作者：郝文博 姬芳玲 王静云 张悦 王天琪 车文...枯草芽孢杆菌乙偶姻
摘要：目的：比较来源于Enterobacter aerogenes CICC10293和Bacillus subtilis的meso-2,3-丁二醇脱氢酶（E.a-BDH和D194G B.s-BDH）活性和动力学参数,分析D194氨基酸对BDH催化特性的影响。方法：利用E.coli BL21（DE3）原核表达E.a-BDH和D194G B.s-BDH,经Hi Trap Q FF阴离子交换柱和Superdex 75凝胶柱纯化后,用MALDI-TOF MS确定其分子质量;检测NADH/NAD＋氧化还原的吸光度变化确定BDH活性、辅酶和底物的特异性、最适p H、温度及动力学参数。结果：重组表达E.a-BDH和D194G B.s-BDH是同源四聚体蛋白,基因序列有两处碱基不同（g.27A/T和g.581A/G）,其中g.581A/G导致BDH的一处氨基酸发生改变（p.D194G）。D194G B.s-BDH的活性约为E.a-BDH的2.3%,并且丧失了氧化meso-2,3-丁二醇的能力。二者均以乙偶姻/NADH为最适底物,但D194G B.s-BDH的K_m是E.a-BDH的5.63倍。结论：D194G氨基酸突变降低了BDH的活性。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
