作者：朱恺 顾永昊 孙思勤人晶状体上皮细胞细胞增殖移行rna干扰短发夹rna
摘要：目的研究RNA干扰基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）表达对体外培养的人晶状体上皮细胞（human lens epithelial cells,hLECs）增殖、移行的影响。探讨RNA干扰技术抑制LECs增殖、移行的可行性,以探索防治后发性白内障的新方法。方法设计构建含有靶向MMP-2的短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）质粒载体和不含靶向MMP-2的shRNA阴性对照质粒载体,体外转染hLECs SRA01/04,分别标记为MMP-2沉默组和阴性对照组;以等体积培养液代替转染质粒培养作为空白对照组。实时荧光定量PCR和Western blot检测转染后24 h MMP-2 mRNA及MMP-2蛋白的表达水平。MTT比色法测定细胞转染后24 h、48 h以及72 h时hLECs的增殖能力。细胞划痕实验方法测定转染后24 h、48 h时hLECs的移行愈合率。结果转染24 h后MMP-2沉默组mRNA及其蛋白的相对表达水平分别为0.202±0.075、80.856±2.165,与空白对照组1.041±0.163和184.419±3.584比较分别下降了80.6%和55.1%,差异均有统计学意义（均为P〈0.05）,而阴性对照组与空白对照组相比差异无统计学意义（P〉0.05）;MTT比色法检测结果显示,各时间点的细胞增殖能力MMP-2沉默组与阴性对照组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,而2组较空白对照组均有所下降,差异均有统计学意义（均为P〈0.05）;细胞划痕实验示转染24 h与48 h后MMP-2沉默组的移行愈合率分别为（20.36±4.14）%和（23.19±5.62）%,较空白对照组（41.26±4.57）%和（67.61±8.80）%以及阴性对照组的（36.28±2.28）%和（74.48±9.21）%均明显降低,差异均有统计学意义（均为P〈0.05）,阴性对照组与空白对照组相比差异无统计学意义（P〉0.05）。结论靶向MMP-2 shRNA可以有效降低hLECs SRA01/04 MMP-2mRNA和蛋白表达,抑制细胞的移行,但尚不能认为对细胞增殖能力有影响。RNA干扰MMP-2的表达可有效抑制hLECs的移行。
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