时间：2022-03-03 08:59:20
开篇：写作不仅是一种记录，更是一种创造，它让我们能够捕捉那些稍纵即逝的灵感，将它们永久地定格在纸上。下面是小编精心整理的12篇生物材料论文，希望这些内容能成为您创作过程中的良师益友，陪伴您不断探索和进步。
关键词：纳米材料生物医学应用
1应用于生物医学中的纳米材料的主要类型及其特性
1.1纳米碳材料
纳米碳材料主要包括碳纳米管、气相生长碳纤维也称为纳米碳纤维、类金刚石碳等。
碳纳米管有独特的孔状结构［1］，利用这一结构特性，将药物储存在碳纳米管中并通过一定的机制激发药物的释放，使可控药物变为现实。此外，碳纳米管还可用于复合材料的增强剂、电子探针（如观察蛋白质结构的AFM探针等）或显示针尖和场发射。纳米碳纤维通常是以过渡金属Fe、Co、Ni及其合金为催化剂，以低碳烃类化合物为碳源，氢气为载体，在873K～1473K的温度下生成，具有超常特性和良好的生物相溶性，在医学领域中有广泛的应用前景。类金刚石碳（简称DLC）是一种具有大量金刚石结构C—C键的碳氢聚合物，可以通过等离子体或离子束技术沉积在物体的表面形成纳米结构的薄膜，具有优秀的生物相溶性，尤其是血液相溶性。资料报道，与其他材料相比，类金刚石碳表面对纤维蛋白原的吸附程度降低，对白蛋白的吸附增强，血管内膜增生减少，因而类金刚石碳薄膜在心血管临床医学方面有重要的应用价值。
1.2纳米高分子材料
纳米高分子材料，也称高分子纳米微粒或高分子超微粒，粒径尺度在1nm～1000nm范围。这种粒子具有胶体性、稳定性和优异的吸附性能，可用于药物、基因传递和药物控释载体，以及免疫分析、介入性诊疗等方面。
1.3纳米复合材料
目前，研究和开发无机—无机、有机—无机、有机—有机及生物活性—非生物活性的纳米结构复合材料是获得性能优异的新一代功能复合材料的新途径，并逐步向智能化方向发展，在光、热、磁、力、声［2］等方面具有奇异的特性，因而在组织修复和移植等许多方面具有广阔的应用前景。国外已制备出纳米ZrO2增韧的氧化铝复合材料，用这种材料制成的人工髋骨和膝盖植入物的寿命可达30年之久［3］。研究表明，纳米羟基磷灰石胶原材料也是一种构建组织工程骨较好的支架材料［4］。此外，纳米羟基磷灰石粒子制成纳米抗癌药，还可杀死癌细胞，有效抑制肿瘤生长，而对正常细胞组织丝毫无损，这一研究成果引起国际的关注。北京医科大学等权威机构通过生物学试验证明，这种粒子可杀死人的肺癌、肝癌、食道癌等多种肿瘤细胞。
此外，在临床医学中，具有较高应用价值的还有纳米陶瓷材料，微乳液等等。
2纳米材料在生物医学应用中的前景
2.1用纳米材料进行细胞分离
利用纳米复合体性能稳定，一般不与胶体溶液和生物溶液反应的特性进行细胞分离在医疗临床诊断上有广阔的应用前景。20世纪80年代后，人们便将纳米SiO2包覆粒子均匀分散到含有多种细胞的聚乙烯吡咯烷酮胶体溶液中，使所需要的细胞很快分离出来。目前，生物芯片材料已成功运用于单细胞分离、基因突变分析、基因扩增与免疫分析（如在癌症等临床诊断中作为细胞内部信号的传感器［5］）。伦敦的儿科医院、挪威工科大学和美国喷气推进研究所利用纳米磁性粒子成功地进行了人体骨骼液中癌细胞的分离来治疗病患者［6］。美国科学家正在研究用这种技术在肿瘤早期的血液中检查癌细胞，实现癌症的早期诊断和治疗。
2.2用纳米材料进行细胞内部染色
比利时的DeMey博士等人利用乙醚的黄磷饱和溶液、抗坏血酸或柠檬酸钠把金从氯化金酸（HAuCl4）水溶液中还原出来形成金纳米粒子，（粒径的尺寸范围是3nm～40nm），将金纳米粒子与预先精制的抗体或单克隆抗体混合，利用不同抗体对细胞和骨骼内组织的敏感程度和亲和力的差异，选择抗体种类，制成多种金纳米粒子—抗体复合物。借助复合粒子分别与细胞内各种器官和骨骼系统结合而形成的复合物，在白光或单色光照射下呈现某种特征颜色（如10nm的金粒子在光学显微镜下呈红色），从而给各种组织“贴上”了不同颜色的标签，为提高细胞内组织分辨率提供了各种急需的染色技术。
2.3纳米材料在医药方面的应用
2.3.1纳米粒子用作药物载体
一般来说，血液中红血球的大小为6000nm～9000nm，一般细菌的长度为2000nm～3000nm［7］，引起人体发病的病毒尺寸为80nm～100nm，而纳米包覆体尺寸约30nm［8］，细胞尺寸更大，因而可利用纳米微粒制成特殊药物载体或新型抗体进行局部的定向治疗等。专利和文献资料的统计分析表明，作为药物载体的材料主要有金属纳米颗粒、无机非金属纳米颗粒、生物降解性高分子纳米颗粒和生物活性纳米颗粒。
磁性纳米颗粒作为药物载体，在外磁场的引导下集中于病患部位，进行定位病变治疗，利于提高药效，减少副作用。如采用金纳米颗粒制成金溶液，接上抗原或抗体，就能进行免疫学的间接凝聚实验，用于快速诊断［9］。生物降解性高分子纳米材料作为药物载体还可以植入到人体的某些特定组织部位，如子宫、阴道、口（颊、舌、齿）、上下呼吸道（鼻、肺）、以及眼、耳等［10］。这种给药方式避免了药物直接被消化系统和肝脏分解而代谢掉，并防止药物对全身的作用。如美国麻省理工学院的科学家已研制成以用生物降解性聚乳酸（PLA）制的微芯片为基础，能长时间配选精确剂量药物的药物投送系统，并已被批准用于人体。近年来生物可降解性高分子纳米粒子（NPs）在基因治疗中的DNA载体以及半衰期较短的大分子药物如蛋白质、多肽、基因等活性物质的口服释放载体方面具有广阔的应用前景。药物纳米载体技术将给恶性肿瘤、糖尿病和老年痴呆症的治疗带来变革。
2.3.2纳米抗菌药及创伤敷料
Ag+可使细胞膜上蛋白失去活性从而杀死细菌，添加纳米银粒子制成的医用敷料对诸如黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿浓杆菌等临床常见的40余种外科感染细菌有较好抑制作用。
2.3.3智能—靶向药物
在超临界高压下细胞会“变软”，而纳米生化材料微小易渗透，使医药家能改变细胞基因，因而纳米生化材料最有前景的应用是基因药物的开发。德国柏林医疗中心将铁氧体纳米粒子用葡萄糖分子包裹，在水中溶解后注入肿瘤部位，使癌细胞部位完全被磁场封闭，通电加热时温度达到47℃，慢慢杀死癌细胞。这种方法已在老鼠身上进行的实验中获得了初步成功［11］。美国密歇根大学正在研制一种仅20nm的微型智能炸弹，能够通过识别癌细胞化学特征攻击癌细胞，甚至可钻入单个细胞内将它炸毁。
2.4纳米材料用于介入性诊疗
日本科学家利用纳米材料，开发出一种可测人或动物体内物质的新技术。科研人员使用的是一种纳米级微粒子，它可以同人或动物体内的物质反应产生光，研究人员用深入血管的光导纤维来检测反应所产生的光，经光谱分析就可以了解是何种物质及其特性和状态，初步实验已成功地检测出放进溶液中的神经传达物质乙酰胆碱。利用这一技术可以辨别身体内物质的特性，可以用来检测神经传递信号物质和测量人体内的血糖值及表示身体疲劳程度的乳酸值，并有助于糖尿病的诊断和治疗。
2.5纳米材料在人体组织方面的应用
纳米材料在生物医学领域的应用相当广泛，除上面所述内容外还有如基因治疗、细胞移植、人造皮肤和血管以及实现人工移植动物器官的可能。
目前，首次提出纳米医学的科学家之一詹姆斯贝克和他的同事已研制出一种树形分子的多聚物作为DNA导入细胞的有效载体，在大鼠实验中已取得初步成效，为基因治疗提供了一种更微观的新思路。
纳米生物学的设想，是在纳米尺度上应用生物学原理，发现新现象，研制可编程的分子机器人，也称纳米机器人。纳米机器人是纳米生物学中最具有诱惑力的内容，第一代纳米机器人是生物系统和机械系统的有机结合体，这种纳米机器人可注入人体血管内，进行健康检查和疾病治疗（疏通脑血管中的血栓，清除心脏脂肪沉积物，吞噬病菌，杀死癌细胞，监视体内的病变等）［12］；还可以用来进行人体器官的修复工作，比如作整容手术、从基因中除去有害的DNA，或把正常的DNA安装在基因中，使机体正常运行或使引起癌症的DNA突变发生逆转从而延长人的寿命。将由硅晶片制成的存储器（ROM）微型设备植入大脑中，与神经通路相连，可用以治疗帕金森氏症或其他神经性疾病。第二代纳米机器人是直接从原子或分子装配成具有特定功能的纳米尺度的分子装置，可以用其吞噬病毒，杀死癌细胞。第三代纳米机器人将包含有纳米计算机，是一种可以进行人机对话的装置。这种纳米机器人一旦问世将彻底改变人类的劳动和生活方式。
瑞典正在用多层聚合物和黄金制成医用微型机器人，目前实验已进入能让机器人捡起和移动肉眼看不见的玻璃珠的阶段［13］。
纳米材料所展示出的优异性能预示着它在生物医学工程领域，尤其在组织工程支架、人工器官材料、介入性诊疗器械、控制释放药物载体、血液净化、生物大分子分离等众多方面具有广泛的和诱人的应用前景。随着纳米技术在医学领域中的应用，临床医疗将变得节奏更快，效率更高，诊断检查更准确，治疗更有效。
参考文献
［1］PhilippeP，NangZLetal.Science，1999，283:1513
［2］孙晓丽等.材料科学与工艺，2002，（4）：436-441
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［11］李沐纯等.中国现代医学杂志，2003，13：140-141
据新华社电 全球著名金融信息提供商汤姆森－路透集团2日公布报告称，中国科研人员目前每年发表的科研论文数量仅次于美国，位居世界第二。
这份名为《新科学地理———研究和合作在中国》的报告说，1998年，中国科研人员共发表了约2万篇科研论文，到2008年，这一数字剧增至11.2万篇；而同期美国科研人员的论文数量由26.5万篇增至34万篇。中国已将日本、英国、德国等国甩在身后。
这份报告的数据由汤姆森－路透集团根据全球1.05万种科研期刊的数据汇总而成。报告分析说，中国科研人员的论文主要集中在材料科学、化学和物理学领域，中国对创新型材料的专注可能将产生深远影响。
报告说，中国改革开放30多年来，在原子能、空间科学、高能物理、生物学、计算机科学、信息技术等领域的水平已经达到或接近国际水平，另外，在农业科学、免疫学、微生物学、分子生物学以及遗传学等领域，中国也在快速发展。
1.1以WebofScience为数据源
以WebofScience作为数据源，进行检索和筛选数据。论文以生物材料学科为例，分析科研人员及其团队，为学校挖掘可引进的人才，也为学校人才引进提供评估参考材料。
1.2分析流程
(具体见图1)论文采用h指数、R指数、AR指数作为衡量学者科研水平的3个量化指标。h指数不能区分h值相同但论文被引频次相差悬殊的情况，缺乏一定的灵敏度和区分度，结合采用了R指数、AR指数，解决h指数存在的一些不足［9］。
2以生物材料为例的应用分析
2.1基础数据检索与清洗、筛选
选取检索源:Webofscience的SCIE数据，因webofscience数据存在滞后，为保障期刊论文数据的完整性，选择数据库时间范围为:2003－2012(10年)，具体检索时间:2014.3.10。论文采用了材料科学－生物材料作为案例进行检索分析，假设某学校想引进生物材料方面的学者。选择的期刊以JCR－Q1期刊为参考，选取了webofscience的“MATERIALSSCIENCE，BIOMATERIALS”类目的Q1期刊，共六种期刊。通过webofscience检索出版物名称=(″BIOMATERIALS″or″ACTABIOMATER″or″EURCELLSMATER″or″DENTMATER″or″MACROMOLBIOSCI″or″BIOFABRICATION″)，时间跨度=2003－2012，检索结果:13179条。筛选出:article、review两种类型文献12970篇。
2.2作者基础排序分析
以webofscience的分析功能，选取排序前10位的发文作者，见表1列出了前10位作者及其发表的论文数量，论文中分别以A1、A2…标示各位作者。论文在此研究中，暂不考虑作者在论文中的贡献度，即不区分第一作者、通讯作者或是所处的其他合作位置。在webofscience中，作者名称基本采用了姓氏加名的首字母，存在较为严重的同名作者问题。考虑作者的同名现象，对每位作者结合作者机构进行较为精确的分析。在webofscience中作者同名问题基本没有得到解决，需要通过人工筛选才能达到精确。对上述10位学者对应的文献进行逐篇查看，可以确定出该检索集中，有3个作者姓名简称对应了多位学者，如对A3的70篇文献中的前20篇进行逐篇查看，20篇论文属于16位不同单位且姓名简称同为A3的学者。同样发现A9和A10具有多位学者共同构成论文篇数，均被排除出前10的位置。通过逐篇查看，筛选出排名前7的学者。
2.37位学者h指数、R指数、AR指数分析
对筛选出的前7名学者，进行SCI论文检索，检索时间范围为:2003－2012，检索日期为2014.3.16，文献类型为ARTICLE或REVIEW。因为涉及同名、作者曾在不同单位任职等现象，结合webofscience的“惟一作者集”等作者辅助检索工具，进行筛选。2.4A7学者及其团队的挖掘分析论文选用SATI文献题录信息统计分析工具［10］和UCI-NET社会网络分析软件［11］对A7的SCIE论文进行分析。通过分析挖掘与A7有更多直接合作关联的学者，拟挖掘“他们”作为某学校生物材料方面的外聘人才。利用两个软件，构建了如图3所示的A7的作者合作网路。从图3可以发现A7的合作网络错综复杂。利用k－核概念，研究网络合作的凝聚子群。所谓k－核是指如果一个子图中的全部点都至少与该子图中的k个其他点邻接，则称这个子图为k－核［11］。通过k－核，可以发现一些高合作、高凝聚的群体。对A7的社会网络进行k－核分析，如图4所示为A7文献作者k－核分析的部分截图。由图4可见，在A7的392篇文献的所有合作者中，可以进行8种分区，度数分别为2，3，4，5，6，7，8，9，即分别为2－核，3－核，……，9－核。9－核即是指A7和其他34位学者(图4所示的作者编号P1、……、P84)共同组成各个作者之间至少有9个邻接的子群，可能是学科团队、或项目合作的团队，其中可能存在一些具有知识引导的团队带头人。计算A7合作网络中学者们的在整体网络中个体密度值，图5为截取其中部分学者的个体密度值计算。从图5可以得出这个整体网中各个个体(科研人员)的密度值、及其他指标值。A7的个体密度值最低，值为9.44，Broker和EgoBet值最高，分别为3791.00、2927.17，他这个作者群网络中的知识引导人、合作引导人，其位置占据了结构洞位置，是作为“桥”位置者。结合图5所示的9－核团队，在这些学者中，P1的网络规模最大(值为45.00)，密度是19.90，Broker值是793，EgoBet值是326.90，仅次于A7，在其合作网络中，占据结构洞位置，可作为引进人才或外聘的人选。P3密度值为27.92，Broker值为253，EgoBet值是98.46，在合作网中与他人有合作、也有一定的知识引导作用。从图5也可以发现，学者P7的密度值最大，为100，Broker和Ego-Bet值均为0，在个体网中的中间性不强，不占据结构洞位置，可以猜测其为求学的学生或是某个项目的参与者。根据上述分析，P1和P3可作为外聘或引进的人选。对这两位学者，同样计算其2003－2012年期间的h指数、R指数、AR指数，通过和表3学者的各个指标进行比较、衡量。P1的各位指数都高于P3，且与表3中的7位学者的∑(h，R，AR)值进行排序，排列第4。
3结论与进一步思考
早期的研究中以植物内生菌为题报道的绝大部分都是非豆科植物根系内分离到的固氮根瘤菌Frankia属细菌，宿主植物主要有四川桤木(Alnuscermastogyne)、木麻黄(Casuarinasp)、沙棘(Hippophaesp.)、赤场(Alnussp.)、杨梅(Myricasp.)和胡颓子(Elaeagnussp.)等。此外还有百合科(Liliaceae)百合(Liliumsp.)细胞中的内生菌研究。篇名中第一次出现内生细菌的原著论文是1996年中国农业大学刘云霞等关于水稻内生细菌巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)在水稻内分布的研究[5]，以及吴加志等关于Enterobacter，Pseudomonas和Bacillus三属植物内生细菌在植物病害生物防治潜力方面的研究[6]。受国外植物内生细菌研究的影响，作为植物病害的生防因子，我国棉花、水稻、马铃薯等作物的内生细菌首先受到了关注。我国首次正面研究内生真菌的是已故南京农业大学终身教授李扬汉关于麦田有毒杂草毒麦(Loliumtemulentum)中的内生真菌的观察[4]，此后我国内生真菌的研究沉寂了约10年。邱德有等关于红豆杉内生真菌的先驱性研究开启我国药用植物内生真菌研究的火热时代[3,7-9]。目前，关于药物开发指向的植物内生微生物及其所产生理活性物质研究，在我国遍及以药用植物和农用植物为主的数十科野生植物和农作物，连年产出百余篇原著论文和十余篇文献综述(图1)。按现在的趋势，我国年度发表植物内生真菌相关原著论文将很快会超过两百，研究的热潮有增无减，成为植物内生微生物研究中最活跃的领域。植物内生真菌的另一个重要内容——禾本科植物麦角类内生真菌的研究则到甘肃草原生态研究所南志标从新西兰留学回来后才真正兴起。南志标先生回国后在甘肃省自然科学基金和国家人事部归国留学人员科研启动资金的资助下，利用执行联合国粮食计划署2817项目咨询任务时从新疆阿勒泰地区采集到的野生植物样品，首次检测到我国产布顿大麦草(Hordeumbugdanii)中含有内生真菌，并指出了内生真菌的植株能促使宿主植物总生物量、干物质产量、根重以及分蘖数均有所增加。同时也发现，甘肃省的中华羊茅、紫羊茅和部分雀麦属植物中不同程度的含有内生菌[10-11]。同时，在美国牧草种子公司的资助下，新疆草原研究所的李宝军等利用新疆种质资源库的11种牧草种子进行了内生真菌的检测，发现醉马草种子中含有内生真菌[12]。进入21世纪后，关于禾本科植物内生菌的研究有兰州大学的南志标/李春杰课题组、南开大学的高玉葆/任安芝课题组以及南京农业大学的王志伟/纪燕玲课题组等开展持续性的研究。
2植物内生微生物研究的基本特点
首先应该指出，国际国内植物内生微生物研究最大的特点是其范围之大、涉及微生物的种类之多样、功能之繁杂、潜力之广阔。据现行学术界通用的概念和范畴，只要是有机会在植物体内出现的微生物，几乎无所不包含在植物内生微生物的范畴之内[13-15]。这个特征决定了植物内生微生物的研究领域是广阔的，所涉及的学科除生物科学类各基础学科外，还有农学和林学类各基础学科、药物化学、医学、生物工程、食品保藏与加工等多方面的学科。因此，植物内生微生物的研究适合多领域共同协作，在视角和概念运用等方面出现多元化也是很自然的。第二，植物内生微生物基本功能是多层次的。最基本的层次是微生物本身的显。这种功能以微生物的分离物为基础、在人工培养时即得以表达，可通过人工培养以及人工发酵进行研究、挖掘和改良，我国这方面的研究报告最多[16-18]。第二层次是微生物和宿主植物形成共生体(Symbiota)所表现出来的功能。就像绝大多数产毒素的冷季型禾本科植物与其Epichloae类内生真菌的共生体那样，这种毒素的生产和积累的功能不是植物或微生物单独所具有的，或者单独能达到的强度和高度，只有通过宿主植物和内生微生物形成共生体后才体现出来[19-21]。第三层次是内生微生物/宿主植物共生体在不同环境中所表达出来的不同功能或不同程度。上述产毒Epichloae类内生真菌和其宿主植物的共生体也不是在任何时候、任何环境中都能生产和积累毒素，在某种特定的环境条件下生产毒素(多)，在另外的条件下则少生产或根本不生产毒素[19,22]。植物生长环境直接介入微生物和宿主植物共生体的生物学特性的表达。这一现象十分符合植物和微生物相互作用的基本规律，可能对利用植物内生微生物的生理活性物质进行生物制药研究和开发的科研人员也会有积极的启发。第三，植物内生微生物给人类带来的影响不全是有益的，有时也会出现有害的一面。从文献的描述来看，这一点在我国目前仅在少数研究中引起了注意。黑麦草内生真菌、苇状羊茅内生真菌、疯草内生真菌等该宿主植物带来的毒素生产和积累则是最突出的例子。无论是产毒的禾本科植物内生真菌还是疯草内生真菌，已经被人们发现的这些有害事例已经给社会造成了巨大的损失[19,23]。另外，虽然没有出现鹅观草致毒的报道，但从其中的内生真菌中也检测到了一些毒素生产基因(王志伟等，未发表)。因此，我们有必要对植物内生微生物给人类带来有害影响也给以足够的关注。同样，我们固然可以期望植物内生微生物给宿主植物带来或加强抗菌作用(Antagonism)、化感作用(Allelopathy)等抑制其它生物生长和发育的功能，在植物抗病、抑制杂草等方面起到一定的正面作用。但另一方面，这些作用是否会导致区域内生物多样性的降低[24-25]，产生新的生态问题？这些都需要今后去认真评价。第四，植物内生微生物的功能一部分可通过生物学/生物化学的特征表现出来，另有一部分功能必须通过生态学的方法才能加以研究和利用。新西兰在飞机场及其周边大规模种植产毒素Epichloae类内生真菌和其宿主植物共生体，以此驱避在机场聚集的鸟类(JohnCuradus，私人通信)。这是通过生态学的方法对植物内生微生物的功能加以利用的一个代表性事例。在我国，利用植物内生微生物进行植物病虫害的生物防治也是这类事例中的典型[25-27]。在这些情况下，内生微生物和其宿主植物的共生体特征的稳定表达就十分重要。一般来说，植物内生微生物作为药用微生物利用时，微生物本身相对重要一些，而作为农用资源或环境修复手段加以利用时，共生体的特征则往往更加重要。
3我植物内生微生物研究的发展和特点
进入21世纪，特别是近10年来，我国植物内生微生物的研究发展迅猛。据最保守统计，在我国发行杂志上由我国科研人员发表的植物内生微生物的论文(篇名中含有“内生菌”、“内生细菌”或“内生真菌”字样的论文)在2008年以后每年都超过200篇，2013年论文总数已逼近300(图1)。考虑篇名中没有体现出来的论文以及在国外发表的论文，我国科研人员近年来发表的植物内生微生物研究的论文大约每年可达400篇以上。研究领域也全面开花，基本形成了4大板块、24个分支的局面(表1)。至此，我国已形成了一支队伍庞大、成果丰硕的科研力量，在国际植物内生微生物研究中占有十分显要的地位。从整体趋势来看，我国植物内生微生物研究的特点可概括为“四多四少”。资源探索多、分离培养多、活性检测和生物功能研究多，基础性前期工作多；方法研究少、涉及林木少、与宿主的关联少、实际应用少。特别是以药物开发为目的的资源探索性研究报告最多，以抗菌、抗肿瘤等指标为主的药物开发指向的论文大量出现，形成了我国植物内生微生物研究中最耀眼的亮点[17,28-29]。植物内生微生物研究以生理活性检测以及活性物质探索为主要范式(Paradigm)之一，思路清晰易懂、方法简单、实施容易，是研究生训练的好材料。关注我国植物内生微生物论文数量的上升时机，也不难发现其上升趋势和研究生毕业数量的上升基本同步(图1)。从论文数量整体来看，从20世纪末开始我国科研人员在本国的科学杂志上(中国学术期刊网络出版总库收录部分，1979-2013年)，植物内生微生物的研究有了飞速的发展。在21世纪的第一个10年中，我国关于植物内生微生物研究的突飞猛进，论文数量从2000年的14篇增加到2010年的257篇，翻了18.4倍(图1)；研究对象也从Frankia等非共生固氮根瘤菌为主、加上几个关于红豆杉内的紫杉醇生产菌以及冷季型禾本科植物中的麦角菌类真菌等零星报道，发展到包括草本、木本、单子叶、双子叶以及蕨类等数十科近百属植物中的微生物；研究方向也增加到包括医药、农业、环境、食品等多个领域(表1)。最近几年来，植物内生微生物相关的论文数量继续增加、研究范围继续扩大，形成了我国微生物学研究中发展最快、研究人员增长和人才积累最快、研究范围扩大最快的领域。在这个领域中，显示各种生理活性、具有潜在的药物开发价值的植物内生真菌以及它们所生产的生理活性物质不断出现，具有抗病虫害活性的内生微生物菌株也大量积累，新的微生物物种被相继提出，并不断开发出重金属抗性增强、难降解化合物的分解等新的应用功能。同时，通过参与植物内生微生物研究而得到基本科学训练的年轻学者也大量进入社会，我国植物内生微生物的研究蕴含着巨大的发展潜力。但是，我国植物微生物研究发展不平衡。在我国的期刊上发表的研究报告主要集中在医药方向和农业方向，尤其是以生物医药开发为目标的药用植物内生微生物的论文数量尤为突出[17,28-29]。而在大尺度生态学中十分重要的天然林木以及草原野草中的内生微生物则报道相对较少[12,30-33]。在研究程度上也存在着“初步研究多、深入追究少”的特点。在生物活性和活性物质研究方面，分离和初步鉴定多、周密的分类鉴定少，活性菌株的初级筛选多、达到或接近可应用水平的筛选少，活性检测和物质初步提纯多、化合物纯化与鉴定少，发展到后期应用的事例则寥寥无几，有关生理活性物质生产的基因及其调控的研究则更少[17,29]。在生态学研究方面，也存在微生物的群落结构、生态分布、生活史研究、培养条件的优化等都比较少的倾向[33-36]。此外，微生物的分离技术、培养技术、微生物的消除技术、接种技术等开发还相对薄弱。考虑这些内生微生物的农业应用，能将植物内生微生物进行工具化的上述操作技术也有待于今后进一步开发。因此，我国的植物内生微生物研究的质量进一步提高、应用面继续扩大、实用性大幅度增加的空间依然很大。
4我植物内生微生物研究的成
4.1医药指向的研究
1993年，Strobel等发表了关于红豆杉内生真菌合成紫杉醇这一发现，在国际上形成了药用植物内生微生物开发的范式。受此范式影响，我国医药指向的植物内生微生物研究以药用植物为材料居多，尤以红豆杉类植物、红树类植物、鬼臼类植物、石斛等兰科植物以及银杏等植物较为常见。红豆杉属(Taxus)植物主要有短叶红豆杉(Taxusbrevifolia)、红豆杉(T.wallachiana)、南方红豆杉(T.chinensisvar.mairei)、云南红豆杉(T.yunnanensis)、东北红豆杉(T.suspidata)等，我国微生物学工作者从中分离得到了紫杉霉属(Taxomyces)、镰孢霉属(Fusarium)、链格孢属(Alternaria)、拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)、曲霉属(Aspergillus)等植物内生真菌和内生细菌。从这些微生物中又分别检测到了抗肿瘤、抗氧化、抗动物病原物、抗病原媒介物、抑制特定酶活性等生物活性，分离到了生物碱类、苯丙素、萜类、醌类、脂类、酮类、酚类、有机酸类、甾体类等活性化合物及其衍生物，其中关于紫杉醇生产的研究报告最多[17,28-29,37-38]。常用的红树类植物主要包括生长在包括港澳地区在内的华南沿海的红海榄(Rhizophorastylosa)、秋茄(Kandeliacandel)、木榄(Bruguieragymnorrhiza)、桐花树(Aegicerascorniculatum)、白骨壤(Auicenniamarina)、海漆(Excoecariaagallocha)等。我国微生物学工作者从中分离得到了链格孢属(Alternaria)、曲霉属(Aspergillus)、芽枝霉属(Cladosporium)、镰孢霉属(Fusarium)、拟青霉属(Paecelomyces)、拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)、青霉(Penicillium)、茎点霉(Phoma)、叶点霉(Phyllosticta)、木霉(Trichoderma)、芽孢杆菌属(Bacillus)等植物内生真菌和内生细菌[39-41]。从这些微生物中又分别检测到了抗菌、抗肿瘤、抗氧化等活性，分离到了肽类、多糖类、尿囊素、异香豆素等活性化合物[37,40-42]。小柴科的桃儿七(Sinopodophyllumhexandrum)、八角莲(Dysasmaversipellis)、南方山荷叶(Diphylleiasinensia)等鬼臼类(Podophylloideae)植物内生微生物中有些菌株能合成具有抗肿瘤活性的鬼臼毒素(Podophyllotoxin)；银杏(Ginkgobiloba)的内生微生物中有些具有明显的抗氧化作用；夹竹桃科的长春花(Catharanthusroseus)的内生微生物中，镰孢霉属(Fusarium)真菌等有些能合成具有明显的抗癌作用的长春新碱(Vincristine)；天麻(Gastrodiaelata)、石斛类植物(Dendrobiumspp.)等兰科(Orchidaceae)植物中的密环菌属(Armillaria)、角担菌属(Ceratobasidium)、皮伞菌属(Marasmius)、镰孢霉属(Fusarium)、丝核菌属(Rhizoctonia)等内生真菌也生产多种生理活性物质，获得了高度的关注[17,29,37]。关于药用植物的内生微生物及其药物指向的生理活性物质的研究在我国如火如荼，从各个角度总结出来的综述也层出不穷[9,37,43-44]，在此不一一赘述。但是王剑文，谭仁祥等提出的利用内生菌寡糖诱导黄花蒿(Artemisiaannua)发根(Hairyroot)合成青蒿素(Artemisinin)的研究提示了植物内生微生物利用的一个新方向[45]，提示了植物内生微生物的作用并非一定要以微生物为主的思路，唤起我们对内生菌和宿主两者的相互作用的关注，值得借鉴。
4.2涉农的植物内生微生物研究
专著概述:
根据学术论文的长短,又可以分为单篇学术论文、系列学术论文和学术专著三种。一般而言,超过4—5万字的,可以称为学术专著。当然,照我们现在的理解,学术专著的字数可能还要更多些。编撰学术专著比发表单篇论文更具学术价值。因此,在评定职称时能够获得更多的加分和认可。详情请参阅核心期刊中心。学术论文,学术通常是指专深而系统的学问,而论文则是指研究、讨论问题的文章。因此,所谓学术论文就是在科学领域内表达科学研究成果的文章。从这一意义上理解,学术论文一般也可以称为科学论文。在理解学术论文的时候,我们还必须把握下面两层含义:其一,学术论文的范围限制在科学研究领域,非此领域的文章,不能算学术论文,如新闻报道、报告文李、散文和杂文等就不能算学术论文。其二,我们说学术论文限制在学术领域,但并非说,科学领域的所有的文章都是学术论文,而只有表达科学研究新成果的文章才是学术论文。照这样理解,科幻和科普作品就应被排除于学术论文之外了。从上述两点来看,我们可以说,科学论文的灵魂必须是科学研究的成果。科学领域通常分为自然科学和社会科学两大类,前者包括理、工专业,有物理、化学、生物、天文等学科;后者则包括文、史、哲、经等。我们美术教育属于社会科学的范畴。
编著
一种著作方式,基本上属于编写,但有独自见解的陈述,或补充有部分个人研究、发现的成果。凡无独特见解陈述的书稿,不应判定为编著。(出自经济日报出版社柳建明主编的《舆论学达辞典》727页)著、编著、编都是著作权法确认的创作行为,但独创性程度和创作结果不同。著的独创性最高,产生的是绝对的原始作品;编的独创性最低,产生的是演绎作品;编著则处于二者之间(编译类似于编著,但独创性略低于编著)。如果作者的作品不是基于任何已有作品产生的,作者的创作行为就可以视为著。一部著成的作品中可以有适量的引文,但必须指明出处和原作者。如果作者的作品中的引文已构成对已有作品的实质性使用,或者包含对已有作品的汇集或改写成份,作者的创作行为应该视为编著。
教材
教材是由三个基本要素,即信息、符号、媒介构成,用于向学生传授知识、技能和思想的材料。教材的定义有广义和狭义之分。广义的教材指课堂上和课堂外教师和学生使用的所有教学材料,比如,课本、练习册、活动册、故事书、补充练习、辅导资料、自学手册、录音带、录像带、计算机光盘、复印材料、报刊杂志、广播电视节目、幻灯片、照片、卡片、教学实物等等。教师自己编写或设计的材料也可称之为教学材料。另外,计算机网络上使用的学习材料也是教学材料。总之,广义的教材不一定是装订成册或正式出版的书本。凡是有利于学习者增长知识或发展技能的材料都可称之为教材狭义的教材就是教科书。教科书是一个课程的核心教学材料。从目前来看,教科书除了学生用书以外,几乎无一例外地配有教师用书,很多还配有练习册、活动册以及配套读物、挂图、卡片、音像带等。
编书
编书可以是自己或多人的作品或别人的作品编辑成书。
1、Google Scholar
Google推出的免费学术搜索引擎，可以帮助快速寻找学术资料，如专家评审文献、论文、书籍、预印本、摘要以及技术报告。其免费的优势对那些并不富裕或没有相关学术图书馆资源的个人，意义重大。
2、SCIRUS
Scirus是目前互联网上最全面、综合性最强的科技文献门户网站之一，Scirus引擎的信息源主要是两部分：网页和期刊。Scirus覆盖的学科范围包括：农业与生物学，天文学，生物科学，化学与化工，计算机科学，地球与行星科学，经济、金融与管理科学，工程、能源与技术，环境科学，语言学，法学，生命科学，材料科学，数学，医学，神经系统科学，药理学，物理学，心理学，社会与行为科学，社会学等。它以自身拥有的资源为主体，对网上具有科学价值的资源进行整合，集聚了带有科学内容的网站及与科学相关的网页上的科学论文、科技报告、会议论文、专业文献、预印本等。其目的是力求在科学领域内做到对信息全面深入的收集，以统一的检索模式面向用户提供检索服务。
3、Sciseek(科学探索网)
SciSeek专注于科学搜索引擎与目录，还包括一些科学杂志以及其他的工具等。
4、Find Articles(论文搜索网)
论文搜索网提供多种顶极刊物的上百万篇论文，涵盖艺术与娱乐、汽车、商业与经融、计算机与技术、健康与健身、新闻与社会、科学教育、体育等各个方面的内容。大部分为免费全文资料，检索操作简单。
5. Intute
由英国高等教育资助理事会下的信息系统联合委员会JISC和艺术与人文研究委员会AHRC开发建立，专注于教学、研究方面的网络资源。所收录的信息资源都是经过行业专家选择和评审的，从而保证了其质量。目前数据库信息已达120060条。Intute共设四大领域：科学与技术、艺术与人文、社会科学、健康与生命科学。各个领域下又包含诸多学科，以科学与技术类为例，覆盖了天文、化学、物理、工程、计算、地理、数学、地球科学、环境以及交叉学科，信息达33806条。
6、Information Bridge
Information Bridge是由美国能源部DOE下属的科学与技术信息办公室OSTI开发维护的搜索工具，提供美国能源部1994年以来研究成果的全文文献和目录索引，涉及的学科领域包括物理、化学、材料、生物、环境科学、能源技术、工程、计算机与情报科学和可再生能源等。检索功能有基本检索和高级检索两种。
7、OAIster
OAIster是密歇根大学开发维护的一个优秀的开放存取搜索引擎，收集了来自536家学术机构的590万篇文档，包括开放使用期刊的文章、工作论文、讨论文章、会议论文和学位论文。可按关键词、题名、创作者、主题或资源类型进行检索。检索结果含资源描述和该资源链接。
8、Base-Search
BASE是德国比勒费尔德(Bielefeld)大学图书馆开发的一个多学科的学术搜索引擎，提供对全球异构学术资源的集成检索服务。它整合了Bielefeld大学图书馆的图书馆目录和大约160个开放资源(超过200万个文档)的数据。
9、Vascoda
Vascoda是一个交叉学科门户网站的原型，它注重特定主题的聚合，集成了图书馆的收藏、文献数据库和附加的学术内容。
10、百度文档搜索
Information百度文档搜索可以查找以Word、PowerPoint、PDF等格式存在的研究报告、论文、课件等各类文件。它支持对Office文档包括Word、Excel、Powerpoint、Adobe PDF文档、RTF文档进行了全文搜索。搜索时，在检索词后面加一个“filetype：”来限定文档类型。“filetype：”后面可以跟以下文件格式：DOC、XLS、PPT、PDF、RTF、ALL。其中，ALL表示搜索所有这些文件类型。在搜索结果页面，点击结果标题，可以直接下载该文档，也可以点击标题后的“html版”快速查看该文档的网页格式内容。
11、百度国学
百度国学目前能提供上起先秦、下至清末历代文化典籍的检索和阅读。内容涉及经、史、子、集各部。
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1 材料选取与情境设置
1.1 材料选取关注生产生活实际
统计2009～2013年高考福建理综卷生物选考题的材料背景和情景来源，整理成表1。
选修模块关注生产生活实际，重视学生对现代生物科技的理解。2009年～2013年高考福建省理综卷生物选考题联系生产生活，与生物科技进展密切相关。背景材料来源广泛，涉及农业生产、医疗健康、畜牧养殖等方面，充分体现选考题材料联系实际的特点。选考题以转基因抗病香蕉、重组人红细胞生成素、产前基因诊断、癌症基因治疗、猪克隆技术为情境，在考查考生现代生物科技知识的同时，引导考生关注生物技术在实践上的应用，提高其生物科学素养。
新课程高考背景材料不再单一地来源于中学教材上的内容，而是从大学教材、科技进展、科技论文等处获取丰富的材料信息，呈现全新的试题背景。近五年来，高考福建省理综卷生物选考题背景材料大都来自公开发表的生物科技论文。例如，2010年试题材料选自“红细胞生成素（EPO）在中国仓鼠卵巢细胞（CHO）中稳定表达”；2012年试题材料选自“Let-7a表达质粒的构建及其对肺癌A549细胞k-Ras蛋白表达的抑制作用”；2013年试题材料选自“猪体细胞克隆胚胎体外发育过程中的凋亡规律”。以科技论文作为命题素材保证了试题的科学性、权威性和公平性，不仅体现高考能力立意，同时还提高了命题效率和命题质量。
1.2 情境设置图文结合
如何使背景材料清晰表达且不失科学性，符合高考纸笔测试要求，是试题命制的一个关注点。2009年～2013年高考福建省生物选考题均以“文字+图示”的方式呈现生物科技复杂的过程，所采用的图示为技术路线图或过程图，充分反映出《现代生物科技专题》模块工程技术的特色。选修模块3所涉及的情境注重工程技术和操作流程，所需设备、材料较多，操作过程较为繁琐，有时一项研究会涵盖基因工程、细胞工程和胚胎工程等工程领域，若单纯以文字的形式呈现背景材料无疑会增加考生阅读负担，影响考生正常应试思维，降低考试信度。若试题将大量的有效信息蕴含于图示中，可以保证提供充分、清晰明了的试题信息。
2 知识分布与能力要求
2009～2013高考福建理综卷生物选考题重视考查考生将所学现代生物科技知识应用于解决实际问题的能力。现将2009～2013年选考题知识分布与能力要求整理成表2。
2.1 强调主干知识的考查
统计2009年～2013年选考题分值比例发现，近五年来，选考题关注考生对生物学核心概念的掌握，并且基因工程知识占选考题总分的60%，细胞工程占24%，胚胎工程占12%。高考试题表现为侧重考查基因工程，兼顾考查细胞工程、胚胎工程的命题特征。
选修模块3包含五大专题：基因工程、细胞工程、胚胎工程、生物技术的安全性和伦理问题、生态工程，近五年选考题只涉及到基因工程、细胞工程和胚胎工程。基因工程、细胞工程和胚胎工程是《现代生物科技专题》的基础和重点，在现代生物科技中发挥着重要作用，是进一步开展现代生物科技研究的前提。其中，构建表达载体、PCR扩增技术等知识在基因工程的考查中占了较大比例。构建表达载体和PCR技术是基因工程的核心，应用也相当广泛，以这两者为重点进行考查，反映出选考题强调主干知识考查的特点。值得注意的是《现代生物科技专题》中所介绍的生物科技有些需要在必修模块知识的基础上展开。因此，选考题的知识考查有时会涉及必修模块内容。例如，2011年选考题对电泳带谱图的分析涉及必修模块2的电泳知识。
2.2 能力要求逐年提高
《普通高等学校招生全国统一考试大纲》对高考生物提出了四种能力的考查要求：理解能力、实验与探究能力、获取信息能力和综合运用能力。总体上看，近五年选考题注重考查理解能力、获取信息能力，能力要求较为简单，能力考查层级不高。但从纵向来看，选考题能力要求逐年提高。
例如，2012年选考题第（3）小题：“肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中 （RASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起的”。该小题重点考查理解能力和获取信息能力，需要考生在理解基因工程应用的基础上，“能从课外材料中提取有效的生物学信息，解决生物学问题”，获取信息能力层级较高。
再如，2013年选考题第（2）小题：“从基因组数据库中查询Bcl-2 mRNA的核苷酸序列，以便根据这一序列设计合成 用于PCR扩增，PCR过程第一轮循环的模板是 。”该小题重点考查理解能力，试题背景材料和题中所涉及基因工程知识的广度、深度较往年均有所提高，要求考生能深入理解基因工程的具体原理及过程。
根据裘伯川等对理解能力在理科综合能力中所处关系的研究发现，理解能力是构建理科综合能力的核心，同时也是解决问题的基础和关键因素。分析近五年高考福建生物卷选考试题，不难发现每一道试题都涉及理解能力的应用。获取信息能力是学生自主学习和可持续发展的基础，对培养学生的信息素养、获得终身学习能力具有重要意义。选考题材料来源新颖多样、信息呈现简洁直观有助于获取信息能力的考查，试题重视考查考生在新情境下，利用已有生物学知识发现、鉴别并运用获得的信息解决实际问题的能力。
3 问题设计与难度控制
3.1 问题设计严谨、灵活
问题设计是高考命题的关键一环，基于能力立意的问题设计应有助于考生启发思维，促进问题的解决。现从问题结构、问题表述和问题内容三方面，总结近五年高考福建生物卷选考题问题设计的特点：
① 选考题围绕考查的知识内容，以填空题的形式将试题情境引伸出5个具体的小问题，每个问题分值均为2分。
② 选考题在保证客观严谨的前提下，善于运用文字提示表述问题，体现问题设计的灵活性。例如，2011年选考题第（3）题：“据此判断胎儿为 （正常/患者/携带者）”；2012年选考题第（2）题：“MstⅡ是一种 酶”。这类问题表述限定了作答方向，问题指向明确。③ 问题内容与背景材料、知识考查密切相关。选考题或围绕新情境下的问题核心，延伸出多个知识点设计问题，考查考生对知识的理解能力；或通过隐藏生物技术流程中的部分操作步骤设计问题，考查考生获取信息能力。
3.2 难度控制相对合理
生物医学工程(BiomedicalEngineering,BME)是理、工、医相结合的交叉学科,崛起于20世纪60年代。现代生命科学与技术、计算机科学与技术、电子科学与技术、材料科学与技术、医学科学与技术等广泛渗透、交叉、融合,形成了生物医用材料、现代工程医学、远程医疗工程、智能医用仪器系统、人工器官等诸多生物医学工程技术新领域。BME硕士教育开创了集产学研为一体的工程技术中高级人才培养模式。近年来,BME在推动现代医学的发展中发挥着越来越重要的作用。六年前国家发改委高科技产业司就明确提出:尽快培育、壮大我国生物医学工程产业,使其成为国民经济新的增长点。
一、我国BME硕士专业学位研究生教育的现状
我国BME人才培养主要依托于工科或医科,存在培养方向多但培养人数少的问题,导致我国医院及相关企事业单位的该领域从业人员大多没有生物医学工程专业背景。BME硕士学位教育的规模过小,难以满足社会的需求,特别是融合医、理、工等学科的复合型人才更是供不应求。据中华医学会医学工程学分会副主任吕忠生调查,目前全国大约有6万家医院,生物医学工程专业人员只占医院总人数的10%,与国外30%的比例相差悬殊。作为医学工程的最大产业,国内1万多家医疗设备企业也急需该专业的高级技术人员[1]。我国BME硕士专业学位教育在2008年以前仅在理工院校中进行,每年招生不足百人,发展处于徘徊状态。鉴于我国急需大量BME中高级专业技术人才以及提升在职从业人员的专业水平的需要,开展BME硕士专业学位教育已刻不容缓。
二、在医学院校开展BME硕士专业学位教育的探索和实践
为使BME硕士专业学位教育有新的突破,国务院学位办尝试在医学院校开展该项教育。我校生物医学工程专业起步早、基础好,特别是近年来从海内外引进了一批优质人才后,形成了一支医、理、工相融合的师资队伍,具备了较好开展BME硕士专业学位教育的条件和能力。2008年我校成为开展该项教育的首所医学院校,并力求在医疗器械与医院信息管理、基因工程与基因药物方向做出特色。
(一)依托医学院校的优势资源,分层次招生宣传,吸引优质生源。近年来医院得到了快速地发展,医师的学位层次提升较快,而医技人员的学位层次相对滞后,对该学位教育具有较大的需求。作为医学院校,要善于发挥拥有诸多的附属医院和教学医院的优势,分层次招生宣传,以取得良好的效果。即先向医院主管领导介绍BME硕士专业的学位特点;再请各医院相关部门协助开展招生宣传;同时向医技科室寄送简章并进行网络招生宣传;还可尝试对相关企业开展定点招生宣传。2008年我校首届招收学生21人,招生人数列全国第二位,录取考生的GCT成绩百分位平均值81.17,列全国第四位,生源质量和数量较为理想。
(二)明确培养目标,创新教育体制,构建良好的BME硕士专业学位培养体系。全国工程硕士专业学位教育指导委员会起草的《生物医学工程领域工程硕士专业学位标准》,明确规定BME硕士专业学位培养目标是理论基础扎实、工程实践能力强、综合素质高,并具有一定创新能力的应用型、复合型高层次工程技术和工程管理人才[2]。
1.创新运作机制,合理设置培养年限和培养方式。攻读BME硕士专业学位的学生多为业务骨干,学习时间较紧张,故我校实行弹性学制3-5年,且课程学习采取周末上课,实践学习结合其实际工作在其所在单位副导师指导下进行,使学生能结合工作并学有所用,以提高其学习积极性和主动性。
2.充分利用医学院校的特色资源,科学合理地设置课程。课程结构关系到研究生的知识结构[3]。BME是运用工程技术的理论与方法解决医学中的实际问题,因此其课程设置应在现代医学理论和工程技术理论及相关学科的基础上,科学合理的设置课程[4]。我校规定学生课程必须修满35个学分,根据不同专业方向设置课程,其中医学类约10个学分,工程类约10个学分,公共类约10学分,自然科学进展研讨5学分。
3.建立双导师制,加强实践能力的培养。BME硕士专业学位的培养实行正、副导师共同指导制(简称双导师制)。正导师负责学生的课程学习、论文选题、中期考核、学位论文指导,并对学位论文的质量负责。副导师选聘学生所在单位的具有高级职称的技术人员担当,负责学生的工程技术实践能力培养,论文选题,论文实践部分的指导。两位导师经常交流情况,互相配合,共同指导,保证其培养质量。实践教学是该学位培养的重要环节,鼓励其结合自己的本职工作进行。我校要求学生进行不少于一年的实践计15学分,通过考核计5学分,共计20学分。
4.加强中期考核,严把论文质量关,保障培养质量。中期考核是在学生进入论文实施阶段后,对其政治思想表现、课程学习和科研能力等方面进行的一次综合考核和评定。其目的是评价学生入学以来的学习成效,及时发现和纠正其培养过程中存在的问题,督促其达到规定的学位要求;对少数不宜继续学业者尽早做出妥善处理。我校在第四学期初对学生进行中期考核。学位论文是综合衡量培养质量的重要指标,应在导师的指导下,综合运用科学理论、方法和技术解决工程实际问题,或创造出一定的经济或社会效益,并有一定的理论基础,具有先进性、实用性[5]。我校规定学位论文评阅实行校内学科专业组评阅和校外盲评相结合的方式进行,实践证明这种方式行之有效。
三、在医学院校发展BME硕士专业学位教育的建议和思考
1.加大宣传力度,提高对BME硕士专业学位的认可度。BME硕士专业学位设立的时间不长,各医院的领导和广大医技人员对该学位比较陌生,因此需要招生学校做好充分细致的招生宣传,提高社会对该学位的认可度。当然,培养出优质BME硕士专业学位毕业生,才是提高社会认可度的关键。
关键词： 专利授权 知识产权 负面影响
1．时机不当对专利授权带来负面影响
科技成果一般采用验收、报奖、登记制度及学术论文为评价方式，其中科技论文是由科技工作者对其创造研究进行理论分析和科学总结的智力成果，科技论文的数量及出版社等级用来评定科技人员的职称，且作为考核科研机构的标准，科学技术人员做出其研究后，都希望成果尽早发表；而将科研成果申请专利是将成果以知识产权的法律形式保护起来。广大科技人员有积极性的同时，往往忽略了一个问题：即将科研成果以知识产权的法律形式保护起来的时间。一般情况下在专利申请之前，该论文的发表对专利申请的审查会带来负面影响，即与专利申请同一主题的论文，在申请日前一旦发表公开就会破坏专利申请的新颖性，导致因该专利技术失去了新颖性而不能取得专利权，即申请专利的公开使其成为公有技术，影响了以后的专利授权，从而丢失了本来能得到、应得到且想得到的成果。常忽略的另一个问题是：也有些科技人员不太清楚自己研究成果，只知道抢先一步，尽量做到及时、准确和完整，不知道申请专利，从而因“拱手奉献”，与他人“共享”丢失了可以法律形式明确的，本来属于自己的成果。
2．相关法律依据
根据《著作权实施条例》第2条规定，我国著作权所称的作品是指文学、艺术和科学领域内，具有独创性并以某种有形形式复制的智力创造成果。其独创性不同于新颖性，同一思想内容的题材，由两个作者同时完成，只要是各自独立从事了智力劳动，两部作品都可以受到法律保护。
《专利法》所称发明，是指对产品、方法、或者其改进所提出的新的技术方案；实用新型是指对产品的形状、构造或者其结合所提出的适于实用的新技术方案。《专利法》第22条指出，授予专利权发明与实用新型应具备新颖性、创造性和实用性。其新颖性，是指申请日以前没有同样的发明或实用新型在国内外出版物上公开发表过，在国内公开使用过或者以其他方式为公众所知，也没有同样的发明或实用新型由他人向专利局提出过申请并载在申请日以后公布的专利申请文件中。
通过上述有关法规可看出科技论文与专利均属知识产权保护范畴，即权利人就同一项新成果即可获得著作权保护，也可申请专利权保护，但对其后的专利申请有抵触作用。然而，提请科技人员注意的是：虽然专利申请前对专利申请有负面影响，但申请专利并不影响申请后论文的在后发表，从专利新颖性的角度考虑，慎重选择时间，确保的时间要在专利申请之后，即申请专利在先，在后才是权宜之计，因为这样做专利的新颖性和创造性不受影响，也避免了实用新型（不实审）专利事后被无效的可能使科研成果得到著作权和专利权双重保护。
3．案例分析
某科技人员不太清楚《专利法》有关规定，科技成果完成后，将其成果部分内容抢先发表，之后又就同一主题申请专利。结果其内容发表破坏了专利新颖性和创造性，险些未获得权利权。专利号为ZL03111531.4的发明专利（名称：大蒜素和大蒜油环糊精衍生物包合物及其制备方法）在发明专利审查阶段，审查员提出审查意见：“对比文件1（该发明人（申请人）的论文）和对比文件2将“大蒜素和大蒜油环糊精衍生物包合物及其制备方法”等技术公开，认为蒜素和大蒜油环糊精是衍生物包合物中的一种，其区别仅在于本申请选择羟丙基-β-环糊精是环糊精衍生物作为包合材料，这种区别是所属技术领域中的一种公知常识，可在对比文件的基础上结合公知常识获得，其效果是可预料到的，结论是不具创造性。发明人（申请人）为了不丧失专利权利，只好缩小了权利的保护范围。根据实施例中唯一没有在论文中公开的优选方案对与权项作限定性修改形成新的权利要求，申请人在答辩中说：“一般环糊精衍生物对蒜素和大蒜油的包合物在水中的溶解度为8g/mL，而羟丙基-β-环糊精衍生物作为包合物其在水中的溶解度能达到75g/mL。这一点对大蒜素和大蒜油液体制剂有至关重大的作用，本发明所述羟丙基-β-环糊精衍生物能够带来峰值，从现有技术中公开的宽范围中，有目的地选出现有技术中未提到的窄范围或个体的发明，能够取得预料不到的技术效果，符合《审查指南》第二部分第四章4.3节有关选择发明思想，所以本发明具有创造性。”审查后申请人虽然取得了专利权，但保护范围仅一个最佳方案上，即保护范围很窄。
4．和专利申请应注意问题
4．1做好技术保密
技术秘密、科技论文作品和专利均属于人类智力活动成果，属知识产权保护内容。根据《中华人民共和国反不正当竞争法》第十条和《国家工商行政管理局关于禁止侵犯商业秘密行为的若干规定（98）修订》》第二条定义：商业秘密，是指不为公众所知悉，能为权利人带来经济利益，具有实用性并经权利人采取保密措施的技术信息和经营信息。其中的技术信息是指秘诀、工艺流程、设计图纸、技术情报等科学方面的专有知识。
不论是还是专利申请都涉及保留技术秘密的问题。两者均要公开进入公共领域，会被公众所利用。因此，基于知识产权战略和技术秘密两方面的考虑，可在适当保留技术秘密前提下对其成果进行公开。当然要在其发表的论文具有独创性或申请的专利能授权基础上再进行战略性取舍，这是广大科技工作者应该重视的问题。
另外，从知识产权保护角度来说，不是任何研究成果都要且申请专利的，比如美国“可口可乐”配方的保密，至今已有100多年，如果申请专利或是，这一技术早以公之于众了。
发明人对自己的新技术是选择技术秘密或专利保护取决于各种因素，发明人可以综合考虑以上各点，做出自己选择。如果某种技术他人很难发现，作为技术秘密保护会带来更多利益。
4．2选好论文及专利申请立题角度
如果论文急需发表，来不及申报专利，为避免上述案例问题发生，要保证论文内容不要和专利保护方案重叠。论文可重点对成果进行理论分析和取得的应用效果上进行科学总结，回避专利将要保护的结构和方法内容。只要论文立题角度和专利方案不发生重叠，可先，因其内容不影响在后专利申请新颖性，专利也会因符合专利法而授权。
【关键词】动物细胞工程实验 教学改革 研究型大学
【基金项目】由宁夏回族自治区高等学校细胞生物学精品课程（2012年），宁夏回族自治区细胞生物学双语教学示范课程（2011年），宁夏大学细胞生物学精品课程（2009年）资助。
【中图分类号】G42 【文献标识码】A 【文章编号】2095-3089（2013）06-0244-02
1.引言
宁夏大学是宁夏回族自治区人民政府与教育部共建的综合性大学，国家“211工程”重点建设高校，是我国西部重点建设的一所学校。为把宁夏大学建设成为区域特色鲜明、服务地方能力较强的高水平教学研究型大学，提高办学质量，推进产学研创新，尤为重要。而生物技术专业系宁夏大学生命科学学院重点建设专业。生物技术专业不仅仅是一门新兴学科，更是一门实验性、实践性非常强的学科，为了更好地适应市场经济的社会大环境，对该专业人才培养的要求不仅仅是要有较深厚的理论基础和较宽广的知识面，更要有较强的实验、实践和创新能力。而高素质创新人才的培养则是从事生物技术专业人才培养教育工作者急需探讨和解决的问题。
动物细胞工程实验技术是生物技术专业的一门非常重要的必修课之一，它充当了基础知识与生产实践相结合的桥梁[1]，在生物医药、动物品种改良等方面具有重要的应用价值。该课程的学习对于全面深入掌握生物技术领域中的基本理论和技术具有不可忽视的意义，因此，作为一门专业主干课其实践性和应用性很强。
但其内容繁杂，技术难度大，随着细胞工程实验技术的突飞猛进，应用细胞工程技术可以在细胞和分子水平上改良现有生物品种以及培育新品种[1]，所以，紧密联系生产实践和科学研究最前沿为动物细胞工程实验课特色。而原有的课程体系、实验教学方法等已不能满足日新月异的社会发展需求。因此，要想使同学们真正掌握这门课程的要领，以适应研究型大学的改革需求，培育出高素质的复合型人才，及时更新动物细胞工程实验技术专业课程的教学内容，改进教学方法与手段，对于提高教学效果、培养高素质的专业人才具有十分重要的意义。借鉴于此，本文对该课程的教学改革进行了如下的探讨。
2.教学形式
2.1实验方案设计采取项目申请立项制
在进行《动物细胞工程》理论课程教学时，结合实验需求，安排学生结合自己的兴趣爱好，设计实验方案。比如，在讲述完毕动物细胞与组织培养课程时，要求学生自由组合，结合理论课程设计一个完整的动物细胞系的实验方案。具体内容包括，实验材料的准备以及经费预算，细胞培养相关溶液的配置、细胞原代培养与传代、细胞生长特性的鉴定、细胞的冻存与复苏以及污染的排除，同时包括人员组合以及实验分工。培养学生科研项目立项申请的科研素养，以适应研究型大学的改革需求。
在项目申请中，除了要求学生理清技术路线外，重点要求学生凝练出项目目标以及拟解决的关键问题以及对实验过程可能遇到的问题进行分析和讨论，提出解决方案，提高学生分析问题、解决问题的能力，培养了学生独立思考解决问题的积极性；同时，通过对实验人员组合和分工的训练，培养了学生团队意识以及互助合作的精神，更为重要的是，克服了传统教学中，所有实验器仪器和材料均由老师准备，而学生只要按照老师指定的实验步骤逐一模仿去做的单一模式的弊端。
项目申请撰写完毕，由教师修改指出实验原则的缺陷，督促学生加以改进，然后，结合学生自由组合分组，进行幻灯片制作，模拟项目立项申请答辩进行交流汇报，由同学和老师充当项目评议专家，重点指出实验设计上的不足，这样在讨论中让学生对自己的实验目的和要求更加明确，实验思路更加清晰[2]。
2.2实验操作注意事项
通过模拟项目立项申请答辩通过后，经教师修改后即可进入实验操作。学生按组进行实验材料、器材的准备，包括对所需器具的清洗和灭菌处理。同时，按实验所需配制试剂，按照实验方案设计进行实验。试验操作除了注意提高无菌操作意识之外，注意生物废弃物的合理排放以及学生自身的安全，树立生物安全意识。在整个实验过程中，实验室均采取开放式的原则，学生可以根据实验需求进入实验室进行实验以及记录观察等。
2.3实验报告论文撰写及问题分析与总结
实验报告论文要求学生严格按照科技论文的格式书写代替传统的实验报告形式。比如建立细胞系实验，在撰写科技论文时要求学生注意以下几个方面：引言部分要求学生除了简单介绍实验原理和目的之外，重点比较动物细胞原代培养与细胞纯化的不同方法，同时写出所选方法的科学理论依据。其次，结果与讨论为重点部分，此部分内容要求学生结合理论知识对实验结果进行分析和总结归纳，分析在实验过程中所遇到的问题，并且分析原因，提出改进办法[2]。这种科技论文的形式取代传统的实验报告，有助于学生撰写科技论文的写作，提高了学生的科研素养以及分析问题解决问题的能力，为创新实验、毕业设计的实施奠定了扎实的基础。实验结束后，对此次实验结果进行归纳总结。对所出现问题中，比较典型的进行详细分析。
3.教学方法
3.1 加强多媒体教学，提高学生学习兴趣
发挥信息化优势，弥补传统教学缺陷，是动物细胞工程实验信息化教学改革的有效途径。动物细胞工程实践性很强，涉及的实验内容很多，如动物细胞的原代培养、传代培养以及冷冻保存技术、细胞融合与单克隆抗体制备技术、动物克隆与核移植技术、胚胎移植技术、胚胎切割技术、转基因动物技术等的一些基本技术操作，一一安排实验或者实践实习，在高等学校不切合实际。所以采用多媒体教学非常重要，通过图片、录像、实验专题片弥补一些实验无法开设的缺陷，开拓学生的眼界。
笔者在动物细胞工程实验的教学中，积极收集多媒体课件、图片、录像等，将新收集的一些图片、照片等添加到课件中，尽量多用图片或照片提高学生的学习积极性。同时利用网络教学平台，将国内外新发表的动物细胞工程实验相关的论文、实验网站等上传到网络系统，供师生学习和科研参考。
3.2 加强学科团队建设和年轻教师的培养，提高授课水平和教学质量
动物细胞工程整合了众多学科的相关内容，跟踪现代生命科学技术的前沿领域，教学难度较大，需要多学科的基础知识。所以，必须有一支结构层次合理、理论知识扎实、专业技能精湛的教师队伍，才能满足教学工作的需要。因此，重视培养教师的治学态度、授课艺术、实践经验以及对现代教育技术手段的应用能力在很大程度上决定了教学的质量和效果。
3.3 重视硬件和平台建设，注重学生动物细胞工程实验实际应用能力和研究创新能力的培养
随着生命科学的发展，对科研条件的要求标准也在提高。动物细胞工程实验是生物技术专业教学、科研的重要技术支撑。所以重视动物细胞工程实验研究平台的建设，对于生物技术学科的发展及我校科研实力的提升具有重要意义。
目前我校西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室，基本满足现有教学和科研的需要。根据学校的优势学科建设情况，开设了细胞系建立等实验内容，以培养学生的实验动手能力，熏陶和培养学生进行科学研究的基本素养。
4.教学质量和效果的评价
通过对动物细胞工程实验教学的改革初探，取得了一定的效果，主要表现在[2-4]：
4.1教师授课的效果
通过近几年的努力，我校细胞工程实验教学的教学团队不断壮大，教师准备充分，授课艺术提高，学生对教师的评价满意度也逐年增加，取得了比较好的教学效果。
从学生上课听讲热情、上课跟随老师的反应、互动以及在实验过程中的动手操作能力、操作细节等方面的观察，教学效果比较理想。
4.2学生的知识掌握情况
通过教学改革，学生的学习兴趣明显提高，除了对理论知识有较为扎实的掌握，更为重要的是，学生能够将理论知识应用到实验实践过程中去，同时，能够运用所掌握的知识分析实验过程中所遇到的问题，即分析和解决问题的能力有所提高。大学生创新实验的设计水平明显提高，学生查阅资料、利用细胞工程的理论和知识解决问题的能力有了显著提高。比如在实验方案设计时，要求学生自己设计实验，通过立项申请的方式确定实验方案，人员比例以及经费预算等各个环节，这就要求学生在实验方案设计的同时，必须理清方案设计的理论依据，同时也培养了学生充分利用网络资源查阅资料、阅读文献的能力。
4.3学生的实验技能掌握情况
学生在开展实验前必须充分应用理论知识和已掌握的技能，完成整个实验，包括实验的设计、实验操作的步骤、仪器和材料的选择、人员分工的协调、结果的分析与讨论以及论文的撰写等。均要求学生要有严谨的科学研究态度，调动了学生的主动性，对于学生科学素质的培养以及综合能力的提高大有裨益。比如，在实验结束后要求学生按照科技论文的形式撰写实验结题报告，训练了学生撰写科研论文的基本功，为学生毕业设计打下坚实的基础，同时使学生具备了从事科学研究的基本素养。
4.4其他方面
通过对动物细胞工程课程的开设，有效的培养了学生的动手能力和逻辑思维能力，一方面，加强了教师和学生之间的交流，增进了师生之间的感情；同时，自由组合立项申请的方式，增强了学生的责任心，提高了学习兴趣，而在实验过程中各同学之间相互协调合作，增进了同学之间团结、互助的精神，团队意识增强。另一方面，这种立项申请的改革实验教学模式，反映了当代科学技术的发展水平，涉及的知识面广。这就要求教师不仅要有本学科扎实的理论基础、较好的实验技能，还要加强业务学习，不断更新自己的知识，因此，提高了师资队伍的业务水平。
5.存在的问题与改进措施
5.1实验室配套设施尚需进一步完善
由于实验以自由组合的立项申请的形式开展实验，对仪器设备需求加强。
5.2加大与科学研究相结合的力度
实验要求学生自己准备实验材料和试剂，与教师统一准备相比较加大了实验费用开支。因此，加大与科学研究相结合的力度尤为重要。同时，科研和学科的发展密切相关，科研内容又可促进实验教学内容的更新以及教学质量的提高。鼓励学生直接参与教师的科研课题中去，是培养学生自主学习和创新意识的有效途径之一。
如果教师在教学中引用自己的科研成果，以解释实验中的相关问题，使课堂与科学研究的距离拉近，引起学生对该学科的兴趣和更大重视。
6.结语
实验教学与课堂理论教学相比，更有利于培养学生的创新能力。而要真正上好实验课并不是一件容易的事，还有很多问题需要不断地探索和实践。因此，需要教师不断地提高业务水平的同时，更要以极高的热情、更多的精力投入到教学实践过程中。
参考文献：
[1]赵会敏，生物技术专业动物细胞工程课程的改革与思考[J]，广西大学学报（哲学社会科学版），2011，6：172-173.
[2]陈晓明，张建国. 动物细胞工程开放实验教学模式探讨[J]. 现代农业科技，2010，8：23-24.
[3]周俊，刘明，曹海平.浅谈开放式实验教学的优点[J].中小企业管理与科技，2010（1）：107-108.
[4]韩宗先，方平，向邓云.《动物学》开放式实验教学的实践与探索[J].畜牧与饲料科学，2009（9）：135-138.
作者简介：
关键词：临床生物化学与检验；肝功能；综合性实验；急性肝损伤
中图分类号：G642.0；R2 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2016）09-0240-02
临床生物化学与检验（clinical biochemistry and biochemical test）是用化学和生物化学技术检测人体标本，了解人体生理、病理状态下物质组成和代谢，为临床疾病的预防、诊断、治疗和预后提供依据的学科，其核心是向临床提供准确、有效、及时的检验报告[1]。它是生物化学的重要组成部分，是医学检验专业的主干专业课程，同时也是临床医学专业学生《实验诊断学》课程的重要内容。
肝胆疾病的生物化学诊断是医学检验专业《临床生物化学与检验》的主要内容。肝脏是人体内最大的、功能最多的实质性腺体器官，被喻为人体最大的化工厂。它参与体内消化、代谢、排泄、解毒和免疫等过程，是具有重要而复杂代谢功能的器官。为检查肝脏功能完整性、有无疾病和损伤，从不同角度设计了许多检查肝脏的实验项目，临床上常将肝脏实验室检查统称为肝功能检查。肝功能实验检查的目的是通过某些生物化学指标检测，间接评估肝脏功能，为临床医生正确地做出肝胆疾病诊断、病程检测及疗效观察等提供重要参考信息，可选择的肝功能指标很多，了解每项检查的临床价值，对评价肝脏功能非常重要。
急性肝损伤（acute liver injury）一般由短期接触较大剂量肝毒物或肝脏功能不全时接触某种肝毒物引起，病理改变常见于肝细胞坏死、脂肪变性、胆汁淤积等。多种因素如化学性肝毒物、病毒感染、免疫性因素、乙醇等均可引起急性肝损伤，甚至肝功能衰竭，其防治研究一直是热门课题[2-5]。本次综合性实验主要在医学检验专业本科学生中开设，其主要内容通过建立急性肝损伤模型，选择2～3个反映肝细胞损伤状况的指标进行检测。
一、实验目的
主要包括熟悉文献查阅方法、实验设计和综合报告的撰写格式；熟悉生物材料样品采集和取样原则及一般要求；掌握肝功能检验项目的选择原则、肝胆疾病的临床酶学分类、转氨酶分类及其检测意义；掌握ALT、AST主要测定方法原理、操作步骤、注意事项；初步掌握检测数据统计与分析方法。
二、实验课程基本流程
（一）实验设计
本阶段主要充分利用网络资源，使学生熟悉文献查阅方法。通过查阅文献资料，首先了解目前国内外研究中常用的急性肝损伤模型，选择一种化学物质建立急性肝损伤模型，确定染毒剂量、方式、生物标本的采集时间；确定实验动物、性别、年龄及组别；列出所需试剂与器材清单；样品预处理方法；检测指标、检测方法的选择；实验结果的统计与处理以及论文撰写。最终以论文开题的形式在班级展示，并由专业课老师给予点评和指导，提交一份开题报告。
（二）课题实施
此部分为本次综合性实验的主体部分，包括动物的选择、染毒、生物样品的采集、预处理、分析检测、数据的统计分析、论文撰写等。在这个阶段，要求学生需要熟悉或掌握的知识点较多。比如：理论部分要求掌握：（1）肝功能检验项目的选择原则；（2）肝胆疾病的临床酶学分类；（3）转氨酶分类及其检测意义；（4）ALT、AST主要测定方法；（5）连续监测法及赖氏法测定ALT、AST的原理、注意事项。操作部分：（1）试剂的称量与配制；（2）实验动物的抓取方法、编号标记、分组原则；（3）实验动物的染毒技术、生物样品的采集、预处理；（4）赖氏法测定ALT、AST的操作步骤；（5）数据的处理、统计分析以及论文撰写等。
（三）数据分析和撰写报告
一个完整的临床生物化学检验过程，包括样品采集、样品预处理、分析测定、数据处理和撰写报告五个步骤。在此过程中，每个步骤均可能产生实验误差，如所选取的样品是否具有代表性、样品预处理方法选择是否合适、分析方法及仪器和器皿、化学试剂和实验用水等，还包括检验人员的技术水平和实验环境。为了保证实验室提供的分析数据准确可靠，首先必须对上述各方面实施严格的质量管理措施，尽量减小和避免实验误差；其次要求同学们掌握生化检测数据（特别是组间数据）的表示方式；在统计分析时，要求掌握两组或多组间数据的比较方法，正确应用三线表；最后，熟悉科研论文的书写格式，以小论文的形式把此次综合性实验的结果展示出来。
三、考核方式
本实验采取分组教学，为最大限度调动同学们的积极性及团队协作精神，保证每一位同学都能动手操作，安排2～3人一个小组，各组可选择不同的急性肝损伤模型。
（一）考核方式及要求
1.开题报告。可以包括以下内容：
（1）背景：急性肝损伤简介，常见的引起肝损伤的化学物质，目前急性肝损伤常用的动物模型有哪些？可以采用哪些指标来评价急性肝损伤？
（2）实验设计：根据文献，选择一种化学物质建立肝损伤模型，并对相应的检测指标进行检测；介绍所选择的检测指标、检验意义、检测原理、操作步骤及注意事项。
（3）实验过程中的质量控制、实验结果的统计与分析、经费预算等。
2.以实验小组为单位进行综合技能考核。要求标准曲线线性符合要求，成功建立急性肝损伤模型。
3.每组以小论文的形式提交一份实验报告。报告的基本内容包括：研究现状及意义、实验动物选择、材料与方法、结果分析、讨论、参考文献等。论文撰写要求格式准确、条理清晰、内容真实。
（二）成绩评定
实验设计书写占总成绩的20%，实验操作与技能考核占50%，科研论文占30%。
四、讨论
目前医学院校本科生开设的实验教学多为验证性实验，学生只参与完成整个实验的一小部分，缺乏自主设计的综合性实验，不能体现创新性[6]。因而，开设“设计性综合实验”不仅可以强化学生对多种实验技能的掌握，还能够调动学生的组织协作能力、求知欲和探索精神。
临床生物化学检验是一个连续的过程，包括标本的采集、运送、确认、处理、分析检测、数据的处理、检验结果的审核、检验结果报告及结果解释等[7]。为使学生更好地理解理论知识并联系临床应用，同时提高学生学习的兴趣，将临床生化检测实验设计成相对连续完整的从肝损伤模型建立到生化指标检测的综合设计性实验，使学生能够观察疾病的发生发展，在实践中激发对疾病发病机制的思考。
建立疾病动物模型是研究疾病发生发展规律及开展防治研究的常用方法。相对肥胖大鼠血糖血脂的检测综合性实验而言，建立急性肝损伤模型的技术比较成熟、实验周期短、易操作，并且重复性也较好。本实验课程从查阅文献、课题设计、模型建立、取材及检测再到数据分析及论文撰写，通过整个流程即强化了学生对临床生化多种实验技能的掌握，又培养了学生独立动手能力、善于发现问题的能力及处理实验数据、分析实验结果的能力。我系自在检验医学系本课学生开展急性肝损伤综合性实验以来，带领学生对各种经典的肝损伤模型（比如四氯化碳、对乙酰氨基酚、异烟肼等）进行了验证，此外，积极开展重金属导致的急性肝损伤模型研究，并鼓励其总结部分研究结果写成科研，极大地调动了学生的积极性，对开展科学研究的思路也有了一个基本的认识，为以后的临床和科研实践打下基础。
如前所述，临床生物化学和生物化学检验是一门高度综合性的应用科学，课程涉及多学科理论，课程的实践性、应用性强，对学生的实践性和操作性要求强。因此，在开展实验过程中也遇到一些问题：比如，在开始综合性实验之前，要求学生需要有一定的基础知识和数据分析能力。而学生的知识储备、实验基础技能均比较薄弱，在文献查找、阅读、实验设计、实验操作及数据分析与统计上均存在很多不足，因此实验不能太复杂，此外要合理安排综合性实验教学时间（灵活、机动，不能与考试时间相冲突），确保实验顺利进行。
参考文献：
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[3]梁英丽，章叶发，张程，等.褪黑素减轻对乙酰氨基酚的急性肝脏毒性[J].安徽医科大学学报，2013，48（2）：138-141.
[4]刘晓倩，张志辉，张程，等.单次乙醇暴露对小鼠肝脏甘油三酯合成的影响[J].安徽医科大学学报，2013，48（4）：372-374.
[5]石嫦娥，陈熙，张程，等.SREBP-1c激活在细菌脂多糖引起小鼠肝脏脂质沉积中的作用[J].安徽医科大学学报，2011，46（12）：1227-1230.
论文关键词：山核桃，碳源，体细胞胚
山核桃(Carya cathayensis Sarg.)隶属于胡桃科山核桃属，别名小核桃、小胡桃、昌化山核桃。山核桃属植物分布于我国和北美，共18种2亚种，我国分布6种，即山核桃Carya.cathayensis、大别山山核桃C. dabieshanensis、湖南山核桃C. hunanensis、贵州山核桃C.kweichowensis、越南山核桃C. tonkinensis及C. poilane。6个种中以山核桃人工利用时间最长、经济价值最高，已成为产区农民主要的经济来源。长期以来，山核桃主要采用实生与嫁接繁殖。实生繁殖难以保持品种的优良特性[1~2]。山核桃体细胞胚（简称“体胚”）具有完整的两极结构生物论文，能一次再生完整植株论文格式范文。为了满足生产对良种苗木的需要，山核桃的离体繁殖技术得到了较深入的研究。胡桃科中，虽然核桃Juglans regia L.[3]，美国山核桃Carya illinoensis (Wangenh.)K.Koch[4~5]等体胚诱导已有成功报道，但山核桃的组织培养仍停留在愈伤组织[6]及不定芽诱导[7]的阶段。本实验以山核桃幼胚为外植体，通过不同碳源对体胚诱导的影响，来探讨适合山核桃体胚发生的碳源种类与浓度，为山核桃体胚发生体系的建立提供实验平台。
1 材料与方法
1.1 外植体材料的处理
7月上旬于浙江省临安市板桥乡罗塘村采山核桃幼果，带回实验室中剪去花柱及柱头，洗涤剂洗净表面后，75%酒精涮洗30s，自来水冲洗干净，用0.5%次氯酸钠溶液加少许吐温-20，抽真空20 min，无菌水冲洗5-6次生物论文，无菌滤纸吸干表面水分，超净工作台上去除果皮和种皮后取出完整的幼胚作为外植体备用。
1.2 不同种类碳源对山核桃胚性愈伤组织诱导的影响
以蔗糖、葡萄糖、海藻糖和麦芽糖（浓度：30g. L-1）5个不同碳源作为5各处理，各处理中培养温度：(25±2)℃，暗培养2d后，放入光暗周期为16h/8h，光照强度：2400-2600lx，pH5.7，琼脂(agar type A)浓度：0.8%。每处理接种幼胚20个，重复3次，接种后前3d外植体每天转接1次，以后每周转接1次。6周后统计诱导率、褐化率。并根据诱导率和褐化率来优化山核桃胚性愈伤组织诱导的最佳碳源种类。
1.3 不同浓度葡萄糖对山核桃胚性愈伤组织诱导的影响
根据实验结果，进一步对最佳碳源即葡萄糖的浓度进行测试，设计单因子实验，浓度采用10、20、40、60、80g?L-1。每处理接种幼胚20个，重复3次生物论文，接种后前3d外植体每天转接1次，以后每周转接1次。6周后统计诱导率、褐化率，获得最好的胚性愈伤组织诱导的葡萄糖浓度。
1.4 不同碳源种类和浓度对体细胞胚的诱导影响
以蔗糖、葡萄糖、海藻糖和麦芽糖（浓度：30g. L-1）5种不同碳源作为5各处理，各处理中培养温度：(25±2)℃，光照培养，光暗周期为16h/8h，光照强度：2400-2600lx，pH5.7，琼脂(agar type A)浓度：0.8%论文格式范文。每处理接种20块由幼胚产生的的胚性愈伤组织，重复3次， 3周后统计诱导率、褐化率。并根据诱导率和褐化率得到最优的诱导山核桃体细胞胚碳源种类。
根据得到的最佳诱导体细胞胚碳源进行浓度测试，进行单因子试验，浓度分别为15、30、45、60、75g?L-1。每处理接种20块由幼胚产生的愈伤组织，重复3次。3周后统计诱导率、褐化率，筛选最佳胚性愈伤组织诱导体细胞胚的碳源浓度。
1.5植株再生 将山核桃成熟体细胞胚转至WPM基本培养基中置于光下培养（光照强度：2400-2600lx）。
1.6 数据处理
实验采用单因子设计生物论文，应用SigmaPlot8.0和Spss16系统软件对实验数据进行统计分析并进行显著性分析。实验数据均为3次重复的平均值。诱导率=（诱导出愈伤组织或体细胞胚的外植体数/接种的外植体数）×100%，褐化率=（褐化的外植体数/接种的外植体数）×100%。
2 结果与分析
2.1 碳源对山核桃胚性愈伤组织发生的影响
实验发现，在对山核桃胚性愈伤组织的诱导过程中，葡萄糖的诱导效果明显优于蔗糖、海藻糖和麦芽糖，诱导率达58.7%，褐化率最低，仅为23.3%。进一步进行方差分析和多重比较，葡萄糖与蔗糖、海藻糖及麦芽糖之间存在极显著差异(图1)。相同培养条件下，海藻糖和麦芽糖诱导过程中，幼胚出现玻璃化现象，形成的愈伤组织较少论文格式范文。蔗糖处理下愈伤组织诱导率虽然比海藻糖和麦芽糖高，但愈伤组织继代培养后不易增殖，且玻璃化现象比较严重(图2)。幼胚在含葡萄糖的培养基中培养，2周后开始出现乳白色愈伤组织，4周后出现乳白色至淡黄色愈伤组织生物论文，6周后胚性愈伤组织诱导率达到最高(图3，图版Ⅰ-1)。
