300克，柿饼2个，加水煎服。
肺燥咳嗽熟木瓜250克，去皮切块，上屉蒸熟后加蜜糖拌食。
补虚催乳猪蹄500克，去毛洗净劈开，加水适量，炖熟，再加鲜番木瓜250克，切块，放入汤中，共炖至猪蹄烂熟，一并服用。
养胃原理：止渴、补气，解五脏之热
民间有“喝鹅汤，吃鹅肉，一年四季不咳嗽”的说法。香滑的白粥底搭配营养的鹅胸肉，就是一碗又营养又美味的滋补汤粥了。
南瓜火腿
这道菜简单易做，只需把南瓜切片，和火腿肉一起蒸制即可。
养胃原理：排毒护胃。
因盛传吃南瓜有减肥美容功效，近年兴起了一股南瓜热。《本草纲目》载：“南瓜性温，味甘，入脾、胃经”，能补中益气、消炎杀菌、止痛。其所含的丰富果胶，可“吸附”细菌和有毒物质，包括重金属、铅等，起到排毒作用。同时，果胶可保护胃部免受刺激，减少溃疡。可用南瓜做菜，可以滋养肠胃，让胃一直处于温热状态。莲子红枣羹
这道简单的甜品，是家常小点。只需要把莲子、红枣放入水中煲够时间即可。
养胃原理：健脾促消化。
红枣味甘，性温，归脾胃经，有补中益气、养血安神、缓和药性的功能。常吃红枣可治疗身体虚弱、神经衰弱、脾胃不和、消化不良、劳伤咳嗽、贫血消瘦。木瓜鲩鱼尾汤
木瓜削皮切块，鲩鱼尾入油镬煎片刻，加木瓜及生姜片少许，放适量水，共煮1小时左右。
养胃原理：滋养、消食。
番木瓜的木瓜蛋白酶，有助于食物的消化吸收，对消化不良、痢疾、胃痛、胃溃疡、十二指肠溃疡等均有疗效。番木瓜的脂肪酶，可分解脂肪成脂肪酸，有利于对食物中的脂肪消化吸收。木瓜蛋白酶还能够促进和调节胰液的分泌，对胰腺功能不全引起的消化不良有治疗作用。鲩鱼，味甘，性温。功能暖胃和中、消食化滞。
土豆沙拉
简单的土豆沙拉也是很好的健胃食品，只需将土豆煮熟，即可按照自己喜欢的办法来拌制。
1、舒经活络，祛风解毒。适用于风湿疼痛，虚魔，消渴，妇女血虚经闭，恶疮，疥癣等症。
2、原料：木瓜30克，鸽子1只。
3、配料：料酒10，姜5克，葱10克，盐3克，鸡精3克，胡椒粉3克，鸡油30克。
4、制作：木瓜洗净，切片;鸽子幸杀后，去毛皮内脏、爪;姜切片，葱切段。
5、将木瓜、乳鸽、料酒、姜、葱同放炖锅内，加水800毫升。
6、置武火烧沸，再用文火炖煮30分钟，加入盐、鸡精、鸡油、胡椒粉即成。
7、木瓜中的木瓜蛋白酶，可将脂肪分解为脂肪酸现代医学发现，木瓜中含有一种酵素，能消化蛋白质，有利于人体对食物进行消化和吸收，故有健脾消食之功。木瓜中的凝乳酶有通乳作用，番木瓜碱具有抗淋巴性白血病之功，故可用于通乳。
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番木瓜绝非木瓜
传统木瓜即中药饮片木瓜，以山东、浙江产者为优，又称宣木瓜、淳木瓜，为蔷薇科贴梗海棠的成熟果实。常入药称为木瓜，也有作为水果及药膳服用，其香气浓烈，色金黄，形如香瓜，因果质硬如木，又是木本植物，故称其为木瓜、铁脚梨、木瓜海棠。是一味祛风通络、补益肝肾之品，一般中药房有售，称为木瓜片。
番木瓜是当今水果市场上的新品，其形如木瓜，因其产于南方各省，如广东、广西等地，故称其为番木瓜，又称石瓜、番瓜、蓬生果、木冬瓜等，为番木瓜科植物番木瓜的果实。常以水果入市，但也有一定的药用作用，其色泽青绿或金黄，青绿色为未成熟之果，味淡而涩，可作汤料；金黄色为成熟之果，质软而味甘，香糯可口，是上等的保健水果，一般去皮及籽即可食用。因此番木瓜绝非传统的木瓜，而今由于番木瓜大量上市，又遍及各地，各地消费者误认木瓜即是番木瓜，其实二者有异，番木瓜绝非木瓜。
保健多吃番木瓜
番木瓜是以水果为主入市的时尚佳果，成熟的番木瓜，性平，味甘，入口鲜美而香软。适合儿童及老年人服食，也是青年男女的美容食品。它含有番木瓜碱、木瓜蛋白酶、脂肪酸、果糖、维生素B、维生素C及多种人体需要的微量元素，具有养阴和胃，健脾消积，抗肿瘤，杀菌助消化的作用。其抗肿瘤作用是较其他水果更为显著。根据药理研究：番木瓜碱具有抗淋巴性白血病细胞的“强烈抗癌活性”和抗淋巴性白血病肿瘤细胞的“适度活性”。所以是防止肿瘤的良果。适宜于老年人经常服用。
番木瓜的蛋白酶能帮助消化蛋白质，因此慢性消化不良或胃炎患者可常适量服食鲜果。对于青少年及婴幼儿凡消化不良或便溏不化者可鲜食或做汤食用。番木瓜的蛋白酶不仅能分解蛋白质、糖类，还可分解脂肪，因此可以消除赘肉，缩小肥大细胞，促进新陈代谢，从而达到减肥美容、美姿的目的。
番木瓜自古作为第一丰胸佳果，因为其蛋白酶含有丰富的丰胸激素及维生素A，并能刺激卵巢分泌雌激素，使乳腺畅通，达到丰胸目的，所以更适合青年女性美身、美姿。番木瓜丰富的蛋白酶不仅对发育有很大的助益，而且能润泽肌肤、助消化，能尽快地排出体内的毒素，促进肌肤的新陈代谢，帮助溶解毛孔中堆积的皮脂及老化角质，让肌肤显得更亮丽、更清新。因此可常榨汁服食(去籽及皮，用榨汁机取汁，1日服50～100ml)。所以凡男女老少都宜将番木瓜作为保健美容佳品。
祛风通络用木瓜
传统木瓜即是蔷薇科贴梗海棠的成熟果实，味酸，性温，有祛风通络，平肝和胃之功。《本草再新》载：“敛肝和脾胃，活血通络。”主治脚筋痉挛，俗称吊脚筋，临床应用十分效验。笔者经验：凡老人或青年男女，夜间吊脚筋，即西医所谓腓状肌痉挛，常突然出现腓状肌强硬，疼痛难忍，需立即揉搓才能缓解，但反复发作。西医认为是缺钙所致，常予补钙治疗，但亦未见功效。而用木瓜30g，冰糖10g，水煎服，一般1～3剂即可消除，说明并非缺钙所致。木瓜具有酸甘养阴，祛风通络之功，临床应用，屡试屡验。木瓜汤：木瓜30g，吴茱萸5g，茴香3g，苏叶10g，甘草5g，水煎服，专治吐泻转筋，其功也是取其木瓜祛风通络之功。
番木瓜可谓“百益果王”，其含番木瓜碱、木瓜蛋白酶、凝乳酶、胡萝卜素等，并富含17种以上氨基酸及多种营养元素。其中所含的齐墩果成分是一种具有护肝降酶、抗炎抑菌、降低血脂等功效的化合物。木瓜具有阻止人体致癌物质亚硝胺合成的本领。木瓜中维生素C的含量是苹果的48倍，常食具有平肝和胃，舒筋活络，软化血管，抗菌消炎，抗衰养颜，抗癌防癌，美颜丰胸，增强体质之保健功效。
下面，向读者介绍几款木瓜的药膳方。
木瓜鱿鱼尾汤
原料与用法：番木瓜1个，鲩鱼尾100g。木瓜削皮切块，鲩鱼尾入油镬煎片刻，加木瓜及生姜片少许，放适量水，共煮1小时左右。佐膳食用。
功用：番木瓜的木瓜蛋白酶，有助于食物的消化吸收，对消化不良、痢疾、胃痛、胃溃疡、十二指肠溃疡等均有疗效。番木瓜所含的维生素C是橙子的2倍。维生素C可以使妇女延缓皮肤衰老，驻颜养肤，还可抵御肥胖妇女易患的胆囊病。
木瓜炖羊肉
原料与用法：木瓜1个，木通10g，羊肉250g，葱1根，料酒10g，细盐1g，花椒10粒，陈皮5g，味精2g。将羊肉洗净，放清水中漂30分钟，切成薄片；木瓜、木通、姜、葱洗净。将砂锅置中火上，加水和羊肉烧开，放入木瓜、木通、姜片、葱结、料酒，炖1小时，再改用小火炖熟透，拣出姜、葱、木瓜、木通，加味精、细盐即成。
功用：补气、壮阳、消肿。木瓜具有行气通络，化湿消肿的功效。木通利水消肿、活血通乳、清热除烦。羊肉补肾壮阳，益气生精。三者合用，补中有通，通中有补，适合于阳虚水泛、肢体水肿而畏寒的患者。
鱼妙木瓜船
原料与用法：150g水发鱼翅，木瓜、猪脚500g，排骨500g，老母鸡600g，猪皮150g，火腿骨100g。姜、葱、酒各适量。先取150g水发鱼翅，放入有姜、葱、酒的开水锅中焯过，取出用清水漂凉；取大沙煲一个，竹篾垫底，把焯好的鱼翅整条放在竹篾上，再在鱼翅上垫一竹篾；把猪脚500g，排骨500g，老母鸡600g，猪皮150g，火腿骨100g剁成大块，放开水锅中焯水，过清水，捞起沥干，放在垫有竹篾的鱼翅上，倒入淡二汤2 500g，调入绍酒、精盐，放入捆扎好的葱、芫荽头，盖上煲盖，烧开后用中小火炖4小时左右。另取木瓜，平放切去顶部1/4，余下3/4木瓜挖去瓜瓤，在切口雕上花纹，刻成木船模样，把炖好的鱼翅调好味放入木船中，再入蒸笼蒸约10分钟至木瓜飘吞即可。
功用：补肾填精，养血美颜。适合于妇女保养肌肤之用，对中老年人也有较好的保健作用。
木瓜雪耳炖猪骨
原料与用法：猪脊骨500g，银耳1朵，木瓜1个，红枣5枚，猴头菇2小朵，生姜2片，盐少许。猪脊骨洗净、斩件，飞去血水；木瓜去皮和籽，洗净，切角形；银耳、猴头菇用温开水浸开，洗净，分成小朵；红枣洗净。把焯过水的猪脊骨、木瓜、红枣、生姜片一齐放入开水锅内。武火煮沸后，撇去浮。改用文火煲2～3小时，放入雪耳、猴头菇再煲1小时，调盐食用。
功用：清燥润肺、健胃生津，美白皮肤，促进发育，育龄期妇女经常食用，有较好的保养功能。
木瓜炖银耳
【关键词】 骨关节炎，膝；参麦注射液；关节内注射治疗；实验研究；家兔；实验研究
退行性膝关节病（degenerative osteoarthritis， DOA）是临床上的常见病、多发病之一，其特点为关节软骨退化、变性和坏死，并在软骨下骨及关节周围有新骨形成[1-3]。DOA多发于中老年人，随着年龄的增长，加之长期负重或过度使用，导致关节软骨的退变。关节软骨、骨骼的退变与机体其他组织（如心血管）退变有相似性，研究者从参麦注射液有营养心肌细胞的作用得到启示[1，6]，利用膝关节腔注射给药的方式，以达到直接营养关节软骨的目的。为探讨参麦注射液防治膝关节退行性疾病的作用机制及局部用药的安全性，探索防治DOA新思路，笔者于2011年12月开展本研究，现总结报道如下。
1 实验材料
1.1 实验动物 健康SPF级新西兰家兔40只，由广东省医学动物实验中心提供，实验动物合格证号SCXK（粤）2011-0062。
1.2 实验药品及试剂 参麦注射液（四川三精升和制药有限公司生产，国药准字Z20053254，生产批号110914）每支10 mL；利多卡因注射液（江苏济川制药有限公司生产，生产批号110315）每支5 mL；
木瓜蛋白酶（活力200万U，天津诺奥科技发展有限公司提供）；IL-1β、IL-6、TNF（广州展晨生物科技有限公司，生产批号CK-E30015）。
2 方 法
2.1 造模与分组 40只家兔适应性喂养1周后，随机取8只为正常对照组，给予关节腔内注射0.5 mL
EDTANa2磷酸盐缓冲液，其余家兔采用木瓜蛋白酶所致兔骨关节炎造模：将NaCl 0.4 g、NaOH 0.01 g、Na2HPO4 0.358 g及KH2PO4 0.024 g溶解在8 mL双蒸水中，加入NaOH调节pH值至8.0，加入EDTANa2 7.44 mg，震荡溶解，再加入木瓜蛋白酶0.16 g溶解，测量液体pH值后，加入HCL调整pH值到6.5，以双蒸水定容至10 mL，4 ℃低温保存备用。将上述备用的1.60%木瓜蛋白酶溶液0.5 mL
注入动物双侧膝关节腔内，第l，3，7天各注射1次。根据临床上超疲劳容易提前出现骨关节炎的发病特点，每日强迫家兔活动30 min，2周后即得到稳定的膝骨关节炎模型。造模成功后随机分为模型组、参麦组、利多卡因组、参麦+利多组4组，每组8只。
2.2 给药方法 造模2周后，参麦组关节腔注射参麦注射液0.4 mL（2 mg・kg-1）、利多卡因组关节腔注射利多卡因注射液0.4 mL（2 mg・kg-1）和参麦+利多组注射0.4 mL参麦注射液和利多卡因注射液混合液，正常对照组和模型组均关节腔内注射0.4 mL的注射用生理盐水，每周1次，连续8次，于未次注射给药后2 h，取血，不加抗凝剂，然后处死家兔。
2.3 观察指标
2.3.1 家兔步态的评价 分别于造模前后、给药期、末次给药2 h，每日观察，每4周进行1次步态评价，步态分级按Coderre的方法，即0级：正常行走；I级：轻微跛行，受试下肢略有弯曲；Ⅱ级：中度跛行，受试下肢刚触及地面；Ⅲ级：重度跛行，受试下肢略离开地面，后足着地行走。
2.3.2 膝关节周长测量 分别于造模前后、给药期、末次给药2 h，麻醉，用软尺测量各组动物膝关节部位周长，计算肿胀率后进行统计。
2.3.3 关节液炎症因子浓度测定
2.3.3.1 标本取材 处死家兔仰卧位固定，于膝关节处剃毛，常规消毒、铺巾，切开皮肤，暴露关节囊，用无菌注射器抽取2 mL无菌生理盐水，进行关节腔灌注，屈伸活动膝关节5次，反复抽出注入5次。待关节液与生理盐水混匀后，收集全部关节腔灌注液，测量关节液量，以所测关节液减去2 mL无菌生理盐水作为关节液容量，-80 ℃保存备用。
2.3.3.2 关节液组织炎症因子浓度测定 取所有动物关节液1 000 r・min-1离心5 min，取上清液保存于-80 ℃冰箱，测白细胞计数，ELISA双抗夹心法测IL-1β、IL-6、TNF浓度。
2.4 统计学方法 数据采用SPSS13.0软件进行统计分析，计量资料以表示，采用单因素方差分析，方差齐，采用LSD方法进行两两比较，方差不齐，采用Tamhane方法进行两两比较；等级资料采用秩和检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。
3 结 果
3.1 家兔步态情况 经秩和检验，除正常对照组外，其余4组造模前后步态变化，差异均有统计学意义，（P = 0.018 < 0.05）；与正常对照组比较，其余4组造模后步态变化，差异均有统计学意义（P = 0.022 < 0.05），见表1。
3.2 膝关节肿胀情况 见表2。
3.3 关节液炎症因子浓度测定 见表3。
4 讨 论
膝骨关节炎以关节软骨的退变为主要病理特征。近年来，随着世界老龄化人口的日益增加，KOA的发病率在全球范围内都呈逐年上升趋势，因而如何预防与治疗KOA已经成为各国骨科学界研究者面临的重要课题。细胞因子在KOA病理改变过程中起重要作用，大量研究显示，细胞因子是骨关节炎软骨组织炎性破坏降解的重要介质，不仅协同抑制软骨组织成分的合成，同时参与软骨组织的破坏分解[4]。研究表明，IL-1β、IL-6、TNF-α等细胞因子在KOA发生发展中也发挥了重要作用，能特异地作用于软骨细胞及滑膜细胞，参与调节基质金属蛋白酶的形成，抑制胶原蛋白和蛋白多糖的合成，介导关节软骨的破坏[5-7]。本研究中采用兔膝关节内注射木瓜蛋白酶的方法复制KOA模型，注射2周时采用Lequesne的膝关节评估级别中的关节局部反应、关节畸形情况对模型进行严格评价，结果显示，与正常对照组比较，差异有统计学意义（P < 0.01）；对KOA局部肿胀程度进行观察，与正常对照组比较，发现关节肿胀明显，与KOA变化相同。
KOA属中医学“骨痹”范畴，多为正气虚弱，复感外邪，闭阻经络而发病。一般认为KOA的病理机制是人体关节内应力平衡失调，失调的原因是细胞因子造成了关节软骨降解，加之关节周围软组织挛缩、粘连，且长期得不到纠正所致[8-9]。
关节内注射参麦注射液能明显改善兔的步态异常；模型组关节液IL-1β含量与正常对照组比较明显升高，说明兔关节液中IL-1β是KOA病理改变的一种重要炎症介质。参麦注射液关节内注射治疗后，兔关节液中IL-1β含量与型组比较有减少，与正常对照组比较仍然偏高，差异无统计学意义（P > 0.05），且关节软骨组织形态较模型组有所改善，说明参麦注射液关节内注射疗法对KOA进程中细胞因子IL-1β的生成具有一定的拮抗作用。我们在兔KOA模型制备成功后，进行参麦注射液关节内注射治疗后8周发现模型组兔关节液中IL-6、TNF-α含量与正常对照组比较明显升高（P < 0.05），说明参麦注射液关节内注射疗法可以减轻局部的炎症反应。
本研究结果显示，参麦注射液关节内注射能够改善模型兔的步态、消除膝关节肿胀，同时可以降低局部组织的炎症因子如IL-1β、IL-6、TNF-α水平，该治疗方法的安全有效性，值得临床进一步深入研究。
5 参考文献
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