作者：连秀丽 宋婵婵 贺琳 程霄翔 陈俊明 杜娟 ...pin1胡桃醌实时定量聚合酶链反应免疫荧光小鼠
摘要：目的观察Pin1在小鼠植入前胚中的定位分布及其抑制剂胡桃醌（Juglone）对小鼠植入前胚体外发育的影响。方法免疫荧光染色观察不同发育阶段植入前胚中Pin1的分布；收集小鼠1-细胞胚，以KSOM培养液为对照组，以培养液中添加有不同浓度的Juglone为实验组，观察各组1-细胞胚体外发育情况；Real—timePCR检测体外发育2-细胞胚内干细胞转录因子（Sox2、Oct4、c—Myc和Klf4）mRNA表达水平。结果小鼠不同发育阶段植入前胚中都存在Pinl的表达，胞质和胞核内均有分布，且核内荧光着色明显比胞质强；10μmol／L和25μmol／L胡桃醌持续作用93h（注射人绒毛膜促性腺激素后27h～120h）使1-细胞胚阻滞于2-细胞阶段，极少能过渡至4-细胞胚（P〈0．01）。25μmol／L胡桃醌短时间作用18h（注射人绒毛膜促性腺激素后27—45h）同样使1-细胞胚发育阻滞于2-细胞胚（P〈0．01）；25μmol／L胡桃醌组2-细胞胚内Sox2 mRNA表达水平低于KSOM组（P〈0．05），而Klf4、c—Myc和Oct4mRNA表达水平无明显变化（P〉0．05）。结论小鼠1-细胞胚之后，Pin1主要定位在细胞核内，提示其可能参与细胞转录活动。且Pin1抑制剂（胡桃醌）能使2．细胞胚至4-细胞胚过渡率明显降低，并使干细胞转录因子Sox2 mRNA表达下调，提示Pin1在小鼠植入前胚早期发育阶段具有一定作用，其参与调控合子基因组激活与干细胞转录因子Sox2有关。
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